【文章內(nèi)容簡介】 鑒別標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)為其薄層色譜指紋圖譜分析提供依據(jù)。1 1 實(shí)驗(yàn)材料 儀器 電子天平（型號(hào)：AB135S。廠家：switertand） 超聲波清洗儀（型號(hào)：AS515OA） 水浴鍋(型號(hào)：HHS2。廠家：江蘇金壇市幾金城國勝實(shí)驗(yàn)儀器廠) 紫外光燈（型號(hào)：ZF2。廠家：上海安亭電子儀器廠） 烘箱（型號(hào)：GZX9030MBE。廠家：上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠） 吹風(fēng)機(jī)（型號(hào)：SB80；廠家：上海超人電氣有限公司） 試藥 石油醚(30~60℃) 甲醇 乙醇 稀鹽酸 甲苯 冰醋酸 乙酸乙酯 丁酮 三氯甲烷 甲酸 三氯化鋁（規(guī)格均為AR）貢菊花和野菊花(來源于宣城百草藥業(yè)有限公司） 綠原酸和蒙花苷(純度98﹪，由安徽中醫(yī)學(xué)院天然藥化教研室提供）2 實(shí)驗(yàn)方法稀鹽酸 ，%%2%三氯化鋁溶液 [1] 取野菊花1g，剪碎，加石油醚(30～60℃)20ml，超聲處理10分鐘，棄去石油醚，藥渣揮干，加乙酸乙酯50ml及稀鹽酸1m1，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另貢菊花1克同法制成供試品溶液。[8] ，加甲醇15ml，超聲處理30分鐘，放冷，濾過，取濾液作為供試品溶液。，同法制成供試品溶液。 取綠原酸對照品5mg，用乙醇定容在10ml容量瓶中超聲溶解即可。 取蒙花苷對照品2mg，用甲醇定容在2ml容量瓶中超聲溶解即可。方法一[1] 取聚酰胺薄膜一張，在薄膜一端1cm處輕輕的畫一條起始線，在起始線上均勻地用鉛筆畫三個(gè)點(diǎn)，依次為1,2,3，取綠原酸對照品溶液點(diǎn)樣于點(diǎn)1上，取貢菊花和野菊花供試品溶液分別點(diǎn)樣2和3上，各1μ1。配制甲苯一乙酸乙酯一甲酸一冰醋酸一水(1：15：1：1：2)的混合溶液，置于分液漏斗中，振搖，靜置，取上層溶液置層析槽中作為展開劑，將點(diǎn)好樣的聚酰胺薄膜放進(jìn)層析槽中展開，等到展開劑上行到距離薄膜上方1cm左右時(shí)，拿出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。方法二（改進(jìn)方法一） 取聚酰胺薄膜一張，在薄膜一端1cm處輕輕的畫一條起始線，在起始線上均勻地用鉛筆畫三個(gè)點(diǎn)，依次為1,2,3，取綠原酸對照品溶液點(diǎn)樣于點(diǎn)1上，取貢菊花和野菊花供試品溶液分別點(diǎn)樣2和3上，各1μ1。配制甲苯一乙酸乙酯一甲酸一冰醋酸一水(1：15：1：1：2)的混合溶液，置于分液漏斗中，振搖，靜置，取上層溶液置層析槽中作為展開劑，將點(diǎn)好樣的聚酰胺薄膜放進(jìn)層析槽中（不接觸展開劑）飽和10分鐘后再將薄膜置展開劑中展開，等到展開劑上行到距離薄膜上方1cm左右時(shí)，拿出，熱風(fēng)吹干，置紫外光燈(365nm)下檢視。 從左到右依次為綠原酸，貢菊花，野菊花 從左到右依次為綠原酸，貢菊花，野菊花 貢菊花和野菊花中蒙花苷的鑒別方法一[8] 取硅膠G板一塊放置烘箱中活化半小時(shí)，取出冷卻，在板一端1cm處輕輕的畫一條起始線，在起始線上均勻地用鉛筆畫三個(gè)點(diǎn)，依次為1,2,3，取蒙花苷對照品溶液點(diǎn)樣于點(diǎn)1上，取野菊花和貢菊供試品溶液分別點(diǎn)樣2和3上，各4μ1。以乙酸乙酯丁酮甲酸水（5:3::）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%三氯化鋁水溶液，熱風(fēng)吹干，置紫外光燈(365nm)下檢視。方法二 取硅膠G板一塊放置烘箱中活化半小時(shí)，取出冷卻，在板一端1cm處輕輕的畫一條起始線，在起始線上均勻地用鉛筆畫三個(gè)點(diǎn)，依次為1,2,3，取蒙花苷對照品溶液點(diǎn)樣于點(diǎn)1上，取貢菊花和野菊花供試品溶液分別點(diǎn)樣2和3上，各3μ1。