陰溝腸桿菌耐藥性分析與產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶及質(zhì)粒介導(dǎo)基因型檢測研究-碩士論文答辯(編輯修改稿)
2025-01-31 18:27 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 高誘導(dǎo)型 AmpC酶+ESBLs 部分去阻遏型 AmpC酶+ESBLs 完全去阻遏型 AmpC酶 +ESBLs 實驗方法 細(xì)菌復(fù)蘇培養(yǎng) 3. 耐藥基因檢測： DNA純度及濃度檢測 細(xì)菌質(zhì)粒 DNA的提取 PCR產(chǎn)物于 %瓊脂糖凝膠電泳，觀察并保存結(jié)果 目的基因測序 按細(xì)菌高純度質(zhì)粒小提中量試劑盒（離心柱型）提取 引物設(shè)計 從 ncbi上查找各基因登錄號，交由上海生工生物有限公司設(shè)計并合成 PCR擴(kuò)增 實驗方法 4. 同源性檢測 細(xì)菌復(fù)蘇培養(yǎng) 細(xì)菌基因組 DNA的提取 PCR擴(kuò)增 試 劑 使用量 Premix Ex Taq 21 μL Forward Primer (10181。M) 1μL Reverse Primer (10181。M) 1μL DNA 2 μL ddH2O 25μL Total 50 μL 預(yù)變性： 95℃ 5min 主循環(huán)： 95℃ 45 sec 52℃ 50sec 35cycles 72℃ 2min 延伸： 72℃ 10min PCR產(chǎn)物于 %瓊脂糖凝膠電泳 ERICPCR電泳圖譜判讀 運用 Quantity one DNA圖譜進(jìn)行聚類和相似性分析，采用 UPGMA方法，條帶位置差異寬容度 %，相似度＞ 80%者為同一帶型，代表同一克隆，＜ 80%者為不同帶型，代表不同克隆，分別依次命名為 A、 B、 C.....型。 結(jié)果與討論 1. 20222022年陰溝腸桿菌的檢出情況及排序 耐藥性監(jiān)測結(jié)果 提示陰溝腸桿菌作為臨床感染常見的條件致病菌之一，占有一定重要的位置，應(yīng)引起臨床重視。 構(gòu)成比% 2. 20222022年陰溝腸桿菌主要標(biāo)本類型中的檢出情況 0 2 4 6 8 10檢出率（% ）分泌物呼吸道尿液無菌體液血液標(biāo)本類型20222022202220222022提示在有皮膚黏膜受損等情況下， 機(jī)體的正常屏障防御功能減弱， 陰溝腸桿菌更易入侵感染而致病。 3. 陰溝腸桿菌中主要標(biāo)本類型分布情況 %%%%%呼吸道標(biāo)本分泌物尿液無菌體液血液 + 骨髓由于臨床送檢標(biāo)本中，痰標(biāo)本的數(shù)量最多，所以，對于呼吸道標(biāo)本中檢出的是感染菌還是定植菌的問題還存在一定疑惑，有待通過結(jié)合臨床相關(guān)資料，進(jìn)行分析統(tǒng)計后進(jìn)一步明確。 4. 陰溝腸桿菌在主要標(biāo)本來源中的耐藥情況 說明陰溝腸桿菌引物泌尿系統(tǒng)感染的耐藥情況較其他系統(tǒng)感染更為嚴(yán)重，臨床治療是應(yīng)根據(jù)藥敏結(jié)果合理選擇抗生素。 5. 株陰溝腸桿菌在主要臨床科室中的耐藥情況 ①這些科室患者大都病情嚴(yán)重，免疫力下降及住院時間較長； ②行氣管插管、氣管切開、呼吸機(jī)及長時間留置靜脈導(dǎo)管、 尿管等侵入性診療操作較多，破壞了機(jī)體的天然屏障功能而 導(dǎo)致感染； ③由于廣泛的使用廣譜抗菌藥物、免疫抑制劑等藥物，抑制了 正常菌群，使體內(nèi)菌群失調(diào)，陰溝腸桿菌定位轉(zhuǎn)移至其他部位， 導(dǎo)致醫(yī)院內(nèi)感染和耐藥菌的流行。 6. 陰溝腸桿菌在不同年齡組間的耐藥情況 原因： ? 成人和老年人長期應(yīng)用抗生素會使敏感菌株不斷被殺滅，留下耐藥菌株大量繁殖，同時使一些抗生素由敏感轉(zhuǎn)為耐藥，這種抗生素的選擇性壓力是造成細(xì)菌耐藥的主要原因。 ? 兒童可能因為較少或無抗生素應(yīng)用史，所以耐藥率較低。 7. 20222022年陰溝腸桿菌對 15種抗菌藥物的耐藥性變遷 反映了我院對抗生素的合理使用及控制管理較好的結(jié)果 。 可能與陰溝腸桿菌產(chǎn)生 β 內(nèi)酰胺酶、整合子、 qnr基因介導(dǎo)耐藥、外膜通透性改變、主動外排泵的系統(tǒng)作用、藥物作用靶位的改變等 [23]耐藥機(jī)制有關(guān)。 臨床上使用第三、四代頭孢菌素及喹諾酮類等抗菌藥物治療本菌感染時， 必須根據(jù)藥敏試驗選擇藥物，否則，即使聯(lián)合用藥也多無效。 ? 七年中，共檢出耐亞胺培南的菌株 56株，應(yīng)引起重視。但是近兩年內(nèi)，亞胺培南仍然是目前抗菌活性最強的藥物，依然可以作為多重耐藥菌感染的重癥疾病的首選藥。 ? 09年后阿米卡星的耐藥率有所下降，可能是由于其具有耳毒性和腎毒性，使其 在臨床上應(yīng)用減少。 AmpC酶和 ESBLs 結(jié)果與討論 產(chǎn)酶表型檢測結(jié)果 酶的類別 菌株數(shù) 產(chǎn)酶率（ %） ESBLs陽性 1 AmpC
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