【文章內(nèi)容簡介】 科曉化工儀器有限公司色譜技術培訓資料 如 何 選 擇 保 護 柱 怎樣選擇保護柱，但又不影響分離分析？這是色譜工作者經(jīng)常提出的一個問題。通常，在選擇保護柱之前首先要考慮的是樣品是否清潔。對于大部分分析工作者來說，一只1cm長的保護柱便能提供充分的保護作用。但是，如果樣品非常不清潔，或工作中發(fā)現(xiàn)要經(jīng)常更換1cm的保護柱，那么就應選擇2cm或3cm長的保護柱。保護柱越長，自然所裝填的色譜填料越多，則其越能避免污染物進入分析色譜柱的機會。當然，隨著保護柱的長度加長，樣品的保留時間會比使用短保護柱長。一般來說，保護柱的內(nèi)徑與分析色譜柱的內(nèi)徑相同或相當即可。保護柱的填料裝填方式也很重要。目前有薄膜裝填法的保護柱，使用過程很簡單方便，而且可以在實驗室中進行干裝。但是，其最大的缺點是不經(jīng)濟，特別是針對中國的具體情況，一次性使用相對費用較高。另外，薄膜裝填法的保護柱所裝填的色譜填料有限，只能提供很有限的保護作用；不過也因為所裝填的色譜填料較少，保護柱的長度也較短，所以對分析樣品的保留時間的影響也很小。另一種保護柱結構其實質(zhì)是縮短了的色譜分析柱，設計方式上有直連式、手緊式或整體式。整體式設計是由色譜柱的生產(chǎn)廠商直接安裝在色譜分析柱上的，必須與色譜分析柱一同訂貨，可以非常方便地使用，但不能夠被修改。直連式結構設計可在任何時候由色譜工作者來安裝連接，可以與任何品牌的色譜分析柱連接使用，而且還可以根據(jù)樣品的相關情況選擇不同的保護柱長度。手緊式保護柱從結構上講是與直連式保護柱一樣，只是在連接時不需要借助扳手等工具，直接用手上緊即可。另外從保護柱結構的角度看，保護柱的結構又分為是否可以更換保護柱柱芯。現(xiàn)在大多數(shù)的保護柱均可以更換保護柱柱芯，可以降低保護柱的使用成本。大多數(shù)人是根據(jù)色譜分析柱的填料選擇保護柱的填料，正常情況下可以選擇與分析色譜柱一樣的色譜填料。但是，根據(jù)實際的分析工作，也可不必與分析色譜柱的填料完全相匹配。 對于選擇保護柱的原則是：在滿足分析分離要求的前提條件下，盡可能地選擇較短的保護柱結構，盡可能選擇對分離樣品小一些保留性的填料。 科曉儀器精誠服務 聯(lián)系電話：053188032362 88034128 技術服務中心: 053188039532809 科曉化工儀器有限公司色譜技術培訓資料 液相色譜柱使用注意事項 色譜柱在使用前，最好進行柱的性能測試，并將結果保存起來，作為今后評價柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是最佳條件)，只有這樣，測得的結果才有可比性。 樣品的前處理： a、最好使用流動相溶解樣品。 b、使用予處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。 c、。 流動相的配制： 液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達到分離的目的，因此要求流動相具備以下的特點： a、流動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中)。 b、流動相具有一定惰性，與樣品不產(chǎn)生化學反應(特殊情況除外)。 c、流動相的黏度要盡量小，以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果；同時降低柱壓降，延長液體泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。 d、流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應。如使用UV檢測器，最好使用對紫外吸收較低的溶劑配制。 e、流動相沸點不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導致實驗無法進行。 f、在流動相配制好后，一定要進行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。 流動相流速的選擇： 因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。，流速一般選擇1ml／min，／min為佳。 當選用最佳流速時，分析時間可能延長?？刹捎酶淖兞鲃酉嗟南礈鞆姸鹊姆椒ㄒ钥s短分析時間(如使用反相柱時，可適當增加甲醇或乙腈的含量)。 