【文章內(nèi)容簡介】 the world. I39。ll just keep my standards high and work hard on them. 45 釋放 ? 絕大多數(shù) 無包膜病毒 釋放時被感染的細胞崩解，釋放出病毒顆粒，宿主細胞膜破壞，細胞立即死亡。 ? 絕大多數(shù) 有包膜病毒 通過細胞內(nèi)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、空泡，或包上細胞核膜或細胞膜以出芽方式釋放而成為成熟病毒，在一段時間內(nèi)逐個釋出，對細胞膜破壞輕，宿主細胞死亡慢。 ? 從單個病毒吸附開始至所有病毒釋放，此過程稱為感染周期或復(fù)制周期。一個感染細胞一般釋放的病毒數(shù)為 1001000。 You have to work harder if you want to impress the world. I39。ll just keep my standards high and work hard on them. 46 二、 一步生長曲線 ?描述烈性噬菌體生長規(guī)律的實驗曲線，也叫一級生長曲線。 ?以感染時間為橫坐標，病毒效價為縱坐標 You have to work harder if you want to impress the world. I39。ll just keep my standards high and work hard on them. 47 裂解、量噬菌、斑噬菌體的效價 ?裂解量：平均每一個宿主細胞裂解后產(chǎn)生的子代噬菌體數(shù)作為 Burst size（如何計算？？） . ?噬菌斑：噬菌體導(dǎo)致寄主細胞溶解死亡，因而在瓊脂培養(yǎng)基表面形成的空斑。 You have to work harder if you want to impress the world. I39。ll just keep my standards high and work hard on them. 48 噬菌斑 You have to work harder if you want to impress the world. I39。ll just keep my standards high and work hard on them. 49 噬菌體效價 (理解） ?效價 (滴度 Title)是微生物或其產(chǎn)物、抗原與抗體等活性 高低的標志（了解）。 ?噬菌體效價 指噬菌體的濃度，即每毫升樣品含噬菌體的個數(shù)。 ?通常是在含敏感菌的 平板 上形成噬菌斑進行噬菌體的計數(shù)，以每毫升中含有的噬菌斑形成單位（ plaque forming unit/ml或 pfu/ml)表示其效價。 可以反應(yīng)噬菌體的 3個重要特征參數(shù)： ? 潛伏期 ? 裂解期 ? 平穩(wěn)期 二、 一步生長曲線 11 0 01010 20 3040Ecli p se p h a seLa ten t p h a se Ri se p h a se P l a tea u ph a se一步生長曲線T i me (m i n )Plaque numberF i g . O n e st ep g r o w th c u rv e o f T2On e st ep g r o w th c u r v eGr o w th c u r v e i n ho st b a c teria二 一步生長曲線（ one step growth curve） 1939年， Max Delbruck amp。 Emory Ellis： E. coli / bacteriopage 用噬菌體的稀釋液感染高濃度的宿主細胞； 數(shù)分鐘后，加入抗噬菌體的抗血清（中和未吸附的噬菌體）； 將上述混合物大量稀釋，終止抗血清的作用和防止新釋放的噬菌體感染其它細胞 (沈平教材 )； 保溫培養(yǎng)并定期檢測培養(yǎng)物中的噬菌體效價（對噬菌體含量進行計數(shù)）； 以感染時間為橫坐標，病毒的感染效價為縱坐標，繪制出病毒特征性的繁殖曲線； 該實驗標志著分子病毒學(xué)、分子生物學(xué)和分子遺傳學(xué)的建立 Max Delbruck因此榮獲 1969年 Nobel Prize You have to work harder if you want to impress the world. I39。ll just keep my standards high and work hard on them. 52 噬菌體復(fù)制的三個階段 ? 潛伏期； 從噬菌體吸附到細胞到釋放出新噬菌體的最短時期 ? 裂解期（增殖期） 潛伏期后宿主細胞裂解釋放出大量子代病毒的時期 ? 3平穩(wěn)期 裂解末期，受染細胞將子代病毒粒子全部釋放出來，病毒效價穩(wěn)定再最高處的時期。 You have to work harder if you want to impress the world. I39。ll just keep my standards high and work hard on them. 53 裂解量 ?指每個受染細胞，產(chǎn)生的子代病毒粒子的平均數(shù)目，其值等于平穩(wěn)期受染細胞釋放的全部子代病毒離子數(shù)除以潛伏期受染細胞的數(shù)目。 ?取決于病毒和宿主細胞 烈性噬菌體 amp。 溫和噬菌體 烈性噬菌體（ virulent phage）： 大部分噬菌體感染宿主細胞，能在宿主細胞內(nèi)增殖，產(chǎn)生大量子代噬菌體并引起細菌裂解。（ lytic cycle）。 