疫學(xué)應(yīng)用ppt課件(2)(編輯修改稿)
2025-02-13 18:20 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 munofluorescence,IF) （ 1）直接熒光法： 熒光素直接標(biāo)記抗體，對(duì)標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。該法優(yōu)點(diǎn)是特異性高，缺點(diǎn)是檢查任一抗原均須制備相應(yīng)熒光抗體。 （ 2）間接熒光法： 用一抗與標(biāo)本中抗原結(jié)合，再用熒光素標(biāo)記的二抗進(jìn)行檢測(cè)。該法優(yōu)點(diǎn)是敏感度比直接法高，制備一種熒光素標(biāo)記的二抗即可用于多種抗原的檢測(cè) ,但非特異性反應(yīng)亦增強(qiáng)。 免疫熒光法分類(lèi) 免疫熒光法圖示 Mouse kidney section Laminin greenfluorescent Qdot174。 565 IgG CD31 redfluorescent Qdot174。 655 IgG Nuclei bluefluorescent Hoechst 33342 Control TSLP TSLP AlexaFluor174。 488 Nuclei propidium iodide HASMC 此法將抗原 抗體反應(yīng)的特異性與 酶催化作用的高效性相結(jié)合 ， 借助酶作用于底物的顯色反應(yīng)判定結(jié)果 。 應(yīng)用酶標(biāo)測(cè)定儀測(cè)定光密度 （ OD） 值可反映抗原含量 ， 靈敏度達(dá) ng/ml甚至 pg/ml水平 。 常見(jiàn)的標(biāo)記物為：辣根過(guò)氧化物酶 （ HRP） 和堿性磷酸酶 （ AP） ２．酶免疫測(cè)定 (enzyme immunoassay, EIA) 常用的方法如下： （ 1）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) (enzyme linked immunosorbent assay， ELISA) （ 2）免疫細(xì)胞或組織化學(xué)（ immunocytochemistry or immunohistochemistry,ICC or IHC) 1） ELISA 是酶免疫測(cè)定中應(yīng)用最廣的技術(shù)，用于 測(cè)定可溶性抗原或抗體。 優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、穩(wěn)定性強(qiáng)，可自動(dòng)化檢測(cè)，從而被廣泛用于檢測(cè)多種病原體抗原或抗體、血液及其他體液中微量蛋白成分、細(xì)胞因子等。 雙抗體夾心法： 用于檢測(cè)特異性抗原 。 該試驗(yàn)所用的包被抗體與酶標(biāo)抗體應(yīng)分別針對(duì)不同抗原決定基 ， 或其中之一用多克隆抗體 ， 且相互間應(yīng)無(wú)交叉反應(yīng) 。 間接法： 用于檢測(cè)特異性抗體 。 用已知抗原包被固相 ， 加入待檢血清標(biāo)本 ， 再加酶標(biāo)記的二抗 ， 加底物觀察顯色反應(yīng) 。 ELISA分類(lèi) 間接法圖示 ELISA反應(yīng)過(guò)程 動(dòng)畫(huà)演示 2)酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)(ELISPOT) ?生物素 （ biotin） 是廣泛分布于動(dòng) 、 植物體內(nèi)的一種生長(zhǎng)因子 ， 又稱(chēng)輔酶 R或維生素 H。 ?親和素 (avidin)是卵白及某些微生物中的一種蛋白質(zhì) ， 由 4個(gè)亞單位組成 。 ?生物素與親和素間具有高度親和力 ， 且均能偶聯(lián)抗體 、 抗原和辣根過(guò)氧化物酶而不影響其生物學(xué)活性 。 3） BAS（ biotin avidin system)ELISA： BASELISA 應(yīng)用 酶標(biāo)記 的抗體與 組織或細(xì)胞抗原 發(fā)生反應(yīng) ， 結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察 ， 對(duì)組織或細(xì)胞表面抗原進(jìn)行定性 、 定量 、 定位 。 4）免疫細(xì)胞或免疫組化技術(shù) ICC IHC 乃用放射性核素標(biāo)記抗原或抗體進(jìn)行免疫學(xué)檢測(cè) 。 該法兼有放射性核素的高靈敏度和抗原 抗體反應(yīng)的特異性 ， 檢測(cè)靈敏度達(dá) pg水平 。 常用于標(biāo)記的放射性核素為 125I和 131I， 分為液相和固相兩種方法 。 該法常用于測(cè)定 微量物質(zhì) ， 如胰島素 、 生長(zhǎng)激素 、 甲狀腺素 、 孕酮等激素 ， 嗎啡 、 地高辛 、IgE等 。 3．放射免疫測(cè)定法 (radioimmunoassay, RIA) ４．化學(xué)發(fā)光免疫分析 將 發(fā)光物質(zhì)（如吖啶酯、魯米諾等）標(biāo)記 抗原或抗體，發(fā)光物質(zhì)在反應(yīng)劑（如過(guò)氧化陰離子）激發(fā)下發(fā)射光子，通過(guò)自動(dòng)發(fā)光分析儀測(cè)定光子產(chǎn)量，可反映待檢樣品中抗體或抗原含量。 該法靈敏度高，常用于檢測(cè) 血清超微量 活性物質(zhì)（甲狀腺素等激素）。 該法又稱(chēng) Western印跡法 ， 其結(jié)合凝膠電泳與固相免疫技術(shù) ， 將借助電泳所區(qū)分的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至固相載體 ， 再應(yīng)用酶免疫 、 放射免疫等技術(shù)進(jìn)行檢測(cè) 。 該法能
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