【文章內(nèi)容簡介】 81. 將研好的糊糊倒在干凈的板上，我一般是從中間一次性倒下去，然后用左手托板，輕輕傾斜，使糊糊向板邊緣流動，右手拿研棒將沒鋪到的地方涂均勻，但要注意研棒在接觸糊糊一直到最后涂抹均勻才能離開板，一旦提起就不能再去涂抹，否則會留下痕跡。涂抹結束后，就顛板啦，我的經(jīng)驗是顛的幅度不易大，但頻率可以快些。 82. 顛板。此過程要與前面步驟連續(xù)進行，且不宜久顛，以保證顛好后硅膠還有一定的流動性，放置到平臺時仍可以靠自身流動修正顛板及移動所產(chǎn)生的不均。 83. 將載玻片置于平臺上，用藥匙舀取糊狀硅膠，均勻地鋪在載玻片表面。 84. 鋪板時，用的硅膠量要掌握好。 85. 將硅膠倒入在盛有CMCNa溶液的研缽中，CMCNa溶液的濃度不宜過高，研磨均勻，大約510分鐘，用研棒粘取，成珠滴為好，鋪板，兩面顛簸至平放置平臺上。 86. 載玻片的涂布：將干燥后的載玻片兩片夾在一起，沉浸入糊狀物中，使在載玻片上形成固體層．為了浸蕉一對載玻片，用你的指間夾住載玻片的一端，并盡可能地向下進入所提供的糊狀物中．當載波片一浸入糊狀物中后，立即以快而平穩(wěn)的速度將其拉出，并讓過量的糊狀物滴回．小心的分開載玻片，放到水平臺上，干燥．（注意：糊狀物一定要均勻；要迅速拉出載玻片，大多數(shù)人拉得太慢） 87. 研磨硅膠時，我一般取30 g硅膠H，加入５％的CMCNa 100 ml，研磨，當將研棒提起時，硅膠象成溜似的滴下為正好。 88. 鋪完板后，最好將兩邊的邊緣修理一下，并且各個邊緣都要擦干凈，這樣可以避免跑歪。 89. 邊緣壞一點可以用刀子刮去整齊的一條。 晾干： 90. 對鋪好的板要選擇平整的地方，自然干燥，不易人為強制干燥。干燥后再活化，否則板會開裂。 91. 鋪好的板，要找個干凈的地方放置晾干，這個過程也是耐心的等著它，請勿打擾。 92. 板鋪好后，自然涼干最好，一定是要從玻板后看也是干的，注意一定要放平，最好控制空氣流動。 93. 板子鋪好之后一定要放在平面上陰干（一定是陰干，不然你會后悔的），如果看熒光最好是找一個比較干凈的房間，不然熒光下板子上會有很多點點。 94. 要等陰干且透后才能放入烘箱干燥活化時。還有一點，鋪板和涼板時周圍的環(huán)境要好，桌面要干凈，最怕是有粉塵，如有粉塵落在未干的板上可就慘了，定量不行，可以定性，但不好看。 95. 自然干燥后，放入烘干箱烘12小時以上。 96. 薄層板鋪好后一定要放置在平的臺面上，否則難保證板面硅膠的厚度均勻。 97. 鋪制好的薄層板先讓其稍干后，即看不出有明顯的水印，放入烘箱內(nèi)用50度以下的溫度并開鼓風干燥30分鐘，再升溫干燥至干，注意升溫過快在使用的過程中有可能發(fā)生起層的現(xiàn)象，不利于分離，以上方法經(jīng)本人兩年多的實踐，效果較好且耗時又不太長。 98. 置平整處過夜自然晾干；如使用較急亦可60℃烘干。 活化：99. 活化的目的是除去水分。 100. 自然晾干后，活化一下（105攝氏度40分鐘左右），置于密封的干燥器保存。 101. 再在105~110℃活化，~1小時，冷卻后即可使用。 102. 厚板在活化時容易裂，考慮到化學藥相對容易分離，所以降低活化溫度，自然晾干后，40或60攝氏度的烘箱中2～3小時即可，干燥器中保存。 103. 用于分離中藥的薄板需要活化，活化后要立即使用，可以稱熱點樣飽和，不然空氣中的水分會導致你作無用功，使得吸附色譜轉為分配色譜。 104. 薄層烘干的時候最好不要在帶鼓風的烘箱中烘，容易起皺，或者破裂。 點樣： 105. 藥典：點樣器 一般采用微升毛細管或手動、半自動、全自動點樣器材。 106. 