神經(jīng)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)ppt課件(編輯修改稿)
2025-02-01 15:23 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 HRP示蹤的常用方法 （ TMB法 ） ? 基本原理： 神經(jīng)組織的冰凍切片或振動切片在含 H2O2的 TMB（四甲基聯(lián)苯胺 )溶液中孵育，組織內(nèi)之 HRP與 H2O2結(jié)合成（ HRPH2O2）絡(luò)合物，此絡(luò)合物可氧化供氫的 TMB，使之形成深蘭色沉淀物，沉積在 HRP周圍。 ? TMB法特點(diǎn)： 靈敏度高，產(chǎn)物在光鏡下易觀察，于明視野下顆粒呈藍(lán)至深藍(lán)色，暗視野呈金色；不宜電鏡檢查。改良 TMB法可避免其缺點(diǎn)（反應(yīng)產(chǎn)物過度的結(jié)晶形成、反應(yīng)的不穩(wěn)定性、易褪色消失等）。 ?實(shí)驗(yàn)步驟： 麻醉動物 導(dǎo)入 HRP 動物存活 灌注固定 取材 切片 組織化學(xué)反應(yīng) 顯微鏡觀察 ： 2%戊巴比妥（ 40mg/kg)腹腔注射。麻醉不宜過深，以免蘇醒過慢，影響 HRP被神經(jīng)元攝取及在其內(nèi)的運(yùn)輸 。 HRP： 動物麻醉后，分離坐骨神經(jīng)，用微量注射器將 1%CBHRP(霍亂原 B亞單位結(jié)合辣根過氧化物酶） 緩慢 注入坐骨神經(jīng)。注射后原位 留針10min，縫合切口，將大鼠置于原環(huán)境中繼續(xù)存活。 ： 指 HRP注入后，動物需存活一段時間，以利于 HRP的攝取、運(yùn)輸及積累。存活期的長短依賴于運(yùn)送速度、運(yùn)送距離及胞體內(nèi) HRP在溶酶體的降解速度，一般為 2472小時。 ： 動物麻醉同前，開胸，經(jīng)左心室 主動脈插管，灌注溫的
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