基因與載體連接ppt課件(編輯修改稿)
2025-05-30 22:02 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 GGCC CCGG GGCCCTAGP5’ CCGGGATCCCGGOH GGCCCTAGGGCCP5’ 接頭自我連接 接頭與接頭會彼此以粘性末端接在一起，影響與 DNA片段的連接。 ③ 優(yōu)點： 連上后就能用。 ④ 缺點： 先用小牛腸 堿性磷酸酶 （ CIP）處理接頭，水解掉其 5’端的磷酸，防止自我連接。 （以后再用 T4多核苷酸激酶 加上磷酸。） ⑤ 防止自我連接 5‘pGATCCCGGOH HOGGCCP PCCGGOH HOGGCCCTAGP5’ CCGGGATCCCGGOH HOGGCCCTAGGGCC5’ 接頭之間不能形成磷酸二酯鍵的自我連接！ 5‘GATCCCGGOH HOGGCC5’ 5’CCGGOH HOGGCCCTAG5’ CIP處理 Bluntended DNA 5’pGATCCCGGOH3’ HOGGCCp5’ BamH I adapter P P 5‘GATCCCGG HOGGCC CCGGOH GGCCCTAG5’ 5’GATCCCGGOH3’ HOGGCC5’ 缺口 缺口 HO OH CIP處理 T4 ligase 雖然有缺口，但仍然能與 DNA片斷連接。 一） PCR產(chǎn)物的連接 1. 在引物的 5’端設計酶切位點 符合載體的 多克隆位點 (MCS)； （ 1）設計原則 避免與所擴增的 DNA片斷內(nèi)部酶切位點重復。 二、其他
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