生化chapter0307aminoacidsa(編輯修改稿)
2025-06-09 02:22 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 Mr A B C D 待測蛋白分子量 SDS聚丙烯酰胺 凝膠電泳法測相對分子量 SDS聚丙烯酰胺 凝膠電泳法測相對分子量 A B Rf=A/B 蛋白質(zhì)分離純化的依據(jù) 1．分子大小 2．溶解度 3．電荷 4．吸附性質(zhì) 5．特異的生物親和力 根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小建立的分離純化方法 凝膠過濾（分子排阻層析） 基于分子大小 常用的凝膠： 葡聚糖凝膠 瓊脂凝膠與瓊脂糖凝膠 聚丙烯酰胺凝膠 分級沉淀（鹽或有機溶劑） 根據(jù)蛋白質(zhì)溶解度大小建立的分離純化方法 工藝流程說明： 根據(jù)蛋白質(zhì)電荷差異建立的分離純化方法 聚丙烯酰胺凝膠電泳（ PAGE） 平板電泳 等電聚焦電泳 根據(jù)蛋白質(zhì)吸附特性建立的分離純化方法 根據(jù)蛋白質(zhì)特異親和 力建立的分離純化方法 ?凱氏定氮法 ?紫外吸收法 ?雙縮脲法 ?Folin酚法（ Lowry法，蛋白質(zhì)在堿性溶液中與銅形成復(fù)合物，此復(fù)合物及芳香族氨基酸還原磷鉬酸－磷鎢酸試劑產(chǎn)生藍色。 ） ?Bradford法（考馬斯亮藍染料結(jié)合法） ?BCA法（ bisinchoninic acid method） 蛋白質(zhì)含量測定的常用方法 ．凱氏定氮法 ?原理： 氮在蛋白質(zhì)分子中含量恒定 （ 平均占 16%） ， 因此測出樣品中氮的含量后 ， 即可求得樣品中蛋白質(zhì)含量 。 ?每克樣品中含氮的克數(shù) 100=100克樣品中蛋白質(zhì)的含量 （ 克 %） 。 ?將蛋白質(zhì)樣品用濃 H2SO4 消化分解 （ 加熱 、 常加少量的硫酸銅 、 硫酸鉀作催化劑 ） ， 使其中的氮轉(zhuǎn)變?yōu)殇@鹽 ， 碳轉(zhuǎn)變?yōu)?CO2， 硫轉(zhuǎn)變?yōu)?SO SO3等逸出。 銨鹽再與濃堿反應(yīng) ， 放出的氨被酸 （ 硼酸 ） 吸收， 滴定剩余的酸 ， 算出氮的含量 。 紫外 分光光度計法 ?由于蛋白質(zhì)分子中的酪氨酸 、 色氨酸在 280nm左右具有最大吸收 ， 但各種蛋白質(zhì)中的這兩種氨基酸含量差別不大 ， 所以在 280nm吸收值與濃度成正比 ， 可用于蛋白質(zhì)含量測定 ?此法準確度較差 ， 因為有諸多因素的干擾 （ 如核酸） ， 通常用 280nm及 260nm下的吸收差大概計算蛋白質(zhì)的濃度 蛋白質(zhì)濃度 mg/ml=－ A260 ?由于此法非常簡便 ， 條件要求低 ， 因此常作為粗略
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