核酸分析技術(shù)ok(1)(編輯修改稿)
2025-06-17 01:01 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 率 2Kb 瓊脂糖凝膠電泳分離 DNA 3. 電泳 瓊脂糖凝膠電泳分離 DNA 4. DNA染色 溴化乙錠 核酸電泳的染色劑 —— 溴化乙錠 ? 一種熒光染料， EB分子可嵌入核酸雙鏈的堿基對之間，在紫外線激發(fā)下，發(fā)出紅色熒光 ? 可在凝膠電泳液中加入終濃度為，有時亦可在電泳后，將凝膠浸入該濃度的溶液中染色 10～ 15min ? 瓊脂糖凝膠 EB染色，肉眼可見核酸電泳帶，其 DNA量一般 5ng ? 溴化乙錠太多，凝膠染色過深，核酸電泳帶看不清時，可將凝膠放入蒸餾水浸泡 30min后再觀察 ethidium bromide， EB N +H 2 N N H 2C 2 H 5B r 瓊脂糖凝膠電泳分離 DNA 5. 結(jié)果觀察 DNA的遷移速率決定因素 1 DNA分子的大小 雙鏈 DNA分子遷移的速率與其堿基對數(shù)的常用對數(shù)近似成反比； 2 瓊脂糖濃度 濃度越低，相同核酸分子遷移越快； 3 DNA的構(gòu)象 超螺旋環(huán)狀＞線狀＞切口環(huán)狀。 4 凝膠和電泳緩沖液中的溴化乙錠 溴化乙錠（ EB）插入雙鏈 DNA造成其負電荷減少、剛性和長度增加。 5 所用的電壓 低電壓時 DNA片段遷移率與所用的電壓成正比。 6 瓊脂糖種類 常見的有兩種：標(biāo)準(zhǔn)瓊脂糖和低熔點瓊脂糖； ? 樣品的 電荷效應(yīng) 和凝膠的 篩選效應(yīng) 是分離的主要依據(jù) ? 凝膠是由 丙烯酰胺 聚合而成 聚丙烯酰胺凝膠電泳（ PAGE） 在 TEMED (四甲基乙二胺 ) 催化 過硫酸銨 還原產(chǎn)生的自由基的存在下， 丙烯酰胺 單體的乙烯基聚合形成聚丙烯酰胺的線狀長鏈。 在雙功能交聯(lián)劑如 N， N`亞甲雙丙烯酰胺 的參與下的共聚合反應(yīng)中，聚丙烯胺的交聯(lián)形成三維帶狀網(wǎng)格結(jié)構(gòu)。 網(wǎng)格
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