【正文】 無(wú)菌吸管分別吸取10105和106。為了清楚地闡述平板菌落計(jì)數(shù)的結(jié)果，現(xiàn)在已傾向使用菌落形成單位(colonyforming units，cfu)而不以絕對(duì)菌落數(shù)來(lái)表示樣品的活菌含量。一般樣品稀釋度要求每小格內(nèi)約有5~10個(gè)菌體為宜。該計(jì)數(shù)板是一塊特制的載玻片，其上由四條槽構(gòu)成三個(gè)平臺(tái)；中間較寬的平臺(tái)又被一短橫槽隔成兩半，每一邊的平臺(tái)上各列有一個(gè)方格網(wǎng)，每個(gè)方格網(wǎng)共分為九個(gè)大方格，中間的大方格即為計(jì)數(shù)室。測(cè)定細(xì)胞數(shù)目的方法有顯微鏡直接計(jì)數(shù)法(direct microscopic count)、平板菌落計(jì)數(shù)法(plate count)、光電比油法(turbidity estimation by spectrophotometer)、最大或然數(shù)法(most probable number MPN)以及膜過(guò)濾法(membrane filtration)等。通過(guò)這些微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，不僅是對(duì)我理論課程的加深，更是對(duì)我實(shí)驗(yàn)?zāi)芰Φ?一個(gè)顯著的提高。第一篇：微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)總結(jié)大全微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)總結(jié)高熹1120152430 時(shí)間如清風(fēng)般從你我指間滑過(guò),無(wú)聲無(wú)息,快得我們都不曾駐足一望,莫然回首間,本學(xué)期的微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)已接近尾聲。本學(xué)期我們一共完成了十個(gè)實(shí)驗(yàn)，分別是：顯微鏡油鏡的使用、細(xì)菌形態(tài)觀察和細(xì)菌的革蘭氏染色、放線菌、酵母菌、霉菌的形態(tài)觀察和微生物的顯微鏡計(jì)數(shù)法、培養(yǎng)基的制備、周?chē)h(huán)境中微生物的觀察以及從土壤中分離純化微生物、細(xì)菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定、環(huán)境因素對(duì)微生物生長(zhǎng)發(fā)育的影響、細(xì)菌鑒定中常用的生理生化反應(yīng)、微生物的誘變育種、水中大腸菌群的計(jì)數(shù)—MPN法、乳酸菌發(fā)酵實(shí)驗(yàn)、甜酒釀發(fā)酵實(shí)驗(yàn)、固定化酵母細(xì)胞發(fā)酵啤酒實(shí)驗(yàn)。第二篇：微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)細(xì)菌群體生長(zhǎng)表現(xiàn)為細(xì)胞數(shù)目的增加或細(xì)胞物質(zhì)的增加。用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板在顯微鏡下直接計(jì)數(shù)是一種常用的微生物計(jì)數(shù)方法。在計(jì)數(shù)前若發(fā)現(xiàn)菌液太濃或太稀，需重新調(diào)節(jié)稀釋度后再計(jì)數(shù)。因此平板菌落計(jì)數(shù)的結(jié)果往往偏低。放菌液時(shí)吸管尖不要碰到液面，即每一支吸管只能接觸一個(gè)稀釋度的菌懸液，否則稀釋不精確，結(jié)果誤差較大。五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告1．結(jié)果2．將培養(yǎng)后菌落計(jì)數(shù)結(jié)果填入下表稀釋度104105106Cfu數(shù)/平板123平均123平均123平均每毫升中的cfu2．思考題(1)為什么融化后的培養(yǎng)基要冷卻至45℃左右才能倒平板?(2)要使平板菌落計(jì)數(shù)準(zhǔn)確，需要掌握哪幾個(gè)關(guān)鍵?為什么?(3)試比較平板菌落計(jì)數(shù)法和顯微鏡下直接計(jì)數(shù)法的優(yōu)缺點(diǎn)及應(yīng)用。（2）調(diào)整菌液濃度 用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)培養(yǎng)24小時(shí)的釀酒酵母菌懸液，并用無(wú)菌生理鹽水分別稀釋調(diào)整為每毫升110210410610810101012106含菌數(shù)的細(xì)胞懸液。