gateway技術(shù)——克隆、表達新方法(編輯修改稿)
2025-02-08 08:03 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 高保真的 Taq酶克隆經(jīng)過驗證，裝入 T載體中 3:入門載體質(zhì)粒和目標表達載體質(zhì)粒的抽提。質(zhì)粒的濃度要求比較高，150ng/ul. 4:引物設(shè)計。根據(jù)入門載體序列的特點，設(shè)計通用引物 和含部分接頭的基因特異性引物 引物設(shè)計： 1通用引物 ： attB1 adapter: 5’GGGGACA AGT TTGTACAAA AAAGCAGGCT 3’ attB2 adapter: 5’GGGGAC CACTTTGTACAAGAA AGCTGGGT 3’ 2含部分接頭的基因特異性引物 ： attB1+gene forward: 5’AA AAA GCA GGC TNN templatespecific sequences3’ attB2+gene reverse: 5’A GAA AGC TGG GTN templatespecific sequences3’ BP重組裝入入門載體 1:添加 attB接頭的 PCR 以攜帶目的基因質(zhì)粒為模板 ，加含部分接頭的基 因特異性引物 ,進行第一輪 PCR 2 :取第一輪的 PCR產(chǎn)物做模板，加入通用引物，進行第二輪 3： PCR產(chǎn)物
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