[農(nóng)學(xué)]第四章dna復(fù)制(編輯修改稿)
2025-04-18 09:10 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 A polymerase 只能使 DNA從引物的 3’端延伸 DNA復(fù)制如何起始？？？ RNA可能提供了 DNA復(fù)制的 3’端 實(shí)驗(yàn)證據(jù) Ⅰ ： M13phage 的 DNA復(fù)制顯示出對(duì) 轉(zhuǎn)錄抑制劑 的敏感性 [Rif s ] [Rif S ] + M13 M13+ . DNA virus + RF 無 M13 RF Rifalmpin M13 Rifalmpin 有 M13 RF 是 的抑制劑 RF的形成需要 發(fā)動(dòng)合成一 段 RNA分子作為引物 （ RNA提供復(fù)制的 3‘端） ? RF啟動(dòng)后， 的抑制無效 結(jié)論（ Conclusion ）： 實(shí)驗(yàn)證據(jù) Ⅱ ： Reiji等的實(shí)驗(yàn)證據(jù)－－ 每一岡崎片 段都產(chǎn)生一個(gè) RNA－ DNA接頭 后續(xù)研究發(fā)現(xiàn)： ? 細(xì)菌中先導(dǎo)鏈的合成受 Rifalmpin 的抑制 ? 后隨鏈的合成不受 Rifalmpin限制 （ 1） 原因 ： ? 先導(dǎo)鏈的起始需要 RNApol的轉(zhuǎn)錄激活 ? 而后隨鏈的起始由 引發(fā)酶 合成引物，而引發(fā) 酶不受 Rifalmpin的抑制 （ ） 復(fù)制的轉(zhuǎn)錄激活）：復(fù)制起始時(shí)通過 的轉(zhuǎn)錄過程而解開局部的雙鏈 轉(zhuǎn)錄激活時(shí)產(chǎn)生的 RNA能否作為引物目前尚未得出普遍結(jié)論 P119頁 （ 1） （ 2） 組裝成引發(fā)體 完成對(duì)后隨鏈（先導(dǎo)鏈）引物的合成 （ 3） 完成 10 177。 NtRNA引物合成后 DNApo lII 進(jìn)行 DNA鏈的延伸 DNApolⅠ Ligase 主要實(shí)現(xiàn) DNA復(fù)制的轉(zhuǎn)錄激活起始 較先導(dǎo)鏈的啟動(dòng)落后一個(gè) Okazaki片斷 總結(jié)： RNA primed DNA replication Removal of RNA primers and filling of gaps 復(fù)制叉如何誕生？ 有機(jī)體選擇 RNA作為引物的可能原因 最終避免由于最初幾個(gè)核苷酸的復(fù)制錯(cuò)誤 導(dǎo)致的致死突變 !! 后隨鏈上所包含的事件？ 三、 后隨鏈的合成及前體片段的連接 引發(fā)體（包括引發(fā)酶） ppp RNA引物 DNA polymerase III ppp DNA polymerase I DNA polymerase I DNAligase 第五節(jié) 原核生物 DNA復(fù)制 () 一、 DNA復(fù)制機(jī)構(gòu)的研究 利用突變表型來考察基因的功能 但只能利用條件型突變 溫度敏感突變體 材料 : 或噬菌體 二、 DNA復(fù)制的起始 起始方式： a、從頭起始（ denovo initiation） : θ復(fù)制、 D環(huán)復(fù)制、線狀 DNA的復(fù)制 b、共價(jià)延伸（ covalent extesion） 滾環(huán)復(fù)制 （ 1） OriC in E. coli chromosomal DNA oriC與 復(fù)制的起始（從頭起始） ? 四個(gè) 9bp的重復(fù)序列 dnaA結(jié)合位點(diǎn) ? 三個(gè) 13bp的重復(fù)序列 （ 2） 簡(jiǎn)單起始過程 a、涉及主要酶系： DnaA（復(fù)制起始） 、 RNApol是必不可少的，此外涉及到 DnaB（解旋酶）、 DnaC（引發(fā)體組分）、 Hu蛋白、 Gyrase、 SSB、 DnaG（引物酶）、 Top?和 DNApol Ш全酶 b、簡(jiǎn)單步驟： * 轉(zhuǎn)錄激活 * DnaA 識(shí)別并結(jié)合復(fù)制起點(diǎn)， DnaB－ DnaC六聚 體與 oriC 形成 預(yù)引發(fā)體 * DnaG加入形成 引發(fā)體（ oriC引發(fā)體） ，合成引 物 RNA * 引物合成后， DNApol 組裝到引發(fā)的 RNA上，完 成 復(fù)制體 的組裝 DnaA SSB 13bp repeats 涉及轉(zhuǎn)錄激活 （ 3） 加倍時(shí)間 37℃ 20min ～ 10h 復(fù)制時(shí)間： 40min左右 （ 850核苷酸／秒） 分裂過程中其它事件約需 20min（組分、隔膜） 因此－－加倍時(shí)間少于 60min 的細(xì)胞兩輪復(fù)制有共用時(shí)間 共價(jià)延伸方式 （ ） Ф X174的若干正鏈的合成起始－－滾環(huán)復(fù)制過程 三、延伸過程 進(jìn)入的標(biāo)志： DNApol Ш把第一個(gè)核苷酸加到引物 的 3’－ OH端 （一）后隨鏈合成的起始（前體片段的起始） 后隨鏈的第一個(gè)岡崎片段起始于 先導(dǎo)鏈進(jìn)入延伸之后 Φx174 phage后隨鏈的起始 （負(fù)鏈合成、不連續(xù)合成） P117頁 Φx 型引發(fā)體 的組裝以 PriA識(shí)別引發(fā)體組裝位 點(diǎn)（ primosome assembly site pas）開始， 首先形成預(yù)引發(fā)體 預(yù)引發(fā)體與引物酶結(jié)合形成了引發(fā)體 Φx 型引發(fā)體 或其部分組分可沿單鏈 DNA移動(dòng)到每一個(gè)岡崎片段的起點(diǎn) PriA提供引發(fā)體移動(dòng)的動(dòng)力 ? 位于復(fù)制叉處的多酶復(fù)合體（引發(fā)體） 必須快速 從一個(gè)岡崎片段移到另一岡崎片段 ? In lagging Strand 上多酶系統(tǒng)
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