細(xì)菌的遺傳分析(3)(編輯修改稿)
2025-06-10 23:20 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 交 ? 稀 釋 菌 液 ? 含 完 鏈 全 霉 培 素 養(yǎng) 的 基 ? Hfr 菌 株 不 能 繁 殖 ? 長(zhǎng) 出 抗 str 菌 落 ? 挑 逐 單 個(gè) 菌 培 落 養(yǎng) ? 鑒 出 定 出 a+ 現(xiàn) b+ 情 c+ 況 d+ 況 實(shí)驗(yàn)原理 ?Hfr菌株：蘇氨酸 (thr+)、亮氨酸 (leu+)、抗疊氮化物(azir)、抗 T1噬菌體 (tonr)、半乳糖 (gal+)、乳糖 (lac+) ?F–菌株： thr– 、 leu – 、azis、 tons、 gal– 、 lac– 型。 ⑴ . 8分鐘時(shí) thr+進(jìn)入 F–； leu+進(jìn)入 F–。 ⑵ . 9分鐘時(shí)出現(xiàn) azir的菌落； ⑶ . 11分鐘時(shí)出現(xiàn)抗噬菌體T1的 F– 細(xì)菌（ tonr）； ⑷ . 18和 25分鐘時(shí)：分別出現(xiàn)乳糖和半乳糖發(fā)酵基因，即 lac+和 gal+進(jìn)入 F– 細(xì)胞。 中斷雜交實(shí)驗(yàn)結(jié)果 ⑴ ．重組子中各標(biāo)志基因進(jìn)入 F細(xì)胞中時(shí)間不同，達(dá)到最高水平的時(shí)間也不同； ⑵．隨時(shí)間的推遲，有某個(gè)基因的菌落增加；一定程度后，便不再增加。 如： 10’ tonr首次出現(xiàn) , 15’ 時(shí) 40%、 25’ 后80% ∴ Hfr 中的基因是按一定的線性順序依次進(jìn)入 F菌株的。 根據(jù)中斷雜交實(shí)驗(yàn)結(jié)果繪制遺傳圖 以各個(gè)基因出現(xiàn)的時(shí)間 (分鐘 )為單位，就可作出大腸桿菌的遺傳連鎖圖。 在大腸桿菌中，通過(guò)實(shí)驗(yàn)知道平均每分鐘轉(zhuǎn)移 33kb以后，還可將連鎖圖轉(zhuǎn)換為基因組物理圖。 環(huán)狀連鎖圖 ⑴ 、 用不同 Hfr菌株進(jìn)行中斷雜交實(shí)驗(yàn)，作出環(huán)狀連鎖圖，其基因向 F細(xì)胞轉(zhuǎn)移的順序有可能不同： 為什么轉(zhuǎn)移順序是亂的？ 原因是，不同 Hfr菌株的 F因子插入的位置和方向不同 ! ⑵ 、不同 Hfr菌株的 F因子插入位點(diǎn) Hfr H： ● —lac—thr —thi —malA —serA —tyrA —his —recA —att? Hfr H： ： ： ● —thr—lac —att —recE —his —tyrA —serA —malA —thi? 重組作圖 ?兩基因轉(zhuǎn)移時(shí)間間距＜ 2分鐘時(shí)，中斷雜交法的圖距不夠精確，應(yīng)采用傳統(tǒng)的重組作圖法。 ?例如，有乳糖不發(fā)酵突變體 lac和腺嘌呤缺陷型 ade 兩個(gè)菌株，這兩個(gè)緊密連鎖基因間的重組作圖方法如右圖所示。 Hfr lac+ade+(strS) F– lac–ade–(strR) 完全培養(yǎng)基培養(yǎng) 選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng) （不加腺嘌呤，加鏈霉素） 獲得 F– ade+菌落 F– ade+ lac– 基因間發(fā)生交換 F– ade+ lac+ 基因間未發(fā)生交換 乳糖作碳源 結(jié)合的兩基因間重組頻率 lacade+ 重組率 = ──────────── 100% = 22% (lac+ade+) + (lacade+ ) ?中斷雜交連鎖圖的每分鐘約相當(dāng)于 20%的重組值。 lac+ lac– ade+ ade– lac+ lac– ade+ ade– ade– ade+ lac– lac+ 片斷丟失 片斷丟失 ade– ade+ lac+ lac– 親本型 重組型 如這端后 進(jìn)入受體 一、 F’因子 概念 第三節(jié)： F`因子與性導(dǎo) 細(xì)菌基因組內(nèi)不止一個(gè)整合位點(diǎn) 錯(cuò)位環(huán)出 (偶爾發(fā)生 ) 細(xì)菌細(xì)胞 仍然具有全 部基因 F`因子 lac+ Hfr中的 F 因子偶爾在環(huán)出時(shí)不夠準(zhǔn)確 , Adelberg和 Burns (1959)發(fā)現(xiàn) F39。因子 。 會(huì) 攜帶出 染色體上的一些基因 , 這種因子稱(chēng)為 F39。因子 。 Hfr 供
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