waters公司的uplc-tqd培訓(xùn)資料ms12lc-msmethoddevelopment(編輯修改稿)
2025-01-03 22:27 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 on 25 由于色譜柱連接不當(dāng)引起的譜帶展寬 譜帶展寬 死體積 連接適當(dāng) 連接不妥 169。2022 Waters Corporation 26 .009 .020 .040 注意：連接管路內(nèi)徑的差異！ 對(duì)于 LCMS常用 ″或 ″的管路 系統(tǒng)配置 (2):管路內(nèi)徑 169。2022 Waters Corporation 27 連接管路的影響 :柱外譜帶展寬 .009 .020 .040 樣品譜帶在管路內(nèi)發(fā)生了 擴(kuò)散 過(guò)長(zhǎng)的管線亦會(huì)造成較大的譜帶展寬 169。2022 Waters Corporation 28 實(shí)例 1：管線內(nèi)徑對(duì)柱效的影響 J. Li 下圖： 柱效： 4000 用 ″內(nèi)徑的管路測(cè)柱效的色譜圖 上圖： 柱效： 1,1000 用 ″內(nèi)徑的管路測(cè)柱效的色譜圖 注： 測(cè)試 同一根 色譜柱 —在 色譜柱與進(jìn)樣器之間 使用 不同 內(nèi)徑的管線 169。2022 Waters Corporation 29 實(shí)例 2:譜帶展寬對(duì)分離度的影響 ? 用戶自己進(jìn)行管線連接 ? 靈敏度降低 ? 儀器： Quattro Ultima ? 代謝產(chǎn)物研究 ? 改善了管線連接 ?更換了進(jìn)樣器與切換閥及質(zhì)譜檢測(cè) 器之間的 10個(gè)接頭 ? 拆掉了 4′內(nèi)徑 ″的多余管線 ?靈敏度提高一倍 ?位于主峰尾部的代謝 產(chǎn)物得以分離檢測(cè) 用戶原有色譜系統(tǒng) 優(yōu)化的系統(tǒng) J. Li ES TIC 169。2022 Waters Corporation 30 液質(zhì)聯(lián)用中流動(dòng)相的選擇 ?有利于色譜分離 滿足 LC的需要 ?有利于電離 — 滿足 MS的需要 ?流動(dòng)相純度 — 影響質(zhì)譜檢測(cè)的重要因素 ?對(duì)樣品的溶解度 ?對(duì)色譜柱填料的損害 169。2022 Waters Corporation 31 2 weeks 1 day 1 week 1 hour Control 5 10 15 20 25 0 Minutes 保存于聚乙烯瓶中的超純水 Conditions Water samples: 40ml trace enrichment @ ml/min Column: C18 reversed phase (Waters) Gradient: linear 100% water to 100% acetonitrile Wavelength: 254 nm 169。2022 Waters Corporation 32 1 day 1 week Control 5 10 15 20 25 0 Minutes 保存于標(biāo)準(zhǔn)棕色玻璃瓶中的超純水 Conditions Water samples: 40ml trace enrichment @ ml/min Column: C18 reversed phase (Waters) Gradient: linear 100% water to 100% acetonitrile Wavelength: 254 nm 169。2022 Waters Corporation 33 pH 因素 —來(lái)自 MS的要求 ? 分析堿性化合物 正離子模式 —加酸降低 pH —例如 :甲酸或乙酸，甲酸銨 甲酸，乙酸銨 乙酸 ? 分析酸性化合物 負(fù)離子模式 —加堿提高 pH —例如 :氨水，碳酸氫銨 氨水 ? 分析混合物或未知物 正、負(fù)離子同時(shí)掃描 169。2022 Waters Corporation 34 pH 值的影響 169。2022 Waters Corporation 35 pH 值的影響 169。2022 Waters Corporation 36 pH 因素 —來(lái)自反相 HPLC的要求 ? 分析酸性化合物 –若有利于保留 — 加酸性緩沖鹽 ,控制低 pH,抑制酸性樣品的電離 — 例如 :磷酸鹽或乙酸鹽 ? 分析堿性化合物 – 若有利于保留 — 加堿提高 pH,例如 :氨水 ,三乙胺 ,但只有少數(shù)色譜柱可以忍受 (硅膠基質(zhì)色譜柱pH為 2－ 8) — 加離子對(duì)試劑 (對(duì)大多數(shù)色譜柱 ) ? LC與 MS在流動(dòng)相上的 矛盾 ? 解決方案：選用合適的色譜柱，避免使用緩沖鹽，或 選用對(duì) MS影響較小的緩沖鹽 169。2022 Waters Corporation 37 LCMS常用的流動(dòng)相和添加劑 ? 流動(dòng)相 —水 —乙腈 —甲醇 —乙醇 —丙醇 —異丙醇 ? 添加劑 —乙酸 —甲酸 —?dú)溲趸@ —甲酸銨 * —乙酸銨 * —碳酸氫銨 * 鹽濃度應(yīng)限制在 10 mM 以下。 169。2022 Waters Corporation 38 不適宜的添加劑 ? 非揮發(fā)性的鹽 (磷酸鹽 , 硼酸鹽 , 檸檬酸鹽 , 等等 ) —會(huì)在離子源部分結(jié)晶、沉積 (需要更多的清洗和保養(yǎng) ) —ZSpray 設(shè)計(jì)可以最大程度的容忍不揮發(fā)性的鹽 ? 表面活性劑 / 洗滌劑 —會(huì)抑制電噴霧電離
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