【文章內(nèi)容簡介】 2O， 此為完全甲基化方法 。 ② 水解 ：甲基取代多糖用酸水解 ， 得甲基糖 ， 再進(jìn)一步分離 。 ③分離 ：色譜柱法或薄層色譜法等。 (2) 應(yīng)用 ① 根據(jù)四甲基糖和三甲基糖的比例來計算直鏈多糖的平均分子長度和聚合度 ， 此為尾端分析法 。 ② 計算支鏈多糖支叉的程度 。 ③ 了解糖苷鍵的種類 。 缺點 ： ① 交叉鏈種類不清楚 。 ② 完全甲基產(chǎn)物少 。 ③ 需二種以上分離方法結(jié)合使用。 (1) 特點 ① 多糖分子中相鄰碳上 OH→ 雙 CHO。 糖苷鍵不受影響 。 ② 原來多糖分子鏈成為雙醛化合物鏈 。 加乙醇沉淀 ， 干燥得粉末 。 ③ 了解相鄰碳上 OH為反式或順式 。 （ 因順式氧化速度大于反式 ） ④ 了解糖苷鍵的種類 ， 尾端基 ， 鏈長度和支叉程度 。 (通過分析氧化劑耗用量 ， 甲酸和甲醛生成量 ) ⑤ 方法簡單、準(zhǔn)確，需樣品量較甲化基法少。 (2) 反應(yīng)條件與結(jié)構(gòu)推測 ① 低溫 (5℃ )、 避光 。 ② 高碘酸用量為計算量的一倍 ， 濃度 。 ③ 多糖濃度 1%以下 。 ④ 不時測定氧化劑的耗用量 ， HCOOH、 甲醛及雙醛化合物生成量 。 結(jié)構(gòu)推測： 雙醛化合物 不穩(wěn)定 ， 需氧化成羧基或還原成醇基再研究產(chǎn)物結(jié)構(gòu)： ① 溴水使醛基氧化成羧基 。 ② 催化加氫還原法；或 NaBH4室溫還原 ， 再用 HCl水解 ，使醛基還原成醇基 。 非還原尾端單糖單位 : 有三個羥基 ， 即二對相鄰的羥基 ，耗用二分子高碘酸鹽 ， 產(chǎn)生一分子甲酸； 還原尾端的還原單糖單位 : 耗用三分子高碘酸鹽 ， 產(chǎn)生二分子甲酸和一分子甲醛； 支叉位置的單糖單位 : 因 C2的羥基被取代 ， 無相鄰羥基不被氧化 ， 仍保持原來結(jié)構(gòu)； 其余各單糖單位 : 都具有一對相鄰羥基 ， 各耗用一分子高碘酸鹽 ， 但不產(chǎn)生甲酸和甲醛 。 用高碘酸法氧化多糖 ， 分析氧化劑耗用量 、 甲酸和甲醛生成量 ， 能了解多糖分子中糖苷鍵的種類 、 尾端基 、 鏈長度和支叉程度 。 * 用 Pb(OAc)4可代替 HIO4。 堿性條件下還原尾端單糖發(fā)生降解反應(yīng) ， 分裂開來生成脫氧糖酸 (比醛類穩(wěn)定 )， 如此不斷脫掉還原單糖單位 ，直至水解完全 。 1,3鍵產(chǎn)生間糖精酸 ， 1,4鍵產(chǎn)生異糖精酸 。 間糖精酸和異糖精酸的結(jié)構(gòu) ： H OC O O HHHHO HHO HHC H 2O HC O O HHH O H 2 CHHO HHC H 2 O H 單糖會發(fā)生分子重排反應(yīng) ， 單糖在堿中經(jīng)烯醇式發(fā)生差向異構(gòu)化 。 例 D葡萄糖轉(zhuǎn)化為： D葡萄糖 (%)+ D果糖 (% ) + D甘露糖 (% ) + 其它非糖物 (%) 各糖苷鍵堿性水解難易： ① 1,3糖苷鍵易水解 (pH=9)。 α式 ， β式用 IR或 HPLC確定 。 ② 1,4(1,6)糖苷鍵也可水解 (pH=11)， 但比 1,3糖苷鍵慢10~100倍 。 ③ 1,2糖苷鍵最難水解 ， 但在較高溫度時仍可進(jìn)行 。 可在不同 pH值條件下水解，然后打譜確定結(jié)構(gòu)，以此區(qū)別糖苷鍵。 酶水解具有專一性 ： 一定方式水解一定種類的糖苷鍵 ，能確定糖苷鍵的構(gòu)型 、 單糖單位的次序 、 支鏈多糖的支叉位置 、 支叉種類和平均鏈長度 ， 在研究多糖的結(jié)構(gòu)中很有用 。 例 α淀粉酶只能水解淀粉 、 糖原中的 α糖苷鍵 ， 對于纖維素中的 β1,4糖苷鍵無作用 。 水解一般要求 ：稀多糖液 ， 酶濃度也要稀 ， 才有較好效果 。 否則產(chǎn)生新的低聚糖 。 可測定比旋光度 、 粘度或還原性糖的增加來確定酶水解程度 。 找合適酶的途徑： ， 則可在這種生物體中找到合適的酶 。 ， 微生物生長旺盛時 ， 則一定存在水解多糖的酶 。 五 、 多糖的生理作用 糖參與了多細(xì)胞生命的全部時間和空間過程，如受精、著床、分化、發(fā)育、免疫、感染、癌變、衰老等等，糖與疾病的發(fā)生和發(fā)展有密切的關(guān)系。 一方面， 某些糖鏈的不正常導(dǎo)致疾病。 另一方面， 在很多疾病過程中，往往伴隨著糖鏈的異常，如腫瘤的發(fā)生往往伴隨細(xì)胞表面糖鏈的異常高表達(dá)，并且這些糖鏈的變化與腫瘤的惡化、轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)。 還有， 一些致病過程是由糖直接介導(dǎo)的，如微生物感染、炎癥等。顯然，調(diào)控糖基參與的這些病變過程就有可能控制疾病。 糖類藥物 成為一個研究熱點。由于活性多糖的生理作用，作為糖類藥物它的應(yīng)用是多方面的。 (1) 提高免疫力功能 活性多糖對免疫系統(tǒng)有重要的調(diào)節(jié)作用 ， 主要表現(xiàn)為免疫增強(qiáng)或刺激作用 。 經(jīng)藥理活性試驗表現(xiàn)出能刺激或提高機(jī)體免疫功能 、 有激活或提高巨噬細(xì)胞的吞噬能力的活性多糖主要有：人參多糖 、 黃芪多糖 、 香菇多糖 、當(dāng)歸多糖 、 猴頭菌多糖 、 黨參多糖 、 刺五加多糖 、 靈芝多糖 、 銀耳多糖等 。 例靈芝多糖不僅能增強(qiáng)正常小鼠的細(xì)胞免疫和體液免疫及非特異性反應(yīng)，還能拮抗免疫抑制劑、抗腫瘤藥、應(yīng)激和衰老所致的免疫功能水平低下，使之恢復(fù)到正常水平。 (2) 抗腫瘤功能 活性多糖主要的抗癌作用是通過增強(qiáng)宿主免疫功能或?qū)δ[瘤細(xì)胞呈細(xì)胞毒作用 ， 以抑制捉瘤生長 ， 它最大的優(yōu)點是毒副作用少 ， 對正常細(xì)胞影響很小 ， 并且活性多糖與化療藥物有協(xié)同作用 。 能顯著抑制腫瘤生長的多糖有香菇多糖 、 裂褶菌多糖 、 茯苓多糖等 。 另外銀耳多糖 、 靈芝多糖 、 冬蟲夏草多糖 、 海帶多糖 、 中華獼猴桃多糖等都有一定的抗腫瘤活性 。 (3) 抗病毒功能 活性多糖還能應(yīng)用于治療多種免疫疾病如慢性病毒性肝炎和某些耐藥細(xì)菌或病毒引起的慢性疾病。多糖通過類似的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制增強(qiáng)宿主免疫能力，以抵抗病原體的侵襲。如香菇多糖對孢狀口炎病毒引起的小鼠腦炎有顯著治療和預(yù)防作用，甘草多糖對多種病毒均有明顯抑制作用。 (4) 抗感染功能 活性多糖主要通過提高宿主免疫功能和直接殺菌 、 抗病毒協(xié)同作用 ， 達(dá)到抗感染目的 。 懸浮于體液中的游離多糖可競爭性結(jié)合病原體 ， 從而阻止其與健康細(xì)胞的結(jié)合 ， 達(dá)到抗感染的目的 。 例黃芪多糖能顯著抑制結(jié)核桿菌 ， 中華獼猴桃多糖對大腸桿菌有抑制作用 ， 紅藻多糖對治療感冒有良好作用 。 (5) 抗?jié)児δ? 胃腸黏液中含有糖蛋白和黏多糖，它們的存在可以阻止胃酸、胃蛋白酶等與胃腸黏膜接觸，并能與細(xì)菌結(jié)合，阻止細(xì)菌與胃黏膜上的多糖受體相吸附。角叉菜膠是治療胃和十二指腸潰瘍的良藥，人參果膠、糊精、紅藻類多糖等都有較好的抗消化性潰瘍作用。 (6) 降血糖功能 從人參中提出的多糖可使四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖下降 。 從知母中提取的四種多糖 ， 給正常小鼠注射后 ， 動物血隨劑量加大而明顯下降 。 具有降血糖活性的多糖還有烏頭多糖 、 麻黃多糖 、 甘蔗莖多糖 、 山藥和野山藥多糖等 。 (7) 降血脂和凝血功能 化學(xué)結(jié)構(gòu)與肝素類似的活性多糖，能促進(jìn)脂蛋白脂肪酸釋放，使血液中大分子的脂質(zhì)分解成小分子，因而對血脂過多引起的血清渾濁有澄清作用，也能降低血膽固醇含