16srdna實(shí)驗(yàn)原理(編輯修改稿)
2025-07-22 05:12 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 mol/L NaCl，充分混勻后，12000 r/min離心10 min，除去蛋白質(zhì)復(fù)合物及細(xì)胞壁等殘?jiān)?5)將上清轉(zhuǎn)移到新EP管中，加入等體積的Tris飽和酚，充分混勻，12000 r/min離心3 min，進(jìn)一步沉淀蛋白質(zhì)。(6)取離心后的水層，加等體積的氯仿/異戊醇（體積比24：1），充分混勻后，12000 r/min離心3 min，去除苯酚。(7)小心取上清，用預(yù)冷2倍體積的無(wú)水乙醇沉淀DNA，13000 r/min離心15 min，棄上清。(8)用400 μL75%的乙醇洗滌沉淀2次。(9)室溫干燥后，用40 μL 1TE溶解DNA。 (10)%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)基因組DNA。(11)提取的基因組總DNA40 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?. PCR擴(kuò)增細(xì)菌的16S rDNA(1)16S rDNA的PCR引物：采用細(xì)菌的通用引物27F和1492R (2)PCR反應(yīng)體系為（20μL）： 滅菌蒸餾水 μL，10buffer 2 μL，10 mmol/L dNTP μL，27F和1492R引物各 4 μL，DNA模板 μL，Taq polymerase μL。(3)PCR反應(yīng)條件：93 ℃預(yù)變性5 min、94 ℃變性18 s、56 ℃退火15 s、72 ℃延伸78 s，循環(huán)30次，72 ℃
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