體細(xì)胞雜交ppt課件(編輯修改稿)
2025-02-10 07:25 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 ofusion: A high frequency AC field is applied between 2 electrodes immersed in the suspension of protoplasts this induces charges on the protoplasts and causes them to arrange themselves in lines between the electrodes to form pearlchain. They are then subject to a high voltage discharge which causes their membranes to fuse where they are in contact. 電融合儀的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)： ? 交變電場部分 ? 高頻直流電擊部分 電融合的基本過程： – 細(xì)胞膜的接觸：當(dāng)原生質(zhì)體置于電導(dǎo)率很低的溶液中時，電場通電后，電流即通過原生質(zhì)體而不是通過溶液，其結(jié)果是原生質(zhì)體在電場作用下極化而產(chǎn)生偶極子，從而使原生質(zhì)體緊密接觸排列成串； – 膜的擊穿：原生質(zhì)體成串排列后，立即給予高頻直流脈沖就可以使原生質(zhì)膜擊穿，從而導(dǎo)致兩個緊密接觸的細(xì)胞融合在一起并圓球化。 關(guān)于融合參數(shù)：交流電壓 交變電場的振幅頻率 交變電場的處理時間 直流高頻電壓 脈沖寬度 脈沖次數(shù) 原生質(zhì)體的融合過程 膜的融合 細(xì)胞質(zhì)融合 發(fā)生 膜融合后的數(shù)小時 核融合 融合可能發(fā)生在細(xì)胞間期，也可能發(fā)生在第一次同步分裂過程中 影響原生質(zhì)體融合的因素 ? 原生質(zhì)體質(zhì)量對細(xì)胞融合起著至關(guān)重要的作用，高質(zhì)量的原生質(zhì)體是細(xì)胞融合的首要條件 ? 融合方法 ? 融合參數(shù)，包括各種融合液都應(yīng)選擇適當(dāng) 三、雜種細(xì)胞的發(fā)育動態(tài) 及體細(xì)胞雜種鑒定 雜種細(xì)胞的發(fā)育動態(tài) 雜種細(xì)胞選擇系統(tǒng) 與體細(xì)胞雜種植株鑒定 體細(xì)胞雜種的特點(diǎn) 體細(xì)胞雜種后代的遺傳 雜種細(xì)胞的發(fā)育動態(tài) ? 核融合 ? 核重組 ? 細(xì)胞器重組 ? 部分核物質(zhì)或細(xì)胞器丟失 ? 核分裂的非同步性 雜種細(xì)胞選擇系統(tǒng)與雜種植株鑒定 1．雜種細(xì)胞的選擇系統(tǒng) ? 外觀選擇：質(zhì)體、細(xì)胞體積等 ? 互補(bǔ)選擇：抗生素、營養(yǎng)缺陷型等 ? 熒光標(biāo)記選擇：親本標(biāo)記不同熒光 2．體細(xì)胞雜種鑒定 ? 形態(tài)鑒定：根據(jù)雙親的形態(tài)學(xué)性狀觀察進(jìn)行鑒定。 ? 細(xì)胞學(xué)鑒定：細(xì)胞器鑒定、染色體鑒定、染色體原位雜交 ? 生化鑒定：同功酶鑒定 ? 分子鑒定： RFLP、 RAPD、 SSR等分子標(biāo)記 形態(tài)鑒定和同功酶鑒定 染色體原位雜交 GISH、 FISH RAPD標(biāo)記鑒定 510 1100 670 bp 750 250 500 2022 1000 bp 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 體細(xì)胞雜種的遺傳 1．細(xì)胞分裂與染色體丟失 如果細(xì)胞分裂而核不發(fā)生融合，在以后的發(fā)育過程中會有兩種結(jié)果：一是細(xì)胞分裂幾次后即停止生長從而導(dǎo)致死亡；二是在發(fā)育過程中某一親本的細(xì)
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