轉(zhuǎn)錄因子dna結(jié)合位點預測分析(編輯修改稿)
2025-06-19 08:16 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 濃度 分配層析技術 相關的概念（二）： ? 遷移率：在一定條件下，在相同的時間內(nèi)某一組分在固定相移動的距離與流動相本身移動的距離之比值。常用 Rf來表示。 ? 物質(zhì)在一定溶劑中的分配系數(shù)是一定的， Rf值也是恒定的，因此可以根據(jù) Rf值來鑒定被分離的物質(zhì)。 Rf = 色斑中心至原點中心的距離 溶劑前緣至原點中心的距離 親和層析法 ? 親和層析（ Affinity Chromatography）是利用生物分子間專一性親和力而進行分離的一種層析技術。 ? 如我們熟悉的：抗原和抗體；酶和底物或輔酶或抑制劑；激素和受體； RNA和其互補的 DNA等。親和層析的分離原理簡單的說就是通過將具有親和力的兩個分子中一個固定在不溶性基質(zhì)上，利用分子間親和力的特異性和可逆性，對另一個分子進行分離純化。 ? 親和層析可用于純化生物大分子、稀釋液的濃縮、不穩(wěn)定蛋白質(zhì)的貯藏、從純化的分子中出去殘余的污染物、用免疫吸附劑吸附純化對此尚無互補配體的生物大分子，分離核酸是親和層析應用的重要方面。 ? 親和層析純化過程簡單、迅速，且分離效率高。對分離含量極少又不穩(wěn)定的活性物質(zhì)尤為有效。缺點是針對某一分離對象，制備專一的配基和尋求層析的穩(wěn)定條件限制了其使用。 親和層析示意圖 離子交換層析 ? 離子交換層析是依據(jù)各種離子或離子化合物與離子交換劑的結(jié)合力不同而進行分離純化。 ? 離子交換層析的固定相是離子交換劑，它是由一類不溶于水的惰性高分子聚合物基質(zhì)通過一定的化學反應共價結(jié)合上某種電荷基團形成的。 ? 離子交換劑包括交換樹脂和交換纖維素兩種。 ? 離子交換劑可以分為三部分：高分子聚合物基質(zhì)、電荷基團和平衡離子。電荷基團與高分子聚合物共價結(jié)合，形成一個帶電的可進行離子交換的基團。平衡離子是結(jié)合于電荷基團上的相反離子，它能與溶液中其它的離子基團發(fā)生可逆的交換反應。平衡離子帶正電的離子交換劑能與帶正電的離子基團發(fā)生交換作用，稱為陽離子交換劑；平衡離子帶負電的離子交換劑與帶負電的離子基團發(fā)生交換作用，稱為陰離子交換劑。 凝膠層析技術 ? 概念：凝膠層析又稱分子篩層析、排阻層析，當生物大分子隨流動相通過裝有作為固定相的凝膠顆粒的層析柱時，根據(jù)它們分子大小不同而進行分離的技術。 ? 原理：凝膠顆粒內(nèi)部具有多孔性網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，被分離的混合物流過層析柱時，比凝膠孔徑大的分子不能進入凝膠孔內(nèi)，在凝膠顆粒之間的空隙向下移動，并最先被洗脫出來；比網(wǎng)孔小的分子能不同程度的自由出入凝膠孔內(nèi)外，在柱內(nèi)經(jīng)過的路程較長移動速度較慢，最后被洗脫出來。 凝膠層析的原理 1. 分子大小不同混合物上柱； 2. 洗脫開始 ， 小分子擴散進人凝膠顆粒內(nèi) ， 大分子被排阻于顆粒之外； 3. 大小分子分開： 4. 大分子行程較短 ， 已洗脫出層析柱 ， 小分子尚在進行中 。 凝膠顆粒是一類具有三維空間多孔性網(wǎng)絡結(jié)構(gòu)的物質(zhì)，不帶電荷，可起濾過或“篩”的作用。 凝膠層析的基本概念 ? 外水體積是指凝膠
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