以乙酸乙酯丙酮甲酸水（8:2:1:）為展開劑，將點(diǎn)好樣的硅膠G板放進(jìn)層析槽中（不接觸展開劑）飽和10分鐘后再將板置展開劑中展開，展開，取出，晾干，將其放入2%三氯化鋁水溶液中浸潤，迅速取出，熱風(fēng)吹數(shù)分鐘，置紫外光燈(365nm)下檢視。 從左到右依次為蒙花苷，野菊花，貢菊花 從左到右依次為蒙花苷，貢菊花，野菊花3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 以上試驗(yàn)方法，貢菊花和野菊花供試品色譜中，在與綠原酸和蒙花苷對照品相應(yīng)的位置上，都能顯示相同顏色的熒光斑點(diǎn)（365nm）。方法一斑點(diǎn)模糊，有拖尾現(xiàn)象，分離度不好，薄層圖譜所顯示的斑點(diǎn)少，而方法二通過改進(jìn)后試驗(yàn)，結(jié)果分離效果好，斑點(diǎn)清晰，且分離的斑點(diǎn)較多，Rf值適中，薄層色譜所提供的信息也更加豐富，更有利于對貢菊花和野菊花進(jìn)行分析研究。由圖譜還可觀察到貢菊花和野菊花鑒別綠原酸時(shí)，其兩者斑點(diǎn)近乎相同；而鑒別蒙花苷時(shí)，野菊花的斑點(diǎn)亮而明顯，貢菊花的斑點(diǎn)模糊不清。 通過上述實(shí)驗(yàn)薄層色譜圖及討論可知，方法一參照了《中國藥典》及有關(guān)文獻(xiàn)中菊花和野菊花薄層色譜鑒別方法稍作改進(jìn)試驗(yàn)，結(jié)果薄層圖譜所顯示的斑點(diǎn)少，模糊，有拖尾現(xiàn)象，分離度不好。方法二較方法一斑點(diǎn)分離效果較好，斑點(diǎn)也比較清晰圓整，且分離的斑點(diǎn)較多，Rf值較適中，故方法二可作為貢菊花和野菊花薄層色譜鑒別的較優(yōu)選擇。 經(jīng)過對方法二多次薄層鑒別試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)色譜圖中特征斑點(diǎn)Rf值差異范圍，表明方法二重現(xiàn)性也很好，故可作為貢菊和野菊花定性鑒別的方法。此外，由實(shí)驗(yàn)可大致推斷出貢菊花和野菊花中綠原酸含量相近，而蒙花苷含量差異較大，其中野菊花中蒙花苷含量明顯大于貢菊花的含量。 由于本實(shí)驗(yàn)的薄層指紋圖譜還是不太理想，所以還需改進(jìn)。4 討 論 比較了硅膠G板，H板，254板及聚酰胺薄膜這四種吸附劑的吸附效果，結(jié)果表明，鑒別貢菊花和野菊花中綠原酸時(shí)使用聚酰胺薄膜顯示的色譜斑點(diǎn)集中、清晰、圓整、重現(xiàn)性好，所提供的信息量大；而鑒別蒙花苷時(shí)則使用硅膠G板效果好。 展開系統(tǒng) 試驗(yàn)了多個(gè)展開系統(tǒng)和二十余種不同的配比，結(jié)果表明， 鑒別貢菊花和野菊花中綠原酸時(shí)以甲苯一乙酸乙酯一甲酸一冰醋酸一水(1：15：1：1：2)混合液的上層溶液為展開劑效果好；鑒別蒙花苷時(shí)以乙酸乙酯一丙酮一甲酸一水(8:2:1:)為展開劑效果好 。 顯色方法 對于綠原酸的顯色方法直接將展開好的薄膜用暖風(fēng)吹干即可。而黃酮類化合物多用三氯化鋁試液噴霧顯色，然而試驗(yàn)用三氯化鋁試液噴霧所得的薄層色譜斑點(diǎn)很不均勻，斑駁隱隱，對于未完全分離的斑點(diǎn)或分離度不大的斑點(diǎn)的觀察十分困難，這是由于三氯化鋁試液噴霧不均勻所造成的。三氯化鋁試液大多以乙醇為溶劑，噴霧量少了很難顯色或顯色不均勻，噴多了不僅不能使顯色清晰，反而會(huì)將色譜斑點(diǎn)推移、擴(kuò)散，甚至洗脫。試驗(yàn)采用2%三氯化鋁水溶液將晾干的板浸潤。因?yàn)槊苫ㄜ蘸茈y溶于水，而且水對于硅膠吸附的蒙花苷洗脫能力極弱，因此不會(huì)出現(xiàn)色譜斑點(diǎn)推移、擴(kuò)散，甚至洗脫的現(xiàn)象。故使用2%三氯化鋁水溶液浸板顯色，其板面及斑點(diǎn)顯色均勻，清晰柔和，操作更為簡便，但板吸附了較多水分，需要熱風(fēng)吹至數(shù)分鐘后才易顯色。 檢識(shí)條件 貢菊花和野菊花鑒別試驗(yàn)將處理好的聚酰胺薄膜和硅膠G板放在254nm和365nm紫外燈下比較后，結(jié)果表明，在254nm紫外燈，均不顯示有效熒光斑點(diǎn)或者斑點(diǎn)不清晰。而在365nm紫外燈下具有明顯而清晰的熒光斑點(diǎn)。