進(jìn)展細(xì)胞死亡ppt課件(編輯修改稿)
2025-01-31 21:05 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 optotic HeLa cells were stained with FITCAnnexinV+PI ?流式細(xì)胞分析 DNA 根據(jù)凋亡細(xì)胞 DNA斷裂和丟失，采用碘化丙啶使 DNA 產(chǎn)生激發(fā)熒光，用流式細(xì)胞儀檢出凋亡的 亞二倍體 細(xì) 胞，同時(shí)又能觀察細(xì)胞的周期狀態(tài)。 3. 線粒體膜勢(shì)能（ ??mt）的檢測(cè) 線粒體熒光染料 ： Rhodamine 12 DiOC6（ 3） 、JC TMRM等對(duì)線粒體膜電位非常敏感 ， 其熒光的增強(qiáng)或減弱說(shuō)明線粒體內(nèi)膜電負(fù)性的增高或降低 。 線粒體跨膜電位的存在使親脂性陽(yáng)離子熒光染料可結(jié)合到線粒體基質(zhì)，其熒光的增強(qiáng)或減弱說(shuō)明線粒體內(nèi)膜電負(fù)性的增高或降低。 Bcl2家族與線粒體相關(guān)細(xì)胞凋亡 ◆ Bcl2是一種 原癌 基因 ， 是 ced9在哺乳類(lèi)中的同源物 ， 能抑制細(xì)胞凋亡 （ 抑制凋亡蛋白酶的激活 ， 直接抗氧化 ， 抑制線粒體釋放促凋亡蛋白質(zhì) ， 抑制凋亡調(diào)節(jié)蛋白對(duì)細(xì)胞的毒作用 ） ◆ 與線粒體及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜相結(jié)合； Bcl2蛋白的羧基末端有一穿膜的結(jié)構(gòu)域； Bcl2家族成員的基因中 ， 常常含有三個(gè)保守的 Bcl2同源區(qū) ， 即 BH1， BH2和 BH3 ◆ 哺乳動(dòng)物細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的 Apaf2即是 CytC （ B 細(xì)胞淋巴瘤 /白血病 2， B cell lymphoma/leukemia2） 分布： 造血細(xì)胞，上皮細(xì)胞，淋巴細(xì)胞等多種瘤細(xì)胞 線粒體凋亡信號(hào)途徑 Mitochondrial Pathway 4. DNA片段化分析 細(xì)胞凋亡時(shí)主要生物化學(xué)特征是其染色質(zhì)發(fā)生濃縮 , 染色質(zhì) DNA在核小體單位之間的連接處斷裂 , 形成 180?200bp整數(shù)倍的寡核苷酸片段 , 在凝膠電泳上表現(xiàn)為梯形電泳圖譜 (DNA ladder)。 ? 熒光素（ fluorescein）標(biāo)記的 dUTP在 脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶 （ TdT Enzyme）的作用下，可以連接到凋亡細(xì)胞中斷裂 DNA的 3’OH末端，并與連接辣根過(guò)氧化酶（ HRP， horseradish peroxidase）的熒光素抗體特異性結(jié)合，后者又與 HRP底物二氨基聯(lián)苯胺（ DAB）反應(yīng)產(chǎn)生很強(qiáng)的顏色反應(yīng)（呈深棕色），特異準(zhǔn)確地定位正在凋亡的細(xì)胞，因而在光學(xué)顯微鏡下即可觀察凋亡細(xì)胞；由于正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒(méi)有 DNA斷裂，因而沒(méi)有 3‘OH形成，很少能夠被染色。 5. TUNEL（ TdTmediated dUTP nick end labeling ） （ TdTmediated dUTP nick end labeling ） ?◆ Caspase家族 Caspase活性位點(diǎn)是半胱氨酸 (Cysteine)， 裂解靶蛋白位點(diǎn)是天冬氨酸殘基后的肽 鍵，因此稱為 Cysteine aspartic acic specific protease，即 Caspase 6. Caspase活性的檢測(cè) caspase 超家族成員及其相應(yīng)底物 Caspase活化 Caspase自身以 非活化 的 Procaspase存在，其激活依賴于其他的 Caspase在它的 天冬氨酸 位點(diǎn)裂解活化或自身活化 熒光物質(zhì)偶聯(lián)的短肽 活化的 Caspase3能夠特異切割 D1E2V3D4X底物，水解 D4X肽鍵 7. WB 8. 凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)和細(xì)胞定位分析 一、細(xì)胞凋亡的研究歷史、概念 二、細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)和生物化學(xué)特征 三、細(xì)胞凋亡與腫瘤等疾病 第一部分 細(xì)胞凋亡 三、細(xì)胞凋亡與疾病 （一） 細(xì)胞凋亡不足 1． 腫瘤 Bcl2表達(dá) ↑ P53突變或缺失 自身免疫疾病 —— 胸
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