上海交通大學環(huán)境微生物微生物的變異(編輯修改稿)
2025-02-02 14:36 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 一組中，共有抗性菌落 353個，要比未經(jīng)涂布過的（僅 28個菌落）高得多。 解釋 ：這說明大腸桿菌對 T1噬菌體的抗性突變發(fā)生在未接觸噬菌體前。噬菌體的加入只起甄別這類突變是否發(fā)生的作用，而不是誘導突變的因素。 涂布實驗 (Newbe experiment) Newbe (1949) 獲得免疫性假說 在未噴 T1噬菌體前沒有突變細胞 涂布后噴入T1噬菌體 直接噴入T1噬菌體 自發(fā)突變假說 小菌落在生長時產(chǎn)生抗噬菌體突變 涂布后噴入T1噬菌體 直接噴入T1噬菌體 選用對 T1噬菌體敏感的 ，以相等數(shù)目涂布于 12個平板上 保溫 5小時 ,約繁殖了 3個小菌落 每個小菌落中的抗噬菌體細胞都會形成一個菌落 兩組培養(yǎng)皿菌數(shù)相同抗噬菌體菌落相同 約含 5100個細胞 影印培養(yǎng)法是使在一系列培養(yǎng)皿的相同位置上能出現(xiàn)相同菌落的一種接種培養(yǎng)方法。 1952年 黎德伯格 (J. Lederberg) 夫婦首先進行的實驗。 要點 ：包有滅菌絲絨布的木質(zhì)圓柱（直徑略小于培養(yǎng)皿底）為印章，用不具抗性環(huán)境（如不加抗生素等）的完全培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，以印章輕輕粘取菌落，然后再一一接種到不同的選擇培養(yǎng)基（如含有不同抗生素等）上，培養(yǎng)后，對各培養(yǎng)皿相同位置上的菌落作比較，便可選出相應的突變型菌落。 影印實驗 (replica plating) Joshua Lederberg and Esther Lederberg (1952) 首先把大量對鏈霉素敏感的 大腸桿菌 K12涂布在 不含鏈霉素 的平板 (1)的表面，待其長出密集的小菌落后，用影印法接種到 不含鏈霉素 的培養(yǎng)基平板 (2)上，隨即再影印到 含鏈霉素 的選擇性培養(yǎng)基平板 (3)上。 經(jīng)培養(yǎng)后，在平板 (3)上出現(xiàn)了個別抗鏈霉素的菌落。對培養(yǎng)皿 (2)和 (3)進行比較，就可在平板 (2)的相應位置上找到平板 (3)上那幾個抗性菌落的“孿生兄弟”。 然后把平板 (2)中最明顯的一個部位上的菌落（實際上是許多菌落）挑至不含鏈霉素的培養(yǎng)液 (4)中，經(jīng)培養(yǎng)后，再涂布在平板 (5)上，并重復以上各步驟。 上述過程幾經(jīng)重復后，只要涂上越來越少的原菌液至相當于平板 (1)的培養(yǎng)皿 (5)和 (9)中，就可出現(xiàn)越來越多的抗性菌落，最后甚至可以得到完全純的抗性菌群體。 解釋 ：原始的鏈霉素敏感菌株只通過 (1)→(2)→(4)→(5)→(6) →(8)→(9)→(10)→(12)的移種和選擇序列，就可在根本未接觸鏈霉素的情況下，篩選出大量的抗鏈霉素的菌株。微生物抗藥性是自發(fā)產(chǎn)生的，并與相應的環(huán)境因素毫不相干。 ⑴ ⑵ ⑶ ⑷ ⑸ ⑹ ⑺ ⑻ ⑼ ⑽ ⑾ 含鏈霉素培養(yǎng)皿 不含鏈霉素培養(yǎng)皿 原始 敏感株 replica plating 影印的作用可保證這 3個平板上所生長的菌落的親緣和相對位置保持嚴格的對應性 ⑿ 影印培養(yǎng)技術 突變發(fā)生在曝露青霉素之前 Screening for phenotypes by replica plating 黎德伯格 J. Lederberg J. Lederberg is awarded the Noble Prize in Medicine and Physiology in 1958 以上三個實驗充分說明了抗性突變是菌體接觸所抗物質(zhì)以前就已經(jīng)自發(fā)產(chǎn)生了，藥物并不是誘變因素，含藥物的環(huán)境只起篩選和鑒別抗性菌株的作用。即使不存在鏈霉素，抗鏈霉素的突變株仍然存在。 艱難梭菌 (Clostridium difficile)，屬厭氧性細菌，一般寄生在人的腸道內(nèi)。如果過度服用某些抗生素，艱難梭菌的菌群生長速度加快，影響腸道中其他細菌，引發(fā)炎癥。 ? 2. 自發(fā)性 各種性狀的改變，可以在沒有人為誘變因素處理下自發(fā)的發(fā)生。 ? 3. 稀有性 自發(fā)突變的頻率是較低和穩(wěn)定的，一般在 106 ~109間 ， 轉(zhuǎn)座突變率為 104 。 突變率：每一細胞每一世代中發(fā)生突變的概率，也有用每單位群體在繁殖一代過程中所形成突變體的數(shù)目來表示的。 ? 4. 獨立性 兩個基因發(fā)生突變是各不相關的兩個事件。突變的發(fā)生不僅對于細胞來講是隨機的，對于基因來講也是隨機的。 抗某種藥物的突變型往往并不抗另一種藥物，某一基因的突變既不提高也不降低其它基因的突變率。 ? 5. 誘發(fā)性 通過誘變劑的作用，可提高自發(fā)突變的頻率，一般可提高 10~105倍。 ? 6. 穩(wěn)定性 由于突變的根源是遺傳物質(zhì)結(jié)構(gòu)上發(fā)生了穩(wěn)定的變化，所以產(chǎn)生的新性狀也是穩(wěn)定的，可遺傳的。 ? 7. 可逆性 任何性狀既有野生型變?yōu)橥蛔冃偷恼蛲蛔?，也可發(fā)生回復突變，即突變型回復到野生型。 在一組雄性大鼠進行腹腔注射芳香族化合物如多氯聯(lián)苯油溶液等。以誘導大鼠肝臟酶系的活性， 4天后殺鼠取肝，搗碎后離心制備成肝酶 (S9) 的懸液，然后將待測物和 S9以及沙門氏菌的突變株 (h
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