核酸分析技術(shù)ok(1)-wenkub
2023-05-23 01:01:09 本頁面
【正文】 ? 根據(jù)瓊?cè)芙鉁囟?，把瓊脂糖分為一般瓊脂糖和低熔點瓊脂糖 ? 低熔點瓊脂糖熔點為 62～ 65℃ ，溶解后在 37℃ 下維持液體狀態(tài)約數(shù)小時，主要用于 DNA片段的回收，質(zhì)粒與外源性 DNA的快速連接等 + _ Power 瓊脂糖凝膠電泳分離 DNA ? 凝膠制備 ? 上樣 ? 電泳 ? 染色 ? 結(jié)果觀察 瓊脂糖凝膠電泳分離 DNA 1. 凝膠制備 濃 度 （ %） 標(biāo) 準(zhǔn) (kb) 高強度(kb) 低熔點(kb) 低黏度低溶點(kb) 1~50 ~25 ~15 ~10 ~10 ~12 ~8 ~8 ~6 ~7 ~7 ~4 ~4 ~4 ~3 ~3 ~1 ~1 ~ ~0.1 瓊脂糖類型 凝結(jié)溫度 /℃ 熔化溫度 / ℃ 標(biāo)準(zhǔn)瓊脂糖 35~38 90~95 不同廠家生產(chǎn)的不同商品其凝結(jié)溫度和熔化溫度有一定差異 40~42 85~90 高強度瓊脂糖 34~43 85~95 修飾的低熔點 / 凝點瓊脂糖 25~35 63~65 35 65 超低熔點 8~15 40~45 低黏性低熔點瓊脂糖 25~30 70 38 85 30 75 不同類型瓊脂糖的性質(zhì) 電泳緩沖液 ? 常用三種緩沖液 Tris硼酸 (TBE)、 Tris乙酸 (TAE)、 Tris磷酸 (TPE) ? TBE與 TPE： 緩沖容量高， DNA分離效果好，但 TPE在DNA片段回收時含磷酸鹽濃度高，容易使 DNA沉淀 ? TAE： 緩沖容量低，但價格較便宜，因而推薦選用 TAE。 5 所用的電壓 低電壓時 DNA片段遷移率與所用的電壓成正比。 （一） 聚丙烯酰胺凝膠的本質(zhì) ? 優(yōu)點 聚丙烯酰胺凝膠具有機械強度好，有彈性，
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