【文章內(nèi)容簡介】 100ml容量瓶內(nèi)，以飽和苯甲酸溶液稀釋100ml刻度。⑷ 飽和苯甲酸溶液：，加入蒸餾水1L中，煮沸使溶解。冷后盛于試劑瓶中。 器材⑴ 試管及試管架⑵ 吸量管⑶ 水浴鍋⑷ 721型分光光度計⑸ 方格坐標紙標準曲線和回收試驗標準曲線：配制一系列已知不同濃度的測定物標準溶液，按樣品測定同樣的方法處理顯色，分別測得它們的光密度，再以光密度為縱坐標，濃度為橫坐標，在方格坐標紙上作圖，所得的曲線即標準曲線。制作標準曲線的意義在于：（1）作為校正曲線，從濃度—光密度的直線特性，可判斷某方法中化學反應產(chǎn)生的顏色物質(zhì)是否符合或遵守朗伯特—比爾定律。（2）可判斷在測定操作過程中，操作、儀器等誤差的大小，從而確定方法的可靠性。（3）作為工作曲線，在大量進行樣品中測定物含量分析時，通常用作計算的基礎，即從曲線上可直接找到測定液的光密度所相當?shù)臐舛??；厥赵囼灒罕壬ㄖ袦y定液除含待測成分外，還含有許多非測定成分而與標準液不一致，它們是否影響顯色反應引起誤差，常借回收試驗來檢查。在待測樣品中加入已知濃度的標準物質(zhì)，在按樣品測定的條件和方法進行測定，然后計算測出標準物質(zhì)量占加入標準物質(zhì)量的百分率，這種試驗即回收試驗，算出的百分率即回收率?；厥章视咏?00%愈好，一般認為達到100177。5%即較為理想?；厥章实暮脡脑谝欢ǔ潭壬险f明測定結(jié)果的準確度，也可反映干擾物質(zhì)存在與否，影響程度如何，以及這種影響與濃度有無關(guān)系；此外，還可以檢查操作誤差和儀器誤差。操作取潔凈干燥試管8支，編號，按下表操作：試 劑（ml）空白管（1）標準管（2） （3） （4） （5） （6）測定管 （7） 回收管（8）血漿（或血清）—— — — — —葡萄糖標準液()— —蒸餾水 鄰甲苯胺試劑 混勻后置沸水浴中加熱15分鐘。取出，用流水或冷水浴冷卻。用630nm波長進行比色，以空白管校正光密度到零點，讀取各管光密度讀數(shù)。計算及作圖選擇與測定管接近的標準管的光密度值，列出計算公式，計算出血漿（或血清）中葡萄糖的含量（mmol/L）。將以上各標準管的光密度值為縱坐標，相應的各標準管的葡萄糖的濃度（， ， ， mmol/L， ）為橫坐標，在座標紙上作圖，繪制成標準曲線。從標準曲線中查出血漿或血清的葡萄糖含量，并與計算結(jié)果作比較?；厥章实挠嬎悖孩?選擇與回收管接近的標準管的光密度值，列出計算公式，計算出回收管的葡萄糖含量（mmol/L）。⑵ 計算回收量：回收量（mmol/L）=回收管葡萄糖含量（mmol/L）—測定管葡萄糖含量（mmol/L）⑶ 計算回收率：注：。正常值～ 臨床意義血糖超過正常最高值，稱為高血糖癥，常由糖尿病、甲狀腺機能亢進、腦垂體前葉機能亢進、腎上腺皮質(zhì)和髓質(zhì)機能亢進等疾病引起。血糖低于正常最低值，稱為低血糖癥，多見于胰島素分泌過多、腎上腺機能減退、腦垂體機能減退、甲狀腺機能減退等。實驗五 組織DNA與RNA的分離和提純一、原理脫氧核糖核蛋白(DNP) mol/L NaCl中溶解度很低，而核糖核蛋白(RNP)卻較易溶解， mol/L NaCl洗滌組織勻漿，可得到DNP，再用氯仿異戊醇除蛋白即可得到DNA。RNA的分離提純目前多用苯酚法。組織勻漿在酚與十二烷基硫酸鈉存在下，RNA與蛋白質(zhì)分離。酚使蛋白質(zhì)變性凝固，RNA溶解在水相中，用乙醇使RNA從水相中沉淀而達到分離。二、操作(一)DNA的提純，放血處死。立即開腹，取其脾臟及兩腎臟( g)，浸于預冷至0℃ mol/L mol/L EDTA中，洗去其血液，剝?nèi)ブ車闹炯敖Y(jié)締組織，用濾紙吸干水分。，轉(zhuǎn)入玻璃勻漿器中， mol/L mol/L EDTA液7 ml，旋轉(zhuǎn)上下勻漿，至絕大部分細胞破碎為止。