【文章內(nèi)容簡介】 5．1．1．2進行分析測量范圍實驗的樣品必須和真實標本盡可能相似，和真實標本具有相同的基質(zhì)狀態(tài)。盡量收集5個或以上系列濃度的實驗樣品，濃度范圍遍布整個預期分析測量范圍，最高濃度的樣品應達到分析測量范圍的上限，各實驗樣品內(nèi)含分析物濃度呈等比例關(guān)系。 5．1．1．3可通過在低濃度水平的病人樣本中添加分析物儲存液的方法制備高濃度水平的試驗樣本。加入量原則上少于總體積10%。 5．1．1．4低濃度樣本盡量直接從患者樣本中收集，若難以收集到低限樣品，可收集高值樣品，用生理鹽水作系列不同程度稀釋，形成系列評價樣品。5．1．1．5在正式實驗前操作者應熟練掌握儀器的操作程序、校準程序、保養(yǎng)程序以及檢測程序等，熟悉評價方案。實驗過程中嚴格按照室內(nèi)質(zhì)量控制程序進行常規(guī)室內(nèi)質(zhì)控，在質(zhì)控在控的情況下進行實驗。實驗過程注意檢測系統(tǒng)或方法的批間重現(xiàn)性。按不同的測量順序完成檢測。 5．1．2實驗程序：在臨床實驗室內(nèi)手機高值和低集，按1 L、O．8L+O．2H、O．6L+O．4H、O．4L+O．6H、O．2L+O．8H、1H等不同稀釋濃度形成系列濃度血清，對系列血清在檢測系統(tǒng)上檢測，每個樣本按隨機方式重復測定4次。在一個分析內(nèi)完成。 5．1．3實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析 5．1．3．1初步的數(shù)據(jù)檢查和離群值檢查：檢查數(shù)據(jù)有無明顯大的差異，如果確定為分析或技術(shù)性問題，糾正后整批數(shù)據(jù)重做；若無明顯大的差異，目視每組數(shù)據(jù)內(nèi)有無離群值。一個離群值可以從數(shù)據(jù)中刪除。如果發(fā)現(xiàn)兩個或以上不可解釋的離群值，就應懷疑檢測系統(tǒng)的性能。查找問題原因，必要時請求生產(chǎn)廠家協(xié)助。觀察每個濃度水平的各響應量間的差異，若為線性，各組的斜率大致相等。斜率上的 增加或降低是非線性的指示。 5．1．3．2在坐標紙上，以x表示各實驗樣品的預期值，以y表示各實驗樣品的實測值，將所有實驗結(jié)果圖上。5．1．，用直線回歸統(tǒng)計對數(shù)據(jù)作處理，得直線回歸。若b很接近1，a近于O，則可直接判斷該測定方法分析測量范圍在實驗已涉及濃度。5．1．3．4若b不接近1，以較大；如6O．97，或易1．03，有可能是b和1之間有統(tǒng)計上顯著性差異。重新對所有實驗結(jié)果進行分析，是高濃度處還是低濃度處的實測值和預期值之間有較大偏倚。嘗試舍去某組數(shù)據(jù)，另作回歸統(tǒng)計。若縮小分析范圍后回歸式有明顯改善b近于1，a于O，則縮小的分析范圍是真實的分析測量范圍。5．2參照CLSI EP 6A．文件進行檢測系統(tǒng)分析測量范圍性能評價。5．2．1基本要求和注意事項 5．2．1．1人員準備：在正式實驗前操作者應熟練掌握儀器的操作程序、校準程序、保養(yǎng)程序以及檢測程序等，熟悉評價方案，正確收集標本。 5．2．1．2實驗時間：全部實驗數(shù)據(jù)盡可能在較短的時間內(nèi)收集，如可能，單個分析試驗最好在1 d內(nèi)完成。5．2．1．3實驗樣本：實驗樣本應與臨床測試所用的樣本類型相類似，樣本要有足夠量，所用樣本沒有使實驗無效的干擾，全部實驗數(shù)據(jù)盡可能在較短的時間內(nèi)收集；5個濃度是可靠確定線性范圍和進行多項回歸的最小數(shù)，推薦用高值和低值濃度的樣本按比例精確配成等間距的不同濃度樣本，一般情況下，用廠家推薦的稀釋液對病人樣本進行稀釋。鹽水由于基質(zhì)效應可能會影響到檢測結(jié)果，此時稀釋液盡量用最小量；評價分析測量范圍時，要包括下 5．2．2實驗程序：在臨床實驗室內(nèi)收集高值和低值的病人樣本血清，按1 L、O．8L+O．2H、O．6L+O．4H、O．4L+O．6H、O．2L+O．8H、1H等不同稀釋濃度形成系列濃度血清，對系列血清在檢測系統(tǒng)上檢測，每個樣本按隨機方式重復測定2次。 5．2．3實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析5．2．3．1依照系列濃度血清的配制稀釋關(guān)系計算出各實驗樣品內(nèi)含分析物的濃度，為系列濃度樣品的預期值。按實驗要求對系列濃度血清進行重復測定，計算均值，此值為系列濃度樣品的實測值，和預期值形成6對預期值、實測值。 5．2．3．2確定線性范圍：借助Excel、SPSS統(tǒng)計軟件對實驗數(shù)據(jù)進行二元一次、二元二次、二元三次的回歸統(tǒng)計。各個多項式回歸方程表達式及自由度見表641。一次多項式模式為直線，這是判斷分析方法是否為線性的最佳模CHAPTER 檢測系統(tǒng)的分析性能評價程序式。二次多項式模式為拋物反應曲線，有曲線上升或下降二種。