生物化學(xué)試驗(yàn)基礎(chǔ)ppt課件(編輯修改稿)
2025-05-28 13:17 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 按所吸收光的波長(zhǎng)區(qū)域不同，分為紫外分光光度法和可見(jiàn)分光光度法，合稱為紫外 可見(jiàn)分光光度法。 它是利用物質(zhì)的分子或離子對(duì)某一波長(zhǎng)范圍的光的吸收作用，對(duì)物質(zhì)進(jìn)行 定性分析 、 定量分析 及 結(jié)構(gòu)分析 , 所依據(jù)的光譜是分子或離子吸收入射光中特定波長(zhǎng)的光而產(chǎn)生的吸收光譜。 可見(jiàn)吸收光譜 ?紫外光： 遠(yuǎn)紫外光（ 10200 nm）和 近紫外光（ 200400 nm） 的電磁輻射。 ?可見(jiàn)光： 400800 nm的電磁輻射。溶液中物質(zhì)選擇性的吸收可見(jiàn)光中某種顏色的光，溶液就會(huì)呈現(xiàn)出一定的顏色。 ? 比色分析法 ：比較有色物質(zhì)溶液顏色深淺來(lái)確定物質(zhì)含量的方法。 ? 分光光度法 ：使用分光光度計(jì)進(jìn)行吸收光譜分析的方法。 2)紫外 可見(jiàn)分光光度法的特點(diǎn)： (1 ) 與其它光譜分析方法相比，其 儀器設(shè)備 和操作都比較簡(jiǎn)單，費(fèi)用少，分析速度快 。 (2) 靈敏度高 。 (3 ) 選擇性好 。 (4 ) 精密度和準(zhǔn)確度較高 。 (5) 用途廣泛 。 3) 紫外 可見(jiàn)吸收光譜 ?物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收 物質(zhì)對(duì) 光 的吸收是 選擇性 的，利用被測(cè)物質(zhì)對(duì)某波長(zhǎng)的光的吸收來(lái)了解物質(zhì)的特性，這就是 光譜法的基礎(chǔ) 。 通過(guò)測(cè)定被測(cè)物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)的光的吸收強(qiáng)度（吸光度），以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)作圖，得出該物質(zhì)在測(cè)定波長(zhǎng)范圍的 吸收曲線 。 在吸收曲線中，通常選用最大吸收波長(zhǎng)λmax進(jìn)行物質(zhì)含量的測(cè)定。 ? 吸收光譜（吸收曲線）： ? 不同波長(zhǎng)光對(duì)樣品作用不同，吸收強(qiáng)度不同 ? 以 λ~A作圖 ? 吸收光譜特征：定性依據(jù) ? 吸收峰 → λmax ? 吸收谷 → λmin ? 肩峰 → λsh 圖示 ? 吸收曲線的討論： （ 1）一種吸光物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)的光吸收程度不同。吸光度最大處對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)稱為最大吸收波長(zhǎng)λ max 。 吸收曲線是定量分析中選擇入射光波長(zhǎng)的重要依據(jù)。 （ 2）同一種物質(zhì)濃度不同，其吸收曲線形狀相似λ max不變。 在 λ max處，吸光度 A正比于濃度 C 測(cè)定最靈敏 （ 3）吸收曲線可以提供物質(zhì)的結(jié)構(gòu)信息，并作為物質(zhì)定性分析的依據(jù)之一。 4) 影響紫外 可見(jiàn)吸收光譜的因素 ?物質(zhì)的吸收光譜與測(cè)定條件有密切的關(guān)系。測(cè)定條件（溫度、溶劑極性等）不同，吸收光譜的 形狀 、 吸收峰 的位置、 吸收強(qiáng)度 等可能發(fā)生變化。 ?溫度 在室溫范圍內(nèi)，溫度對(duì)吸收光譜的影響不大。 ?溶劑 注意如下幾點(diǎn)： （ 1）盡量選用低極性溶劑； （ 2）能很好地溶解被測(cè)物，并且形成的溶液具有良好的化學(xué)和光化學(xué)穩(wěn)定性
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