注意： a．由于甲醇廉價，對于反相柱推薦使用甲醇體系(必須使用乙腈的場合除外)。 b．對于正相柱推薦使用沸程為3060℃的石油醚或提純后的己烷作流動相，沒有提純的己烷不得使用。用水最好使用超純水(電阻率大于18兆歐)，去離子水及雙蒸水中含有酚類雜質(zhì)，有可能影響分析結果。 c．含水流動相最*在實驗前配制，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要過夜。最好加入疊氮化鈉，防止細菌生長。 d． μm濾膜過濾，除去微粒雜質(zhì)。 e．使用HPLC級溶劑配制流動相，使用合適的流動相可延長色譜柱的使用壽命，提高柱性能 科曉儀器精誠服務 聯(lián)系電話：053188032362 88034128 技術服務中心: 053188039532809 科曉化工儀器有限公司色譜技術培訓資料 液相色譜儀色譜柱使用及維護　每天用足夠的時間來平衡色譜柱，您就會在處理問題方面獲得最大的補償，而且您的色譜柱的壽命也會變得更長！ 一定得做！ 　　新的色譜柱在使用之前應該在您自己的液相色譜儀上進行性能測試，即使用色譜柱附帶的檢驗報告上測試條件和樣品來測定該色譜柱的柱效。并且，在以后的使用中，應時常對色譜柱進行測試。 卡套柱的安裝（不加預柱） 1．將卡套架套入柱芯 2．將兩片夾套片嵌入柱芯的凹槽，使柱芯高于夾套（見左圖） 3．將已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高過夾套片 4．將卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手擰緊 5．然后依同樣的順序連接好柱子的另一端 6．連接到液相色譜儀，PEEK接頭手擰即可；若為不銹鋼接頭應使用專用扳手 注意：使用卡套柱時，兩端的卡套應時刻連接在柱芯上。不管您是平衡色譜柱或是清洗，任何時候都不能將卡套取下來，否則會造成填料的流失。 卡套柱的安裝（加預柱） 1．將卡套架套入柱芯 2．將兩片夾套片嵌入柱芯的凹槽，使夾套高于柱芯（見左圖） 3．將已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高過夾套片 4．將子彈頭預柱放入卡套片內(nèi) 5．將卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手擰緊 6．然后依同樣的順序連接好柱子的另一端 7．連接到液相色譜儀，PEEK接頭手擰即可；若為不銹鋼接頭應使用專用扳手 更換色譜柱濾網(wǎng)和玻璃棉過濾片（同時可以修補色譜柱） 注意：在取出反相柱芯的濾網(wǎng)和玻璃片之前，應該將色譜柱充分用水和甲醇/乙腈沖洗，而且修補工具的頭部也應該蘸取少量的甲醇/乙腈，以避免在取出濾網(wǎng)和玻璃棉濾片時帶出柱子內(nèi)的填料。 1．將修補工具中的2套入柱芯的頂端 2．將修補工具中的3輕輕地旋入已套著2的柱芯中，并順時針方向旋轉(zhuǎn)到旋緊 3．一手握柱芯，另一只手輕輕地向外拉3，取出柱芯頂端的濾網(wǎng) 4．用一個小鏟子輕輕地取出濾網(wǎng)下面的玻璃棉以及被污染的填料 5．將新的填料用甲醇潤濕，然后填入挖去的部位，壓平 6．照（左圖）裝上新的玻璃棉濾網(wǎng)，并用修補工具中的4將玻璃棉壓入柱芯頂端 7．柱芯頂端套上2，然后參照（左圖）將濾網(wǎng)放入 8．壓緊，然后取下2，再用4將濾網(wǎng)的邊緣壓平 平衡色譜柱 　反相色譜柱在經(jīng)過出廠測試后是保存在乙腈/水中的。請一定確保您所使用的流動相和乙腈/水互溶。由于色譜柱在儲存或運輸過程中可能會干掉，因此在用流動相分析 科曉儀器精誠服務 聯(lián)系電話：053188032362 88034128 技術服務中心: 053188039532809 科曉化工儀器有限公司色譜技術培訓資料 樣品之前，應使用10－20倍柱體積的甲醇或乙腈平衡色譜柱；如果您所使用的流動相中含有緩沖鹽，應注意用純水過渡。 　　硅膠柱或極性色譜柱在經(jīng)過出廠測試后是保存在正庚烷中的。如果該色譜柱需要使用含水的流動相，請在使用流動相之前用乙醇或異丙醇平衡 如何平衡色譜柱？ 　　平衡過程中，將流速緩慢地提高 　　用流動相平衡色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線（緩沖鹽或離子對試劑度如果較低，則需要較長的時間來平衡） 色譜柱的再生 　　進行色譜柱再生時，應使用一個謙價的泵，我們建議最好不使用您的高效液相色譜儀上的泵。