浸礦微生物選育及鑒定(編輯修改稿)
2025-05-04 03:43 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 A4。通過接合轉(zhuǎn)移的方式將其導入專性自養(yǎng)極端嗜酸性喜溫硫桿菌Acidithiobacillus c II IdW 中，構建了冶金工程菌Acidithiobacillus caldus(pSDRA4)，重組質(zhì)粒在喜溫硫桿菌中具有較好的穩(wěn)定性(重組質(zhì)粒保留76%以上，野生菌相比，構建的喜溫硫桿菌工程菌抗砷能力明顯提高，從10 mmol／L高到45 mmol／L. 改良育種需注意的問題在進行生物改良育種過程中，為得到高效穩(wěn)定的工業(yè)用菌，就必須用有效的育種程序，適于浸礦菌生長的育種培養(yǎng)基，育種方法的正確選擇以及育種過程中菌株篩選的有效性。(1)有效的育種程序可以在不同誘變處理后，能在后處理中以恰當?shù)闹笜朔磻鲎钣行У恼蛔兙辏源司暝倥囵B(yǎng)、富集、自然淘汰出負變菌株，選擇出最好的正突變菌株，應用于工業(yè)實際中去。(2)微生物的分離純化和菌株篩選和微生物的生理生化研究都需要正確的培養(yǎng)基，特別是在育種中所使用的固體培養(yǎng)基。常規(guī)瓊脂有機凝固劑對自養(yǎng)浸礦菌有抑制作用，不利于菌株篩選。硅膠無機凝固劑雖無抑制性，但操作性能很差。因此在進行改良育種時，馴化耐受有機物能力強的混合菌株進行定向選育育種；也可比較各種凝固劑的效果，尋找比較理想的凝固劑；或者將有機凝固劑的抑制分子進行純化處理。(3)針對菌種改良的誘變或基因工程方法，不同的菌種，選擇正確的方法。誘變主要分為物理誘變和化學誘變。對于T．f菌而言，因其在化學誘變過程中，有機物對其生長有強烈的抑制作用，因此一般采用物理誘變就能得到高效穩(wěn)定的誘變工業(yè)菌種。(4)改良育種所獲得菌株應用到工業(yè)實際中去，必須是穩(wěn)定的突變菌株。亦即在菌種保存和應用過程中其回復突變或抑制基因突變的頻率要很小，這要求在育種過程需要長期的培養(yǎng)和觀測，反復觀測其性狀穩(wěn)定性。在實際菌種改良過程中，亦可從培養(yǎng)環(huán)境，如溫度、pH值、重金屬離子濃度等條件考慮，做到快速有效篩選和改良。隨著生物技術不斷發(fā)展和應用分子生物學手段的不斷提高，獲得高效穩(wěn)定的、繁殖速度快、氧化能力強、環(huán)境適應能力強的基因工程菌是完全可能的。3. 浸礦微生物鑒定 常規(guī)方法微生物鑒定的常規(guī)方法，是指通過純培養(yǎng)，獲得純菌株后，將測定的細胞的形態(tài)學、生理學、生態(tài)學的各種指標，與權威性的菌種鑒定手冊比較，獲得菌種的分類信息 。早期的鑒定，就是通過此方法進行的，但是，這種方法需要的時間長，而且有些浸礦微生物難以獲得純培養(yǎng)。Johnson 曾通過平板培養(yǎng)的方式，發(fā)現(xiàn)有機物對專性自養(yǎng)菌Acidithiobacillus ferrooxidans有毒害作用，導致它很難在固體瓊脂培養(yǎng)基上生長，但通過夾層培養(yǎng)或引入異養(yǎng)菌Acidiphilum，. 由此可以推斷，早期獲得的純的At．ferrooxidans，有可能是At．ferrooxidans和Aci—diphilum 的混合菌株。 免疫學方法 免疫熒光法免疫熒光法是一種使結合有熒光素的抗體與抗原進行反應，借以提高免疫反應靈敏度和適合顯微鏡觀察的免疫標記技術。Baker和Mills 將熒光抗體(Fluorescent antibody，F(xiàn)A)和2(pIodo—pheny1)一3一(p—Nitropheny1) 一5Phenyltetrazolium hloride(INT)結合，此技術又稱為FAINT。他們利用FAINT技術研究了酸性和非酸性環(huán)境中Thiobacillus ferrooxidans 的分布。通過比較FAINT技術，熒光抗體染色和MPN (Most Prob—able Number)，結果表明，MPN低估活細胞數(shù)1—3個數(shù)量級，而熒光抗體染色估計過高。 斑點免疫測定法該方法是Jerez提出來的，可以快速特異性鑒定T．ferrooxidans、L．ferrooxidans和Thio bacillus thiooxidans。該方法的基本過程為：首先，將要鑒定的細菌以硝酸纖維素濾膜過濾，使細菌呈點狀分布在膜上。然后，用一次抗體和細胞反應，再與酶結合的可以和一次抗體特異結合的二次抗體反應。酶通過催化無色底物產(chǎn)生有色底物，斑點中要鑒定細菌的數(shù)量與有色底物的多少成正比。同時，做一細菌數(shù)已知的對照試驗，通過計算機圖像分析軟件，來確定斑點中細菌的數(shù)量。該方法可以檢測的最低限為每個斑點103細胞。 分子生物學方法對于浸礦微生物的檢測，免疫學方法是針對某一種已知菌或多個菌種的
化學相關推薦
鄂ICP備17016276號-1