圓二色光譜在研究方案蛋白結構中的應用(編輯修改稿)
2025-05-23 06:04 本頁面
【文章內容簡介】 術的發(fā)展，遠紫外測量光譜可以展寬到190nm以下的真空遠紫外區(qū)。由于這一CD光譜區(qū)域內，包含著更為豐富的蛋白質二級結構信息，這一光譜區(qū)域的參考蛋白質的圓二色光譜及擬合運算方法也已成為研究熱點。早期的蛋白質或多肽的二級結構擬合計算方法中；主要采用多聚氨基酸為參考多肽。建立α螺旋、β折疊及無規(guī)卷曲等二級結構參考CD光譜曲線，采用單一波長法(208nm)計算出一螺旋含量后，然后假設不同的β折疊含量值，并假設CD值是α螺旋含量β折疊含量和無規(guī)卷曲三者貢獻值的加和，通過計算機算出不同波長的θ（λ），得出計算曲線。找出與實驗曲線最接近的曲線計算出各構象的含量?，F(xiàn)代的蛋白質CD擬合二級結構的算法主要是，采用最小二乘法、單值分解及神經(jīng)網(wǎng)絡方法等算法，以待測蛋白質代替參考蛋白體系中結構相似的某一蛋白質，反復計算取代后的收斂性，從而計算擬合出未知待測蛋白質的二級結構組成[9,10]。膜蛋白是近年來分子生物學研究的熱點。膜蛋白是一類具有晶體類似結構的鑲嵌于細胞膜上的蛋白，到目前為止，僅有為數(shù)不多的膜蛋白結構得到確認. 研究表明，膜蛋白紫外電子光譜躍遷受到周圍環(huán)境介電常數(shù)的影響，其原因可能是由于溶劑影響了電子由基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài)(nπ*，ππ*)的躍遷能量。不同于溶液環(huán)境中的蛋白質，膜蛋白鑲嵌于疏水的脂質環(huán)境之中，因此，膜蛋白紫外CD光譜可能跟溶液狀態(tài)下的CD信號有所區(qū)別。Wallace等[11]研究表明以現(xiàn)有的未包括膜蛋白的參考蛋白體系，采用SELCONCONTIN及CDSTR等擬合運算程序預測具有富含α螺旋及β折疊的膜蛋白，其結果與溶液狀態(tài)的蛋白CD光譜有差別，特別在190nm后尤為明顯；并且溶液狀態(tài)的CD光譜擬合蛋白結構結果與由DSSP方法計算的膜蛋白晶體二級結構有差別。所以，現(xiàn)有的溶液參考蛋白體系不適合于CD擬合預測膜蛋白二級結構，應該建立新的含有膜蛋白的參考蛋白體系。 氧化修飾低密度脂蛋白（nLDL）被認為是動脈硬化的致病關鍵因素，它的性能與其唯一的組成蛋白apoB100的二級結構及構象密切相關[12]。近年來圓二色光譜因其操作簡單，靈敏度高在研究低密度脂蛋白氧化方面引起科研工作者的廣泛關注。Alexander等[13]用遠紫外CD檢測溶解的apoB100和nLDL，結果apoB100中的α螺旋和β折疊均比nLDL高，而無規(guī)則卷曲和β轉角則下降，整體的二級結構無顯著變化。Brunelli等[14]在研究E2的抗氧化作用時發(fā)現(xiàn)，oxL
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