本實(shí)驗(yàn)用分光光度計(jì)(spectrophotometer)進(jìn)行光電比濁測(cè)定不同培養(yǎng)時(shí)間細(xì)菌懸浮液的OD值，繪制生長(zhǎng)曲線。(五)實(shí)驗(yàn)報(bào)告1．結(jié)果(1)將測(cè)定的OD600值填入下表：培養(yǎng)時(shí)間對(duì)照 0 3 4 6 8 10 12 14 16 20光密度值OD600(2)繪制大腸桿菌的生長(zhǎng)曲線。（3）、無(wú)菌操作正確。注：經(jīng)一次考核不及格者，可在全班同學(xué)考核結(jié)束后，允許補(bǔ)考一次。（2）、掌握顯微鏡（油鏡）保護(hù)方法血清對(duì)倍稀釋法（1）、用生理鹽水將血清進(jìn)行對(duì)倍稀釋?zhuān)K濃度達(dá)到1/ 1/ 1 /8三個(gè)稀釋度。測(cè)定完畢后，取出試管置37℃繼續(xù)振蕩培養(yǎng)。以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，以細(xì)菌數(shù)目的對(duì)數(shù)或生長(zhǎng)速率為縱坐標(biāo)作圖所繪制的曲線稱(chēng)為該細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線。光波的選擇通常在400~700nm之間，具體到某種微生物采用多少還需要經(jīng)過(guò)最大吸收波長(zhǎng)以及穩(wěn)定性試驗(yàn)來(lái)確定。一般以三個(gè)連續(xù)稀釋度中的第二個(gè)稀釋度倒平板培養(yǎng)后所出現(xiàn)的平均菌落數(shù)在50個(gè)左右為好，否則要適當(dāng)增加或減少稀釋度加以調(diào)整。另取一支lml吸管插入10?1試管中來(lái)回吹吸菌懸液三次，進(jìn)一步將菌體分散、混勻。二平板菌落計(jì)數(shù)法（一）目的要求學(xué)習(xí)習(xí)近平板菌落計(jì)數(shù)的基本原理和方法。3．加樣品將清潔干燥的血細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋上蓋玻片，再用無(wú)菌的毛細(xì)滴管將搖勻的釀酒酵母菌懸液由蓋玻片邊緣滴一小滴，讓菌液沿縫隙靠毛細(xì)滲透作用自動(dòng)進(jìn)入計(jì)數(shù)室，一般計(jì)數(shù)室均能充滿菌液。但此法的缺點(diǎn)是所測(cè)得的結(jié)果通常是死菌體和活菌體的總和。另外，實(shí)驗(yàn)中模式菌的學(xué)習(xí)和使用為未來(lái)科研打好良好基礎(chǔ)，比如典型的革蘭氏陰性菌大腸桿菌和典型的革蘭氏陽(yáng)性菌金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌都是實(shí)驗(yàn)室的常用菌，如果未來(lái)還要從事微生物相關(guān)工作，這幾種模式菌都必不可少。我們?cè)谘芯扛倪M(jìn)措施的同時(shí)，也可以借助于現(xiàn)代信息技術(shù)手段制作視頻資料或多媒體課件進(jìn)行輔助學(xué)習(xí)。所以我認(rèn)為，要做好微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)要有以下的四個(gè)能力：獨(dú)立思考能力我想，在這個(gè)過(guò)程中，其中一個(gè)重要的感悟就是獨(dú)立思考的重要性。在微生物實(shí)驗(yàn)操作時(shí)，有條件要在超凈工作臺(tái)下操作，降低被污染的概率，相關(guān)操作也要在酒精燈附近進(jìn)行。一 顯微鏡直接計(jì)數(shù)法（一）目的要求1．明確血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的原理。圖15—1 血細(xì)胞計(jì)數(shù)板構(gòu)造（一）圖15—2 血細(xì)胞計(jì)數(shù)板構(gòu)造（二）；； 放大后的方格網(wǎng)，中間大方格為計(jì)數(shù)室；；計(jì)數(shù)時(shí)，通常數(shù)五個(gè)中方格的總菌數(shù)，然后求得每個(gè)中方格的平均值，再乘上25或16，就得出一個(gè)大方格中的總菌數(shù)，然后再換算成lml菌液中的總菌數(shù)。計(jì)數(shù)一個(gè)樣品要從兩個(gè)計(jì)數(shù)室中計(jì)得的平均數(shù)值來(lái)計(jì)算樣品的含菌量。3．儀器或其他用具