溫和噬菌體或稱溶源性噬菌體（ lysogenic phage）： 有些噬菌體還能將 DNA整合到宿主菌的基因組上，而與細菌共存的特征叫溶原性。能導(dǎo)致溶原性發(fā)生的噬菌體叫溫和噬菌體。 在大多數(shù)情況下，溫和噬菌體的基因組都整合于宿主染色體中（如 λ噬菌體），亦有少數(shù)是以質(zhì)粒形成存在（如 P1噬菌體）。 You have to work harder if you want to impress the world. I39。ll just keep my standards high and work hard on them. 55 溫和噬菌體 ?原 (前 )噬菌體 (prophage)處于整合態(tài)的噬菌體核酸。 ?溶源性菌： 帶有前 噬菌體的細菌 ?★溫和噬菌體的特點 —— ? dsDNA。 ?； ?。 You have to work harder if you want to impress the world. I39。ll just keep my standards high and work hard on them. 56 溫和噬菌體的溶源性反應(yīng)： P71 整合于細菌染色體或以質(zhì)粒形成存在的溫和噬菌體 基因組稱做原噬菌體（ prophage） 在原噬菌體階段，噬菌體的復(fù)制被抑制，宿主細胞 正常地生長繁殖，而噬菌體基因組與宿主細菌染色 體同步復(fù)制，并隨細胞分裂而傳遞給子代細胞。 細胞中含有以原噬菌體狀態(tài)存在的溫和噬菌體基因組 的細菌稱做溶源性細菌（ lysogenic bacteria） 溶源性細菌經(jīng) 自發(fā)裂解 或 誘發(fā)裂解 ，進入裂解循環(huán) You have to work harder if you want to impress the world. I39。ll just keep my standards high and work hard on them. 57 (二）溶原性細菌及其檢出 ? 前噬菌體與細菌基因組復(fù)制一起復(fù)制 ? 有裂解情況 ? 免疫性：對其感染的噬菌體及其相關(guān)的噬菌體 ? 復(fù)愈：經(jīng)過誘發(fā)裂解后存活下來的細菌 ? 溶原性轉(zhuǎn)變：獲得新性狀 ? 局限性轉(zhuǎn)導(dǎo)：整合到一個細菌基因組中的噬菌體 DNA把宿主菌個別鄰近基因轉(zhuǎn)移到另一個細菌中去的現(xiàn)象。 You have to work harder if you want to impress the world. I39。ll just keep my standards high and work hard on them. 58 （二）溶原性細菌及其檢出 ?與敏感性指示菌混合培養(yǎng) ?經(jīng)紫外線照射，培養(yǎng)后，慮除細菌的慮液再與敏感性指示菌混合培養(yǎng) 增殖性感染（ productive infection）： 病毒感染宿主細胞，可完成其復(fù)制循環(huán)過程，產(chǎn)生感染性的子代病毒 此類宿主細胞成為該病毒的允許性細胞。 非增殖性感染（ non productive infection） ： 感染由于病毒、或是細胞的原因，致使病毒的復(fù)制在 病毒進入敏感細胞后的某一階段受阻，結(jié)果導(dǎo)致病毒 感染的不完全循環(huán) 。 在此過程中，由于病毒與細胞的 相互作用，雖然亦可能導(dǎo)致細胞發(fā)生某些變化，甚至 產(chǎn)生細胞病變，但在受染細胞內(nèi)， 不產(chǎn)生有感染性的 病毒子代。 四 非增殖性感染 You have to work harder if you want to impress the world. I39。ll just keep my standards high and work hard on them. 60 流產(chǎn)感染（ abortive infection）； 限制性感染（ restrictive infection）； 潛伏感染（ latent infection）； 病毒的非增殖性感染： P72 請自學(xué)掌握基本概念 四 非增殖性感染 You have to work harder if you want to impress the world. I39。ll just keep my standards high and work hard on them. 61 第三節(jié) 病毒學(xué)研究的基本方法 一、病毒的培養(yǎng) 病毒與細菌不同，病毒是嚴格的活細胞內(nèi)寄生的，因此分離培養(yǎng)病毒應(yīng)采用寄主接種法、雞胚培養(yǎng)法或細胞培養(yǎng)法，而且還必須根據(jù)不同病毒的要求進行選擇，才能得到滿意的結(jié)果。 ? 寄主接種法 噬菌體－細菌 動物病毒－動物細胞或?qū)嶒瀯游? 植物病毒－植物細胞或植物葉片 You have to work harder if you want to impress the world. I39。ll just keep my standards high and work hard on them. 62 二、病毒的鑒定 ?（一）噬菌斑－細菌病毒 ?（二）蝕斑和感染病灶－動物病毒 ?（三） 壞死斑－植物病毒 ?（四）血凝現(xiàn)象及干擾現(xiàn)象 ?（五）細胞病變效應(yīng) ?（六）其它方法（電鏡、分子生物學(xué)） 雙層平板法－噬菌斑測定 ? 噬菌斑 (plaque)測定一般采用雙層平板法