[其它模板]20xx34定稿選修3-12基因工程的基本操作程序(編輯修改稿)
2025-01-30 23:26 本頁面
【文章內容簡介】 兩個切口 獲得目的基因 DNA連接酶 重組 DNA分子（重組質粒） 同一種 基因表達載體的構建 2022/1/3 20 尋根問底： 將生物的所有 DNA直接導入受體細胞不是更簡便嗎？如果這么做，結果會怎樣？ 有人采用總 DNA注射法進行遺傳轉化：即將一個生物中的總 DNA提取出來，通過注射或花粉管通道法導入受體細胞，沒有進行表達載體的構建。 這種方法針對性差，完全靠運氣，也無法確定什么基因導入了受體細胞。此法目前爭議頗多，嚴格來說不算基因工程。 資 料 : 科學家在培育抗蟲棉時，起初把蘇云金芽孢桿菌的抗蟲基因插入載體質粒中，然后導入棉花的受精卵中，結果抗蟲基因在棉花體內沒有表達。 然后在插入抗蟲基因的質粒中插入抗蟲基因 啟動子 ，導入棉花受精卵，長成的棉花植株還是沒有抗蟲能力。科學家又在有啟動子、抗蟲基因的質粒中插入抗蟲基因 終止子 ，導入棉花受精卵，結果成長的植株，有了抗蟲能力。 資料證明：載體構建組成要完整 三、將目的基因導入受體細胞 ： 目的基因進入受體細胞內，并且在受體細胞內維持穩(wěn)定和表達的工程 ： ① 農桿菌轉化法：雙子葉植物和裸子植物。 （ 1） 將目的基因導入植物細胞 ③ 基因槍法：單子葉植物。 ② 花粉管通道法 （ 3） 將目的基因導入微生物細胞 — 感受態(tài)細胞法。 （ 2）將目的基因導入動物細胞 —— 顯微注射法。 ①特點 : 農桿菌轉化法： （ 1）將目的基因導入植物細胞 能感染 雙子葉植物 和 祼子植物 ,對 大多數(shù)單子葉植物 沒有 感染能力 ② 過程 ： Ti質粒的 T— DNA可轉移至受體細胞并整合到其染色體上 ③ 適用生物： 雙子葉植物 、 祼子植物 。 Hin d限制性酶 ⅠⅡ Hin dIII Hin dIII 目的 DNA Ti質粒 蘇云金桿菌 構建表達載體 Bt毒素蛋白基因 蘇云金桿菌 DNA連接酶 TDNA (可轉移 DNA) 知識拓展 農桿菌轉化法的過程： 花粉管通道法： 將目的基因導入植物細胞 ① 操作方法： ② 特點： 在植物花受粉后，花粉形成花粉管還末愈合前期，剪去柱頭，然后，滴入 DNA（含目的基因）使目的基因借助花粉管通道進入受體細胞 十分簡便經(jīng)濟 ③ 例： 轉基因抗蟲棉 基因槍法： 利用壓縮氣體產(chǎn)生的動力 ，將包裹在金屬粒表面的表達載體 DNA打入受體細胞中，使目的基因與其整合并表達的方法 ① 操作方法： ② 金屬粒： 將目的基因導入單子葉植物細胞 鎢粉粒子和金粉粒子，粒子的直徑一般在 ～ 4um 。 ③ 適用：單子葉植物 ①細胞類型： ②操作程序 ： ___顯微注射法： （ 2） 將目的基因導入動物細胞 發(fā)育成新性狀動物 移植到子宮或輸卵管 培養(yǎng)成早期胚胎 顯微注射 取受精卵（體內或體外 受精） 提純含目的基因表達載體 受精卵 ③ 常用法： ②常用菌： ① 微生物作受體細胞原因： 繁殖快、多為單細胞、遺傳物質相對少 ④過程： 大腸桿菌 Ca2+處理 獲得感受態(tài)細胞 Ca2+處理 大腸桿菌 感 受 態(tài) 細 胞 表達載體 與感受態(tài)
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