轉(zhuǎn)錄因子dna結(jié)合位點(diǎn)預(yù)測(cè)分析(編輯修改稿)
2025-06-19 08:16 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 濃度 分配層析技術(shù) 相關(guān)的概念（二）： ? 遷移率：在一定條件下，在相同的時(shí)間內(nèi)某一組分在固定相移動(dòng)的距離與流動(dòng)相本身移動(dòng)的距離之比值。常用 Rf來(lái)表示。 ? 物質(zhì)在一定溶劑中的分配系數(shù)是一定的， Rf值也是恒定的，因此可以根據(jù) Rf值來(lái)鑒定被分離的物質(zhì)。 Rf = 色斑中心至原點(diǎn)中心的距離 溶劑前緣至原點(diǎn)中心的距離 親和層析法 ? 親和層析（ Affinity Chromatography）是利用生物分子間專一性親和力而進(jìn)行分離的一種層析技術(shù)。 ? 如我們熟悉的：抗原和抗體；酶和底物或輔酶或抑制劑；激素和受體； RNA和其互補(bǔ)的 DNA等。親和層析的分離原理簡(jiǎn)單的說(shuō)就是通過(guò)將具有親和力的兩個(gè)分子中一個(gè)固定在不溶性基質(zhì)上，利用分子間親和力的特異性和可逆性，對(duì)另一個(gè)分子進(jìn)行分離純化。 ? 親和層析可用于純化生物大分子、稀釋液的濃縮、不穩(wěn)定蛋白質(zhì)的貯藏、從純化的分子中出去殘余的污染物、用免疫吸附劑吸附純化對(duì)此尚無(wú)互補(bǔ)配體的生物大分子，分離核酸是親和層析應(yīng)用的重要方面。 ? 親和層析純化過(guò)程簡(jiǎn)單、迅速，且分離效率高。對(duì)分離含量極少又不穩(wěn)定的活性物質(zhì)尤為有效。缺點(diǎn)是針對(duì)某一分離對(duì)象，制備專一的配基和尋求層析的穩(wěn)定條件限制了其使用。 親和層析示意圖 離子交換層析 ? 離子交換層析是依據(jù)各種離子或離子化合物與離子交換劑的結(jié)合力不同而進(jìn)行分離純化。 ? 離子交換層析的固定相是離子交換劑，它是由一類不溶于水的惰性高分子聚合物基質(zhì)通過(guò)一定的化學(xué)反應(yīng)共價(jià)結(jié)合上某種電荷基團(tuán)形成的。 ? 離子交換劑包括交換樹脂和交換纖維素兩種。 ? 離子交換劑可以分為三部分：高分子聚合物基質(zhì)、電荷基團(tuán)和平衡離子。電荷基團(tuán)與高分子聚合物共價(jià)結(jié)合，形成一個(gè)帶電的可進(jìn)行離子交換的基團(tuán)。平衡離子是結(jié)合于電荷基團(tuán)上的相反離子，它能與溶液中其它的離子基團(tuán)發(fā)生可逆的交換反應(yīng)。平衡離子帶正電的離子交換劑能與帶正電的離子基團(tuán)發(fā)生交換作用，稱為陽(yáng)離子交換劑；平衡離子帶負(fù)電的離子交換劑與帶負(fù)電的離子基團(tuán)發(fā)生交換作用，稱為陰離子交換劑。 凝膠層析技術(shù) ? 概念：凝膠層析又稱分子篩層析、排阻層析，當(dāng)生物大分子隨流動(dòng)相通過(guò)裝有作為固定相的凝膠顆粒的層析柱時(shí)，根據(jù)它們分子大小不同而進(jìn)行分離的技術(shù)。 ? 原理：凝膠顆粒內(nèi)部具有多孔性網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，被分離的混合物流過(guò)層析柱時(shí)，比凝膠孔徑大的分子不能進(jìn)入凝膠孔內(nèi)，在凝膠顆粒之間的空隙向下移動(dòng)，并最先被洗脫出來(lái)；比網(wǎng)孔小的分子能不同程度的自由出入凝膠孔內(nèi)外，在柱內(nèi)經(jīng)過(guò)的路程較長(zhǎng)移動(dòng)速度較慢，最后被洗脫出來(lái)。 凝膠層析的原理 1. 分子大小不同混合物上柱； 2. 洗脫開始 ， 小分子擴(kuò)散進(jìn)人凝膠顆粒內(nèi) ， 大分子被排阻于顆粒之外； 3. 大小分子分開： 4. 大分子行程較短 ， 已洗脫出層析柱 ， 小分子尚在進(jìn)行中 。 凝膠顆粒是一類具有三維空間多孔性網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的物質(zhì)，不帶電荷，可起濾過(guò)或“篩”的作用。 凝膠層析的基本概念 ? 外水體積是指凝膠
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