毛細管電泳技術(shù)及應(yīng)用(2)(編輯修改稿)
2025-06-20 11:51 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 譜帶展寬的影響 一般情況下， CE中不存在層流，但當毛細管兩端存在壓力差時，出現(xiàn)拋物線形的層流； 產(chǎn)生的原因 ：毛細管兩端液面高度不同。 實際操作時，保持毛細管兩端緩沖溶液 平面高度相同 。 ? 一、高效毛細管電泳儀 ? 二、流程與主要部件 ? 三、進樣方式 ? 四、檢測器 毛細管電泳儀 儀器流程與主要部件 ? 電壓： 0～ 30kV； ? 分離柱不涂敷任何固定液； ? 紫外或激光誘導(dǎo)熒光檢測器； （ 可檢測到： 1019～ 1021 mol/L） （ 1） 0～ 30 kV 穩(wěn)定、連續(xù)可調(diào)的直流電源； （ 2）具有恒壓、恒流、恒功率輸出； （ 3）電場強度程序控制系統(tǒng)； （ 4）電壓穩(wěn)定性： %； （ 5）電源極性易轉(zhuǎn)換； 2. 毛細管柱 （ 1）材料：石英：各項性能好；玻璃：光學、機械性能差； （ 2）規(guī)格：內(nèi)徑 20～75μ m，外徑 350～ 400μ m；長度 =1m 化學惰性，機械穩(wěn)定性好； 4. 檢測器 要求：具有極高靈敏度，可柱端檢測； 檢測器、數(shù)據(jù)采集與計算機數(shù)據(jù)處理一體化； 類型 檢測限 /mol 特點 紫外 可見 1013～ 1015 加二極管陣列，光譜信息 熒光 1015～ 1017 靈敏度高，樣品需衍生 激光誘導(dǎo)熒光 1018～ 1020 靈敏度極高，樣品需衍生 電導(dǎo) 1018～ 1019 離子靈敏，需專用的裝置； CE具體操作步驟： 毛細管電泳的基本步驟包括 清洗毛細管 、 更換電泳緩沖液 、 進樣 、 電泳并同時在線檢測 。 1).清洗毛細管 對于一根新的或久未使用的毛細管 ， 需用 1mol/L的NaOH溶液 、 、 超純水依次清洗 。在有些情況下還需用 、 甲醇或去垢劑清洗 ,強堿溶液可以清除吸附在毛細管內(nèi)壁的油脂 、 蛋白質(zhì)等 ， 強酸溶液可以清除一些金屬或金屬離子 ，甲醇 、 去垢劑可去除疏水性強的雜質(zhì) 。 在進行每次分析前可用相當于毛細管總體積 2~3倍的 溶液清洗一遍 ， 一般為 2~3 min， 而后注入電泳緩沖液 ， 以保證分析結(jié)果的重復(fù)性 。 2). 更替電泳緩沖液 在進行每次分析前可用相當于毛細管總體積 2~3倍的， 一般為 2~3 min， 而后注入電泳緩沖液 ， 以保證分析結(jié)果的重復(fù)性 。 上一步清洗過程結(jié)束后 ， 毛細管和電極從清洗液中移至電泳緩沖液 ， 不可避免地將強堿或強酸等溶液帶至其中 。緩沖液本身也會因揮發(fā) 、 電泳等而改變其離子強度 。 因此對于精確分析 ， 每分析五次后需更換一次樣品盤中的緩沖液 。 一般分析 ， 半天更換一次即可 。 3）毛細管電泳的進樣方式 進樣量：毛細管長度的 1%2%； nL級、非常小； 1. 流體力學進樣方式 （ 1）進樣端加壓 （ 2）出口端抽真空 （ 3）虹吸進樣 tLPd?128π4??進樣體積 毛細管一端插入樣品瓶，加電壓； 2. 電動進樣方式 tL ctrVefeo2π)?? ??（進樣量 進樣不均 ：電歧視現(xiàn)象，淌度大的離子比淌度小的進樣量大； 離子丟失 ：淌度大且與電滲流方向相反的離子可能進不去； 特別適合黏度大的試樣 ； 3. 擴散進樣 試樣通過擴散作用進入分離柱端口處。 ? Buffer: 50 mM phosphate –TEA (pH ) with % HPβCD (w/v) and 50% methanol。 Applied potential: 30 kV。 Sample: 1 mg/L propranolol dissolved in (A) (B) water, (C) methanol。 ? (A) Pressure injection psi., 5 s, ? (B) (C) electrokiic injection 10 kV, 5 s. 014 16 18 20 22 24Time (min)Absorbance14 16 18 20 22 24Time (min)Absorbance014 16 18 20 22 24Time (min)AbsorbanceC A B Effect of injection mode (A)Conditioning of the capillary with a low pH buffer containing CTAB, and injection of a long water plug into the capillary by pressure。 (B) Fieldamplified injection of cations and stacking on the boundary of water plug and the BGS, while removing of the water plug out of the capillary。 (C) Separation voltage is applied. The enantiomers plex with CD and are separated, and the rest of water plug is removed. Schematic diagrams the FAEP 分離模式 八種分離類型，介紹常用的幾種； 根據(jù)試樣性質(zhì)不同，采用不同的分離類型；
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