【文章內容簡介】 菌可疑菌落或純培養(yǎng)物，穿刺接種并涂布于斜面，置36177。1℃培養(yǎng)18~24h，觀察結果?！　”驹囼灴赏瑫r觀察乳糖和蔗糖發(fā)酵產酸或產酸產氣（變黃）；產生硫化氫（變黑）。葡萄糖被分解產酸可使斜面先變黃，但因量少，生成的少量酸，因接觸空氣而氧化，加之細菌利用培養(yǎng)基中含氮物質，生成堿性產物，故使斜面后來又變紅，底部由于是在厭氧狀態(tài)下，酸類不被氧化，所以仍保持黃色。1氨基酸脫羧酶的測定 有些細菌含有氨基酸脫羧酶，使羧基釋出，生成胺類和二氧化碳。此反應在偏酸的條件下進行。當培養(yǎng)基含胺類時呈堿性反應，使指示劑變色。接種與觀察結果：用幼齡培養(yǎng)液作為菌種，直接接種。接種后封油，對照管與測定管同時接種封油。腸肝菌科的細菌于37℃培養(yǎng)4天觀察。當指示劑呈紫色或帶紅色調的紫色者為陽性，呈黃色者為陰性。對照管應呈黃色反應。1硫化氫（H2S）試驗　　有些細菌可分解培養(yǎng)基中含硫氨基酸或含硫化合物，而產生硫化氫氣體，硫化氫遇鉛鹽或低鐵鹽可生成黑色沉淀物?！　≡囼灧椒ǎ涸诤辛虼蛩徕c等指示劑的培養(yǎng)基中，沿管壁穿刺接種，于36177。1℃培養(yǎng)24~28h，培養(yǎng)基呈黑色為陽性。陰性應繼續(xù)培養(yǎng)至6天。也可用醋酸鉛紙條法：將待試菌接種于一般營養(yǎng)肉湯，再將醋酸鉛紙條懸掛于培養(yǎng)基上空，以不會被濺濕為適度；用管塞壓住置36177。1℃培養(yǎng)1~6天。紙條變黑為陽性。1檸檬酸鹽或丙酸鹽的利用某些細菌能利用檸檬酸鹽或丙酸鹽作為碳源，及磷酸胺作為氮源，將檸檬酸分解為二氧化碳，則培養(yǎng)基中由于有游離鈉離子存在而呈堿性。接種與觀察結果：取幼齡菌種接種于斜面上，適溫培養(yǎng)3－7天，培養(yǎng)基呈堿性（藍色）者為陽性反應，不變者則為陰性。1利用丙二酸鹽試驗丙二酸鹽是三羧酸循環(huán)中琥珀酸脫氫酶的抑制劑。能否利用丙二酸鹽，也是細菌鑒定中的一個鑒別性特征。許多微生物代謝有三羧酸循環(huán)，而琥珀酸脫氫是三羧酸循環(huán)的一個環(huán)節(jié)，丙二酸與琥珀酸競爭琥珀酸脫氫酶，與丙二酸不被分解，所以琥珀酸脫氫酶被占據(jù)，不能釋放出來催化琥珀酸脫氫反應，抑制了三羧酸循環(huán)。接種和觀察結果：用幼齡菌種接種測定培養(yǎng)基和空白培養(yǎng)基，于適溫培養(yǎng)1－2d，觀察培養(yǎng)基變色情況。如測定培養(yǎng)基生長并變藍色，表示可利用丙二酸鹽，為陽性結果。反之，如測定培養(yǎng)基未變色，而空白對照培養(yǎng)基生長，則為陰性，即不利用丙二酸鹽。1葡萄糖酸鹽的氧化假單胞菌屬和腸道桿菌科的細菌，可氧化葡萄糖酸為2－酮基葡萄糖酸。葡萄糖酸無還原性基團，氧化后形成酮基，則可將斐林氏試劑的呈藍色的銅鹽還原為磚紅色的Cu2O沉淀。試驗方法：％葡萄糖酸鹽（可用葡萄糖酸鈉或葡萄糖酸鈣）的溶液。分裝試管，每管2mL。刮取適溫培養(yǎng)18－24小時的菌苔至2mL的葡萄糖酸鹽溶液中制成濃的菌懸液，置30℃過夜，放在沸水浴中加熱10分鐘，試管中液體由藍色變?yōu)辄S綠，綠橙色或出現(xiàn)紅色沉淀者為陽性反應，如溶液不變色者為陰性。1硫化氫靛基質動力（SIM）瓊脂試驗　　試驗方法：以接種針挑取菌落或純養(yǎng)物穿刺接種約1/2深度，置36177。