醫(yī)學(xué)]20xx級研究生生第四章放射性核素標記化合物(編輯修改稿)
2025-01-31 05:54 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 化物酶用量應(yīng)控制 在標記蛋白量的 1%以下 ③ 采用雙酶標記法 (葡萄糖氧化酶 ) ④ pH ⑤ 反應(yīng)時間： 3060min (3)固相氧化劑法 原理： 將氧化劑交聯(lián)在瓊脂糖凝膠上或涂在塑料管或塑料珠子表面 ,形成不溶性的固相氧化劑。 特點： 能簡化標記 中止反應(yīng)不需加還原劑 (3)固相氧化劑法 ① 固相酶法 將乳過氧化物酶或葡萄糖氧化酶交聯(lián)到瓊脂糖凝膠（ Sepharose 4B）上 , 反應(yīng)條件仍同于上述酶法。 ② 氯甘脲 (Iodogen)法 1， 3， 4， 6四氯 3α ,6α 二苯甘脲 將氯甘脲用氯仿溶解后涂于反應(yīng)管底部，用 N2氣吹干，置 20oC冷藏備用。 (3)固相氧化劑法 ③ IodoBeads法 將氯胺 T的衍生物 N氯苯磺胺共價連接到無孔的聚苯乙烯小珠表面。 (3)固相氧化劑法 ① 固相酶法 ② 氯甘脲 (Iodogen)法 ③ IodoBeads法 (3)固相氧化劑法 (4)N溴替丁二酰亞胺 (NBromosuccinimide) 原理： 溴代瑚玻酰亞胺的作用與氯胺 T和 Iodogen法相似。 特點： 標記率高、操作簡單、快、安全 可標記較低濃度蛋白質(zhì) 缺點： 體內(nèi)實驗可能產(chǎn)生微量毒性 三、蛋白質(zhì)與多肽的放射性碘標記技術(shù) 1. 直接標記法 (1)氯胺 T法 (2)乳過氧化物酶法 (3)固相氧化劑法 ① 固相酶法 ② 氯甘脲 (Iodogen)法 ③ IodoBeads法 (4)N溴替丁二酰亞胺 2. 間接標記法 又稱 聯(lián)接標記法 是先將放射性碘 聯(lián)結(jié)到一個小分子載 體上 ,再將這個小分子 物質(zhì)與蛋白質(zhì)結(jié)合。 3丙酸 N琥珀酰亞脂 2. 間接標記法 優(yōu)缺點 優(yōu)點：◎ 避免了蛋白質(zhì)和氧化劑直接接觸 ◎ BoltonHunter試劑主要聯(lián)接到 蛋白質(zhì)分子表面的賴氨酸殘基的 氨基或蛋白質(zhì)的 N末端上 缺點： ◎ 較大分子的引入 ◎ 碘化蛋白質(zhì)的放射性比活度和 碘的利用率均較直接標記法低 二、核酸的放射性碘標記技術(shù)
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