實(shí)驗(yàn)二染色體組型分析(編輯修改稿)
2025-06-20 01:48 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 缺點(diǎn)，諸如每次檢驗(yàn)需重新標(biāo)記 、已標(biāo)記的探針表現(xiàn)出明顯的不穩(wěn)定性 、需要較長(zhǎng)時(shí)間的曝光時(shí)間和對(duì)環(huán)境的污染等。在觀察結(jié)果時(shí)，需要較多的分裂相進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。此外，由于放射性銀粒和染色體聚集的不同平面，可能引起計(jì)數(shù)上的誤差等。 FISH的基本原理 ?很簡(jiǎn)單 , 就是標(biāo)記了熒光的單鏈 DNA(探針 )和與其互補(bǔ)的 DNA(玻片上的標(biāo)本 )退火雜交 , 通過觀察熒光信號(hào)在染色體上的位置來反映相應(yīng)基因的情況 . 熒光原位雜交（ FISH） ? FISH技術(shù)是 常規(guī)染色體分析 的輔助手段。它是用熒光素標(biāo)記特異探針，與染色體做雜交后，根據(jù)特異的熒光信號(hào)來判斷結(jié)果。 ?它可用于標(biāo)記染色體的識(shí)別、特異融合基因的檢測(cè)、新基因定位，用全染色體涂抹探針識(shí)別復(fù)雜的染色體結(jié)構(gòu)異常。 FISH具有其不可比擬的優(yōu)點(diǎn)： ，探針標(biāo)記后穩(wěn)定，一次標(biāo)記后可使用二年。 ，能迅速得到結(jié)果。 ，可同時(shí)幾種不同探針。 變化的研究，而且還可用于靜止期細(xì)胞的染色體數(shù)量及基因改變的研究。 FISH的技術(shù)特點(diǎn) ： ? FISH選用的標(biāo)本可以是分裂期細(xì)胞染色體也可以是間期細(xì)胞。間期細(xì)胞可以是冰凍切片，也可以是細(xì)胞滴片或印片。 ?生物素 （ Biotin） 地高辛 （ digoxigenin ） , dinitrophenyl(DNP)， aminoacetyl fluorene(AAF)均可用于探針標(biāo)記。 直接標(biāo)記和間接標(biāo)記 ? 用生物素或地高辛標(biāo)記稱為間接標(biāo)記 , 雜交后需要通過免疫熒光抗體檢測(cè)方能看到熒光信號(hào) , 因而 步驟較多 , 操作麻煩 , 其優(yōu)點(diǎn)是在信號(hào)較弱或較小時(shí)可經(jīng)抗原抗體反應(yīng)擴(kuò)大 ? 直接用熒光素標(biāo)記 DNA的方法稱為直接標(biāo)記 . 由于直接標(biāo)記的探針雜交后可馬上觀察到熒光信號(hào) , 省去了煩瑣的免疫熒光反應(yīng) , 不再需要購(gòu)買熒光抗 體 , 也由于近年來熒光素的亮度和抗淬滅性的不斷改進(jìn)和提高 , 直接標(biāo)記的熒光探針越來越成為首選 , 并采用多種不同顏色的熒光 , 方便在同一標(biāo)本上同時(shí)檢測(cè)多種異常 . 其熒光強(qiáng)度 和信號(hào)大小都易于在普通熒光顯微鏡下觀察 , 使 FISH過程變得簡(jiǎn)便而易于操作 . 探針標(biāo)記 ?在已知探針 DNA結(jié)構(gòu)及序列情況下可采用 PCR或 RNA逆轉(zhuǎn)錄法標(biāo)探針。通常用Biotin標(biāo)記的探針應(yīng)大于 100bp，較小的探針可采用 PCR技術(shù)來標(biāo)記。 ?近年來， VYSIS公司成功的生 產(chǎn)了大片段的 DNA探針 （ 100─400kb）。
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