藥典：除另有規(guī)定外，在潔凈干燥的環(huán)境中，用點樣器點樣于薄層板上，一般為圓點狀或窄細的條帶狀，點樣基線距的底邊15～20 mm，高效板一般基線距底邊8～10 mm，圓點狀直徑一般不大于3 mm，高效板一般不大于2 mm；條帶狀寬度一般為5～10 mm。高效板條帶寬度一般為4～8 mm，可用專用半自動或自動點樣器械噴霧法點樣。點間距離可視斑點擴散情況以不影響檢出為宜。一般不少于8 mm，高效板供試品間隔不少于5 mm。點樣時必須注意勿損傷薄層板表面。 107. 點樣，可以用進樣器，也可以用定量毛細管（有點貴啊，5ul的2塊多一根），點樣時盡量使點小且圓整，盡量不要破壞板子。 108. 毛細管點樣，點樣量不能控制。你可以到藥店買1～2ml的注射器作為點樣器，可以滿足TLC鑒別的要求，而且很便宜哦！ 109. 點樣，我上學的時候，老師用比較便宜的進樣器（大約10幾塊錢吧，10μl即可），將針尖打磨圓滑，老師好像是用銼一點一點銼的，這樣點樣的時候樣品溶液不容易沿針尖上行（甲醇溶液都這樣），并且針尖不會刺破已經(jīng)鋪好的薄層板?，F(xiàn)在，我和師兄都是實行的這個辦法，還是比較實用的，?l。當然，點樣的時候手不能抖動，動作要輕 110. 要磨平微量進樣器的針尖，簡單的方法就是，在展缸的蓋子上輕磨（當然是靠近中間部分），就很快能解決問題 ，且很平滑。 111. 關于點樣：我們一直都用液相平頭進樣針，10 ul就夠了，如果點樣量低于1ul的話，就用氣相進樣針。都可以很好的控制點樣量，且斑點也可以滿足要求。速度也快?？梢员苊饷毠芟瓤旌舐拿?。 112. 用定容毛細點樣管：5 ul ，2 ul，1 ul。 113. 對于點樣我也有些心得。原來有專門的點樣管，是10 ul規(guī)格的，是點10 ul的好說，反正點完就是了，但要點5ul或更少，那就全憑眼力了，做得是一點把握沒有啊，但還得點，呵呵。自從發(fā)現(xiàn)可以用微量進樣器后，不僅可以控制的得心應手，不會因為一按不穩(wěn)把藥液給全點上去導致斑點過大，還可以重復利用節(jié)省開支，重要的是還環(huán)保。呵呵！提倡廣大的兄弟姐妹也用微量進樣器替代塑料的點樣管，經(jīng)濟又好用。 平衡與飽和： 114. 藥典：展開前如需要溶劑蒸氣預預平衡，可在展開缸中加入適量的展開劑，密閉，一般保持15～30分鐘，溶劑蒸氣預平衡后，應迅速放入載有供試品的薄層板，立即密閉，展開。如需使展開缸達到溶劑蒸氣飽和的狀態(tài)，則須在展開缸的內(nèi)側壁上貼二條與缸一樣高、寬的濾紙條，一端浸入展開劑中，密封頂蓋，使系統(tǒng)平衡或按正文規(guī)定操作。 115. 飽和也非常重要，邊緣效應很嚴重的不妨用下端浸在展開劑中的濾紙貼在展開缸的內(nèi)壁，這樣飽和效果會好一些。 116. 在層析缸口涂適量凡士林，增加密封性。 117. 層析缸在展開前最好平衡一個小時左右，讓里面的展開劑平衡。也可以在兩邊放濾紙條，增加展開劑的散發(fā)面積，減少邊緣效應。 118. 以展開劑邊緣效應的大小，確定展開劑平衡時間的長短，一般平衡時間在30分鐘即可。 小型薄層色譜在藥物合成中的使用方法經(jīng)驗總結 薄層色譜法(TLC,thinlayer chromatography)是一種在鋪成薄層的固體上進行的平面色譜方法, 由俄國學者N?A?Izmailov等在1938年首次報導。但直到1956 年德國學者E1Stahl較完整地發(fā)展了這個方法,TLC才得到廣泛重視和研究,成為色譜法的一個重要分支,處于活躍和發(fā)展狀態(tài)。EStahl因此項工作獲得IUPAC的Talanta(分析化學)大獎。薄層色譜(TLC)和高效液相色譜(HPLC)具有相同的分離原理,是依據(jù)不同物質在流動相與固定相之間的吸附和解吸速率不同來進行物質的分離。薄層色譜與紙色譜、柱色譜等屬于傳統(tǒng)分析。