最新設計rtpcr引物方法免費下載(編輯修改稿)
2025-05-04 23:13 本頁面
【文章內容簡介】 制，分值越高引物越好，根據(jù)自己試驗目的，選擇打分高的，產(chǎn)物片段400bp左右的引物對，并且Tm溫度最好在60以上，有義鏈和反義鏈Tm值靠的越近越好，最好不要超過2攝氏度，下圖中Tm行中藍色字體表示有義鏈的Tm值，紅色字體表示反義鏈Tm值，PCR退火溫度一般設置比Tm值低5攝氏度。我選擇的是排行第四的引物對，單擊選擇后在，引物設計窗口，我們可以看到這對引物的具體情況，下圖中紅色箭頭指的S和A分別指的是有義鏈和反義鏈，點擊edit primers可以復制編輯引物選擇引物序列，復制到word文檔中作為正向引物點擊ok后回到primer 界面后點擊A，然后點擊Edit primers獲得反向引物序列下面是我獲得的引物序列因為做半定量的模板是整個小鼠基因組，這就需要使用primerblast驗證引物的特異性（是否不會擴增出其它的基因）進入primerblast網(wǎng)站()在primer parameters中輸入前面設計的正向引物和反向引物在primer pair specificity checking中選擇database為refseq mRNA ，organism中輸入mouse后選擇mouse
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