【文章內(nèi)容簡介】 梅特勒－托利多 PL203 電子天平 瑞士梅特勒－托利多有限公司 SPX— 150B 生化培養(yǎng)箱 天津市泰斯特儀器有限公司 GL— 21M 離心機 上海市離心機械研究所 VD— 1320 型潔凈工作臺 北京東聯(lián)哈爾儀器制造有限公司 HJ3 恒溫磁力攪拌器 江蘇金壇市中大儀器廠 試驗方法 菌株的活化 取在 80℃冰箱凍存的嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌甘油凍存管，室溫溶解后，振勻，按 2%（ v/v）的接種量分別接種到 5mL M17 培養(yǎng)基和 5mL MRS 培養(yǎng)基中，振勻， 37℃恒溫培養(yǎng) 12h，傳代活化 2 次。 菌株的培養(yǎng) 將活化好的嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌，按 2%（ v/v）分別接種量接種到 200mL 菊粉對嗜熱鏈球菌和保 加利亞乳桿菌生長的影響 4 M17 和 MRS 液體培養(yǎng)基中，搖勻， 37℃恒溫培養(yǎng)至生長期中期，將培養(yǎng)至生長期中期的菌液按 3%（ v/v）接種量分別接種到 500mL M17 和 MRS 液體培養(yǎng)基中用于試驗。 嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌生長曲線的測定 將接種量為 3%的嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌培養(yǎng)基，放置在 37℃，恒溫靜止培養(yǎng)，每隔 2h 分別取適量菌液，測定 OD600nm 和 pH 值。 光密度值（ OD 值）檢測原理：當光線通過微生物菌懸液時，由于菌體的散射及吸收作用使光線的透過量降低。在一定范圍內(nèi)，微生物細胞濃度與透光度成反比，與光密度成正比。該方法的優(yōu)點是簡便、迅速，可以連續(xù)測定，適合于自動控制。 菊粉對嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌生長的影響 在 M17 和 MRS 培養(yǎng)基原有成分不改變的基礎上，分別添加 1%、 2%、 3%、 4%的菊粉，將嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌按 3%（ w/v）的接種量接種到培養(yǎng)基中，分別測定每組的 OD600nm 值和 pH 值，測定方法同上。 嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌對菊粉的利用情況 嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌以菊粉為唯一碳源進行體外發(fā)酵試驗，添加量分別與M17 和 MRS 基礎培養(yǎng)基中乳糖和葡萄糖添加量相等，觀察兩菌的生長情況，以培養(yǎng)時間為橫坐標，培養(yǎng)基的 OD 值為縱坐標，繪制生長曲線。 菊粉對嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌發(fā)酵乳酸的影響 將接有嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌的 M17 和 MRS 培養(yǎng)基及改良后的培養(yǎng)基（原有基礎培養(yǎng)基加有 1%、 2%、 3%、 4%菊粉，放置在 37℃培養(yǎng)箱，培養(yǎng) 24h，取適量樣品進行培養(yǎng)基中乳酸含量的測定。 乳酸含量的 測定用高效液相色譜法（ HPLC）。 ⑴樣品處理 取 5mL 培養(yǎng)至 48h 的發(fā)酵液，在 4℃下， 7,311 g 離心 10min，取上清液，經(jīng) 針頭式過濾器過濾，用于乳酸濃度的測定 , 如不立即測定，過濾液轉(zhuǎn)移至10mL 離心管，密封，放置在 4℃保存。 ⑵標準曲線的建立 精確稱取 100mg 乳酸標品于 10mL 容量瓶里，超純水溶解并定容 ，精密吸取儲備液，然后依次稀釋 、 25 倍，一系列濃度的標準品溶液用于高效液相色譜，以峰面積為縱坐標，乳酸濃度為橫坐標做標準曲線，求出直線回歸方程。 ⑶ 色 譜 條 件 色 譜 柱 為 Aminex HPX87H 糖 分 析 柱 （ 氫 型 ）， 300mm （ BIORAD） ,流動相為 5mmol/mL 的稀硫酸（ 1L 去離子水中加 270μL98%的濃硫酸），流速 ，柱溫 65℃，上樣量為 10μL，檢測器為紫外檢測器，波長為 210nm。 統(tǒng)計學分析 數(shù)據(jù)采用 Microsoft Excel 2021 軟件統(tǒng)計分析，每個試驗重復 3 次， 結(jié)果用 3 次獨立 菊粉對嗜熱鏈球菌和保 加利亞乳桿菌生長的影響 5 試驗的均值177。標準差（ 177。SD）形式表示。試驗采用 Microsoft Excel 2021 軟件制圖。 3 結(jié)果與分析 嗜熱鏈球菌和保加利 亞乳桿菌的生長曲線 本試驗測定了嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌在 M17 和 MRS 基礎培養(yǎng)基中每培養(yǎng) 2h的 OD600nm 和 pH 值，見表 31 和 32。以培養(yǎng)時間為橫坐標， OD60 0nm 和 pH 值為縱坐標，建立嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌的生長曲線，見圖 31 和 32。 表 31 嗜熱鏈球菌生長 OD600nm 值和 pH 值 Tab. 31 thermophilic growth of streptococcus OD600nm and pH values 培養(yǎng)時間（ h） OD600nm PH 值 0 3 6 9 12 15 18 21 24 012340 5 10 15 20 25 30時間（h）OD600nm567生長曲線pH曲線 圖 31 嗜熱鏈球菌生長曲線（正常 M17 培養(yǎng)基） thermophilic streptococcus growth curve (normal M17 culture ) 菊粉對嗜熱鏈球菌和保 加利亞乳桿菌生長的影響 6 嗜熱鏈球菌在正常 M17 培養(yǎng)基中 6h 就進入穩(wěn)定生長期，培養(yǎng) 24h 其生長 OD600nm值 最高為 ， pH 呈下降趨勢，培養(yǎng) 24h，最低 pH 為 。 表 32 保加利亞乳桿菌 OD600nm 值和 pH 值 lactobacillus Bulgar ia OD600nm and pH values 培養(yǎng)時間（ h） OD600nm PH 值 0 3 6 9 12 15 18 21 24 0123450 5 10 15 20 25 30時間（h）OD600nm23456生長曲線pH曲線 圖 32 保加利亞乳桿菌生長曲線（正常 MRS 培養(yǎng)基） Bulgaria lactobacillus growth curve (normal MRS culture medium 保加利亞乳桿菌在正常 MRS 培養(yǎng)基中培養(yǎng)至 13h 時進入穩(wěn)定生長期，培養(yǎng) 24h 其生長 OD600nm 值最高為 ， pH 呈下降趨勢，培養(yǎng) 24h，最低 pH 為 。 菊粉對嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌生長的影響 對添加 1%、 2%、 3%、 4%（ w/v）菊粉的 M17 和 MRS 基礎培養(yǎng)基分別接種 3%（ v/v）的嗜熱 鏈球菌和保加利亞乳桿菌， 37℃恒溫培養(yǎng)，每隔 3h 測定各培養(yǎng)基的 OD600 nm 和 pH值，見表 33 至 34。不同菊粉添加量下，兩株菌的生長曲線和 pH 曲線見圖 33 和 34。 菊粉對嗜熱鏈球菌和保 加利亞乳桿菌生長的影響 7 表 3 3 添加菊粉后嗜熱鏈球菌生長 OD600nm 值和 pH 值 after adding inul