高效液相色譜、質譜、氣譜等屬于儀器分析。隨著時代的發(fā)展,儀器分析漸漸取代傳統(tǒng)分析,現(xiàn)已成為主流。儀器分析在精密性、準確性、連續(xù)性、重現(xiàn)性等方面,有著傳統(tǒng)分析達不到的優(yōu)點。例如定量分析多組分有機混合物,或者在有標準品的情況下確定未知物時, HPLC法與TLC法比較,具有準確度高、重現(xiàn)性強的優(yōu)點。但是和傳統(tǒng)分析比較,儀器分析主要的弱點就是不靈活,必須按照固定的程序操作,更改條件比傳統(tǒng)方法繁瑣得多。其次是成本高的問題,先期投入大、人員培訓周期長、運行維護的人力、物力費用高。相反,這些正是傳統(tǒng)分析的優(yōu)點。因此,在普通的有機合成、精細化工實驗室,傳統(tǒng)分析仍不可完全被代替,其優(yōu)勢在于靈活多變、應用方便、成本低廉。TLC法有著悠久的歷史,隨著經(jīng)濟發(fā)展,對外交流增多,很多實驗室已采用商品化的薄層板,如滌綸片基硅膠板。商品化硅膠板和自制硅膠板相比,具有性能穩(wěn)定、重現(xiàn)性高的特點,可進行半定量分析[1]。 總之，與經(jīng)典的柱上色譜,常用的氣相色譜、紙上色譜,以及較近發(fā)展起來的高效液相色譜比較,TLC有以下特點:1) 設備簡單,操作方便。2)快捷,展開時間短。3)可采用多種固定相及顯色手段,方法多樣而高效。4)可廣泛選擇流動相。5)檢出靈敏度高,一般可達1010g以下。6)樣品量適用范圍大；7)技術多樣化, 特別是二維展開、濃度梯度展開等,展開機理亦有吸附、分配、離子交換、電泳、等電聚焦等多種,可聯(lián)合采用數(shù)種手段,為其它色譜技術所不及。以上是TLC的長處,但應當指出,TLC在自動化程度及分離效果上比氣相色譜和高效液相色譜稍差,分析特別復雜的樣品有時有困難,也不適于揮發(fā)性樣品的分析。近年來,發(fā)展了高壓TLC、高效離心TLC、圓柱TLC、等離子檢出等新技術,TLC在自動化和高效方面已達到與高效液相色譜同等的水平。小型薄層色譜(mTLC)技術作為合成實驗中的常規(guī)監(jiān)測手段以及TLC和其它色譜技術的前導技術發(fā)揮著重要作用。mTLC技術細節(jié)的掌握和未知體系技術參數(shù)的確定是mTLC應用于新的反應體系的關鍵[2]。1 薄層色譜的制作 使用的化學藥品和儀器有:(1)化學藥品: 使用的主要化學藥品列于表1。表1 品名 規(guī)格 來源硅膠G（60H） TLC專用 青島海洋化工羧甲基纖維素鈉（CMC） 分析純 上?；瘜W試劑二廠甲醇 分析純 上海振興化工二廠乙醇 分析純 上海振興化工二廠 (2)儀器:mTLC儀器一套,自備包括mTLC基板,展開槽,顯色槽。 mTLC薄層板的制備(1)將()cm2載玻片依次用水和乙醇洗凈，晾干。要求玻片無劃痕, 水膜均勻,完全潔凈。置玻片于80℃烘箱干燥,轉入干燥器冷卻至室溫,備用。(2)(%,w/w)調(diào)制硅膠糊(slurry)。(3)將硅膠糊均勻涂于()cm2載玻片上,～(干重)。保持薄板水平,令其自然干燥1～2d。其間保持薄板潔凈。(4)將薄板放入110℃烘箱活化30min。(5)將薄板轉入干燥器,令其自然冷卻至室溫,備用。2 薄層板制備的常見問題及解決方法：CMCNa是一種高分子材料,而高分子材料的溶解必然都會有一個溶脹、溶解的過程,所以配制的時候,應該將稱好的CMCNa逐量的撒在水的表面,讓其自然沉降,注意要散開平鋪,這樣能夠充分浸潤,使其溶脹,之后可以置于水浴鍋內(nèi)加熱溶解,當然如果你不是很急著用的話也完全可以直接用水泡著放一邊,泡個幾天也是可以用的。以下是配置CMCNa過程中需要注意的方面：先將稱好的CMCNa加入所需水量的