最新設(shè)計(jì)rtpcr引物方法免費(fèi)下載(編輯修改稿)
2025-05-04 23:13 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 制，分值越高引物越好，根據(jù)自己試驗(yàn)?zāi)康?，選擇打分高的，產(chǎn)物片段400bp左右的引物對(duì)，并且Tm溫度最好在60以上，有義鏈和反義鏈Tm值靠的越近越好，最好不要超過(guò)2攝氏度，下圖中Tm行中藍(lán)色字體表示有義鏈的Tm值，紅色字體表示反義鏈Tm值，PCR退火溫度一般設(shè)置比Tm值低5攝氏度。我選擇的是排行第四的引物對(duì)，單擊選擇后在，引物設(shè)計(jì)窗口，我們可以看到這對(duì)引物的具體情況，下圖中紅色箭頭指的S和A分別指的是有義鏈和反義鏈，點(diǎn)擊edit primers可以復(fù)制編輯引物選擇引物序列，復(fù)制到word文檔中作為正向引物點(diǎn)擊ok后回到primer 界面后點(diǎn)擊A，然后點(diǎn)擊Edit primers獲得反向引物序列下面是我獲得的引物序列因?yàn)樽霭攵康哪０迨钦麄€(gè)小鼠基因組，這就需要使用primerblast驗(yàn)證引物的特異性（是否不會(huì)擴(kuò)增出其它的基因）進(jìn)入primerblast網(wǎng)站()在primer parameters中輸入前面設(shè)計(jì)的正向引物和反向引物在primer pair specificity checking中選擇database為refseq mRNA ，organism中輸入mouse后選擇mouse
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