酶免疫技術(shù)ppt課件(2)(編輯修改稿)
2025-02-01 20:12 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 第三節(jié) 酶聯(lián)免疫吸附試驗 （ ELISA） 一、基本原理 底物顯色 定性或定量的分析 包被 將已知抗原或抗體吸附在固相載體表面 反應(yīng) 加入待測抗體或 抗原和酶標(biāo)抗原 或抗體 洗滌 使結(jié)合在固相上 的抗原抗體復(fù)合物 與未結(jié)合的分離 1 2 3 4 二、方法類型及反應(yīng)原理 （一）檢測抗原的方法 將 己知抗體 包被固相載體，待檢標(biāo)本中的相應(yīng) 抗原 與固相表面的抗體結(jié)合，洗滌去除未結(jié)合成分。然后再與抗原特異的酶標(biāo)抗體結(jié)合，形成固相抗體 抗原 酶標(biāo)抗體復(fù)合物，根據(jù)加底物后的顯色程度確定待檢抗原的含量。 E 固相抗體 標(biāo)本 （ 含抗原 ） 酶標(biāo)抗體 E E 底物 雙抗體夾心法檢測抗原 ? 適用于檢測含有至少兩個抗原決定簇的多價抗原 （ 1）將已知抗體包被于固相反應(yīng)板上，洗滌。 （ 2）加待檢標(biāo)本 ,溫育，洗滌。 （ 3）加酶標(biāo)抗體，洗滌。 （ 4）加底物，根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進(jìn)行該抗原的 定性或定量。 2．技術(shù)要點 E 固相抗體 標(biāo)本 （ 含抗原 ） 酶標(biāo)抗體 E E 底物 （ +） （ ） E E E E E E E E E 雙抗體夾心法測抗原 即在雙抗體夾心法基礎(chǔ)上使用針對抗原分子上 兩個不同表位 的單克隆抗體，分別作為固相抗體和酶標(biāo)抗體。測定時將待檢標(biāo)本和酶標(biāo)抗體同時加入進(jìn)行反應(yīng)，兩種抗體互不干擾，經(jīng)一次溫育和洗滌后，即可加入底物進(jìn)行顯色測定。 E E E 底物 固相抗體 標(biāo)本 （ 含抗原 ） 酶標(biāo)抗體 雙位點一步法檢測抗原 ? 在包被時使用一種單抗，酶標(biāo)記時使用一種單抗 E E E E （ +） E E （ ） 雙位點一步法測抗原 如果待檢標(biāo)本中抗原濃度過高， 容易形成“ 鉤狀效應(yīng) （ hook effect）” 。 鉤狀效應(yīng)嚴(yán)重時，可出現(xiàn)假陰性結(jié)果，必要時可將待檢標(biāo)本適當(dāng)稀釋后重新測定。 注意事項 E E 底物 固相抗體 標(biāo)本 （ 抗原濃度高 ） 酶標(biāo)抗體 E 酶標(biāo)抗原和待檢抗原對固相特異性抗體具有相同的結(jié)合力，二者競爭結(jié)合固相特異性抗體。免疫反應(yīng)后，結(jié)合于固相的酶標(biāo)抗原量與標(biāo)本中待檢抗原含量呈 反比 。待檢抗原量越多，酶標(biāo)抗原與固相抗體結(jié)合越少，底物顯色反應(yīng)越淺；反之則顯色越深，即底物顯色與待檢標(biāo)本中抗原含量呈反比。 酶標(biāo)抗原 E E E E 固相抗體 標(biāo)本 （ 含抗原 ） 底物 E 競爭法檢測抗原 （ 1）將特異性抗體包被于固相反應(yīng)板上，洗滌。 （ 2）待測管中加待檢標(biāo)本和一定量酶標(biāo)抗原的混合溶液，待檢標(biāo)本中如果含有抗原，則與酶標(biāo)抗原競爭固結(jié)合相抗體，使酶標(biāo)抗原與固相載體的結(jié)合量減少。對照管中只加酶標(biāo)抗原，溫育，洗滌。 （ 3）加底物顯色。對照管中顏色深，待測管顏色越淡，表示標(biāo)本中抗原含量越多。 技術(shù)要點 （ +） E E （ ） E E E E E E E E 競爭法測抗原 （二）檢測抗體的方法 將已知抗原吸附于固相載體上，待檢標(biāo)本中相應(yīng)抗體與之結(jié)合，形成固相抗原 抗體復(fù)合物，再用酶
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