1℃培養(yǎng)18~24h，觀察結果。培養(yǎng)物呈現(xiàn)黑色為硫化氫陽性，混濁或沿穿刺線向外生長為有動力，然后加Kovacs氏試劑數(shù)滴于培養(yǎng)表面，靜置10min，若試劑呈紅色為靛基質陽性。培養(yǎng)基未接種的下部，可作為對照。本試驗用于腸桿菌科細菌初步生化篩選，與三糖鐵瓊脂等聯(lián)合使用可顯著提高篩選功效。1β半乳糖苷酶（ONPG）的測定本試驗應用于腸肝菌科的鑒定。測定步驟：（1） 將測定菌接種于TSI斜面上，培養(yǎng)于37℃18h（或其他最適溫度）（2） ，每管加1滴甲苯，搖勻（有助于酶的釋放），于37℃放置5分鐘。（3） ，測定管置于37℃水浴培養(yǎng)。經30分、……24h進行觀察，如有黃色者則為陽性。1耐鹽性試驗本試驗是觀察滲透壓對細菌生長的影響。由于不同菌類耐鹽性不同，故常以此作為鑒別特征。一般可根據(jù)不同種類的菌株，選擇其適合生長的培養(yǎng)基，在其中加入不同量的NaCl，接種后觀察其生長與否，以判斷其耐鹽性。以肉湯培養(yǎng)液根據(jù)鑒定需要，配成不同濃度的NaCl，如2％、％、5％、7％、10％等。培養(yǎng)基要求十分澄清，接種時應采用幼齡菌液，直針接種，適溫培養(yǎng)3－7d，與未接種的對照管對比，目測生長情況。卵磷脂酶的測定菌體如存在有卵磷脂酶，就能使卵磷脂分解生成脂肪和水溶性的磷酸膽堿。接種與觀察結果：將測試菌的菌液，環(huán)接在有卵黃的試管和不加卵黃的對照管中，適溫培養(yǎng)3或5天觀察。假若與對照管相比較，在卵黃胰胨液中或表面，形成白色沉淀者，則為陽性反應，表示卵磷脂被分解，生成脂肪和水溶性的磷酸膽堿，說明有卵磷酶的存在。另一種方法：以無菌操作取出卵黃，放入滅菌的三角瓶中，加相當于等量的生理鹽水搖勻后，取10mL卵黃液加入到溶化的約50－55℃的200mL肉汁胨瓊脂培養(yǎng)基中，混合均勻后倒入培養(yǎng)皿，制成卵黃平板，過夜后即可使用。接種與觀察結果：將測試菌點接在卵黃平板上，每皿可分散點接4－5株菌、（芽孢桿菌以點接1－2株菌為宜）以不影響結果觀察為度，如測試厭氧菌，則須在上面加蓋無菌的蓋玻片。每株菌至少重復點接兩皿。適溫培養(yǎng)1－2d觀察，在菌落周圍形成乳白色混濁環(huán)，表示卵磷脂被分解，生成脂肪，說明該菌株有卵磷脂酶存在。2石蕊牛奶的反應牛奶中主要含有乳糖和酪蛋白，在牛奶中加入石蕊是作為酸堿指示劑和氧化還原指示劑。石蕊在中性時呈淡紫色，酸性時呈粉紅色，堿性呈藍色，還原時則自上而下地褪色變白。細菌對牛奶的作用有一下幾種：（1） 產酸――細菌發(fā)酵乳糖產酸，使石蕊變紅。（2） 產堿――細菌分解酪蛋白產生堿性物質，使石蕊變藍。（3） 胨化――細菌產生蛋白酶，使酪蛋白分解，故牛奶變得比較澄清。（4） 酸凝固――細菌發(fā)酵乳糖產酸，使石蕊變化，當酸度很高時，可使牛奶凝固。（5） 凝乳酶凝固――有些細菌能產生凝乳酶，使牛奶中的酪蛋白凝固，此時石蕊常呈藍色或不變色。（6） 還原――細菌生長旺盛，使培養(yǎng)基氧化還原電位降低，因此石蕊還原褪色。接種與觀察結果：接種待測菌株，適溫培養(yǎng)7d或14d，按上述特征觀察和記錄牛奶產酸、產堿、凝固或胨化等反應。2酪素水解試驗（酪蛋白水解）牛奶平板的制備：取5g脫脂奶粉加入50mL蒸餾水中（或用50mL脫脂牛奶），將兩液分開滅菌。待冷至45－50℃時，將兩液混勻倒平板，即成牛奶平板。將