，2 500 r/min，15 min。吸棄上層液體， mol/L mol/L　EDTA液混勻，離心洗滌之(如欲獲取摻雜RNA較少的純DNA時，此步離心洗滌應重復多次)。，加入3 ml mol/L mol/L EDTA，在攪拌下緩緩滴入250　g/L SDS ml，轉(zhuǎn)入勻漿器內(nèi)勻漿，使沉淀懸浮均勻，再加入2 mol/L NaCl 4 ml，這時由于大分子脫氧核糖核蛋白的溶出，溶液粘度驟然升高，再勻漿一次，使之均勻。，加等容積的氯仿異戊醇8 ml，劇烈振搖10 min。將此混合液離心3 000　r/min，10 min。上層為水液，下層為氯仿，變性蛋白質(zhì)在氯仿與水層的界面上。吸出上層水液(如欲獲取摻雜蛋白質(zhì)較少的DNA，此氯仿振搖、離心的操作可重復多次，直至界面完全見不到變性蛋白層為止)。氯仿層液體不要廢棄，可倒入收集瓶內(nèi)，以便蒸餾回收再用。%乙醇，即可見有長纖維線狀DNA析出，用玻棒攪之，DNA纖維即粘纏在玻璃棒上，在玻璃壁上盡量將水分擠干。 ml mol/L　NaCl溶液中留作定量、電泳用。(二)RNA的提取，放血處死。立即剖腹，取出其肝臟，浸于預冷至0℃ mol/L醋酸鈉緩沖液()中，剝?nèi)ジ伍T處的結(jié)締組織，洗去血液，用濾紙將水分吸干，　g。 g肝臟，　mol/L醋酸緩沖液()3 ml、250 g/L SDS ml，移入勻漿管，勻漿后，再加入等體積80%酚，再勻漿一次。3.移入三角燒瓶內(nèi)，置65℃水浴中繼續(xù)振搖5～8 min。取出流水冷卻。，3 000 r/min，10～15 min，上層為稍混濁含有RNA的水相，中層為變性蛋白質(zhì)，下層為酚液，管底殘渣含有DNA。吸出上層水液(若要提高RNA的收獲量，可向中、下層液中再加1/2體積的醋酸緩沖液，同樣在65℃水浴中振搖提取一次，離心后所收得上層水液，可與上述水液合并)。，加入1/10體積的2 mol/L醋酸鈉，混勻。%乙醇，混勻，冷處放置至絮狀沉淀充分形成。，3 000 r/min，10 min。傾出上清(不要廢棄，可倒入收集瓶中，作蒸餾回收乙醇用)。離心管倒置濾紙片上，盡量使液體流干?！l溶解(慢慢向沉淀中加蒸餾水，至沉淀完全溶解即可)，再作定量及電泳用。三、注意事項，有條件應在0～4℃進行。，在提取RNA的過程中應盡量避免RNA酶污染。，操作時應小心，若沾灑在皮膚上立即用水或用70%酒精棉球擦洗。，須待纖維狀DNA大分子充分析出后，再用玻棒輕輕將其纏撈出來四、試劑和器材1. mol/L mol/L EDTA: 稱NaCl g， g，加蒸餾水溶解，調(diào)pH至7，稀釋至1 000 ml，貯放冰箱中。2. 250 g/L SDS: 稱取十二烷基硫酸鈉25 g，溶于50%乙醇中至100 ml，室溫存放。3. 2 mol/L NaCl: g NaCl，用蒸餾水配成100 ml溶液。4. 氯仿異戊醇: 氯仿24份與異戊醇1份混合。5. 80%酚: 取苯酚80份，加蒸餾水20份，混勻后裝棕色瓶中。6. mol/L醋酸緩沖液(pH　): mol/L醋酸鈉35 ml， mol/L醋酸15 ml，加蒸餾水稀釋至1 000 ml。7. 2 mol/L醋酸鈉: g，用蒸餾水溶解后配成100 ml。8. 95%乙醇9. 器材 超低溫冰箱，生物安全柜，電熱恒溫水槽，臺式高速冷凍離心機實驗六 紫外分光光度法定量檢測DNA與RNA 一、原理具有共軛雙鍵的有機分子，對紫外光有強烈的吸收，核酸分子中的堿基就有共軛雙鍵，因此也強烈吸收紫外光。核酸的最大吸收波長為260 nm，吸收低谷在230 nm。核酸的這一物理特性為測定核酸溶液的濃度提供了基礎。在波長為260 nm的光程為，一個吸收單位(1　A 260)相當于