三次多項式模式為“S形反應曲線，在測量范圍的兩端呈非線性。 回歸系數(shù)用6f表示，在二項式中，62是非線性系數(shù)；在三次式中，62和易3是非線性系數(shù)。計算每個非線性系數(shù)的斜率求標準差SEi，然后進行多檢驗，以檢驗非線性系數(shù)是否在統(tǒng)計學上是顯著的，即系數(shù)和O是否有顯著性差異。前2個系數(shù)60和6】不用分析，因為它們不反映非線性。對62和63的檢驗為： 自由度為 是線性實驗的樣品或濃度組數(shù)；尺是每個樣品重復檢測的次數(shù),Rdf是回歸分析時占用的自由度。計算出df值，查t值表的t值(雙側(cè)，a=O．05)，如果沒有一個非線性系數(shù)b2和b3(pO．05)，說明數(shù)據(jù)是顯著的，存在線性關(guān)系。如果二次多項式模式中的62或三次多項式模式中的b2和b3中任一個和0比較有顯著差異(p0．05)，說明該數(shù)據(jù)組存在非線性關(guān)系。 5．2．3．3非線性程度的判斷：當檢測到數(shù)據(jù)組呈非線性時，需通過計算回歸標準誤(Syx)，確定最適的二次多項式或三次多項式模型。Syx是測量均值與模型對應值的差值量度，因而Syx越小，說明該模型越適合數(shù)據(jù)組。先通過以下公式計算每一個濃度處的線性偏離(deviation from linearity，DL)： X的取值范圍從x1到x5，p(xi)為最適多項式回歸模型在xi處的值，因而DLi，為在每個不同濃度處二次多項式模型與一次多項式(線性)模型的差值，或三次多項式模型與一次多項式(線性)模型的差值，也即非線性模型與線性模型在每個濃度點的差值。DLi的單位應與預先設定的目標一致，以便進行比較。 將每個濃度水平處的DLi與設定的誤差范圍比較，如果DLi小于預先設定誤差，即使檢測到統(tǒng)計學上的非線性，引入的誤差不超過臨床允許誤差，在臨床上可以接受。如果任二個點DLi超過設定目標，則代表該點可能是非線性，應試圖找到非線性的原因(樣本準備、干擾物質(zhì)、儀器校準等)和觀察測量值與預期值散點圖，判斷非線性是在分析濃度范圍的兩端或是中間。若在兩端，嘗試舍去DL，最大值的濃度點，重新進行統(tǒng)計分析。5．2．3．4實驗隨機誤差對判斷的影響：線性評估應考慮隨機誤差的影響，重復測量兩次時，可以用以下公式計算雙份檢測值的差值(重復測量誤差)： 巧l和12分別為重復結(jié)果的2個值。如果用到百分比值，則用CVr, L為樣本數(shù)，重復測量次數(shù)為2。 5．2．3．5簡要步驟：實驗室先設定的分析項目的重復性和線性的允許誤差范圍。根據(jù)公式計算重復測量誤差，若重復測量誤差小于設定的誤差目標，不精密度符合要求。再對實驗數(shù)據(jù)進行多項式回歸分析處理，查f界值表，判斷bb3的顯著性，分析實驗結(jié)果是否呈線性。 第五節(jié) 分析靈敏度性能評價程序 1目的 規(guī)范檢測系統(tǒng)的分析靈敏度性能評價程序，對新購置的檢測系統(tǒng)在正式用于檢測標本前對其分析靈敏度或檢測限進行確定。 2范圍 ， 適用于生化科在低值有明顯臨床意義的定量檢驗項目的檢測系統(tǒng)。 3職責 技術(shù)負責人和生化科主任共同負責檢測系統(tǒng)分析靈敏度評價實驗方法的設計，生化科主任負責組織進行本科檢測系統(tǒng)的分析靈敏度評價實驗。 4定義和術(shù)語 4．1檢鋇IJ低限(LLD) 指樣品單次檢測可以達到的非空白檢測響應量對應的分析物量。 4．2生物檢測限(BLD) 指某樣品單次檢測可能具有的最小響應量剛大于LLD響應量時，該樣品內(nèi)含有的分析物濃度。 4．3功能靈敏度(FS) 指檢測系統(tǒng)可定量報告分析物的最低濃度。 、 4．4空白限(LOB) 指在規(guī)定的可能性條件下，空白樣品被觀察到的最大檢測結(jié)果。 4．5檢出低值(LoD) 指在規(guī)定的可能性條件下可以檢出的樣本中分析物的最小量。 4．6定量檢測限(LoQ) 指在規(guī)定的可接受精密度和正確度條件下，能定量檢出的樣本中分析物的最小量。 5程序 5．1檢測低限、生物檢測限和功能靈敏度評價 5．1．1樣本準備 5．1．1．1空白樣本的準備：空白樣本是不含有分析物的樣本。理想的空白樣本應具有和患者樣本相同的基質(zhì)，可使用術(shù)后已無某疾病的病人樣品。另外，常使用檢測系統(tǒng)的系列校準品中的“零濃度校準品或不含分析物的樣品專用稀釋液作為空白樣本。 5．1．1．2檢測限樣本的準備：用空白樣本加入分析物配制成幾份檢測限樣品。加入的分析物量應是廠商說明的檢測限濃度。檢測限樣品的濃度應介于預期檢測限濃度l～4倍的范圍內(nèi)。 5．1．2實驗程序 5．1．2．1 1~陂集空白樣本，一份空白樣本用作空白，其他用于制備檢測限樣本。將純化的分析物加入該空白樣本，并用空白樣本作系列稀釋，組成O(空白)、0．20．50、1．O、2．0、4．0、8．0等濃度的系列檢測限樣品。