【正文】 相同。（二）基本原理顯微鏡直接計(jì)數(shù)法是將小量待測(cè)樣品的懸浮液置于一種特別的具有確定面積和容積的載玻片上(又稱(chēng)計(jì)菌器)，于顯微鏡下直接計(jì)數(shù)的一種簡(jiǎn)便、快速、直觀的方法。B（個(gè)）同理，如果是16個(gè)中方格的計(jì)數(shù)板，1mL菌液中的總菌數(shù)=A/516104B=32000A鏡檢，觀察每小格內(nèi)是否有殘留菌體或其他沉淀物。(稀釋度)各3套。5．計(jì)數(shù)培養(yǎng)48h后，取出培養(yǎng)平板，算出同一稀釋度三個(gè)平板上的菌落平均數(shù)，并按下列公式進(jìn)行計(jì)算，每毫升中菌落形成單位(cfu)=同一稀釋度三次重復(fù)的平均菌落數(shù)稀釋倍數(shù)5一般選擇每個(gè)平板上長(zhǎng)有30~300個(gè)菌落的稀釋度計(jì)算每毫升的含菌量較為合適。制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，菌體計(jì)數(shù)可采用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，平板菌落計(jì)數(shù)或細(xì)胞干重測(cè)定等方法。3．根據(jù)所測(cè)得的光密度值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得每毫升的含菌數(shù)。2．接種(培養(yǎng)10~12h)轉(zhuǎn)入盛有50ml LB液的三角瓶?jī)?nèi)，混合均勻后分別取5ml混合液放入上述標(biāo)記的11支無(wú)菌大試管中。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，嚴(yán)格按正確方法操作實(shí)驗(yàn)儀器。（3）、無(wú)菌操作正確。第五篇：微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教案實(shí)驗(yàn)一 顯微鏡的構(gòu)造和使用方法一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康募耙?二、原 理微生物最顯著的特點(diǎn)是個(gè)體微小，必須借助顯微鏡才能觀察它們的個(gè)體形態(tài)和細(xì)胞構(gòu)造，熟悉顯微鏡和掌握其操作技術(shù)是研究微生物不可缺少的手段。（2）區(qū)別營(yíng)養(yǎng)菌絲、氣生菌絲、孢子絲 、孢子絲的活體觀察將培養(yǎng)皿蓋打開(kāi)，選擇菌絲和孢子絲生長(zhǎng)較薄的部位，直接用低倍鏡和高倍鏡觀察。二、實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)菌種灰綠曲霉，黑曲霉，黃曲霉、青霉等。四、實(shí)驗(yàn)方法與步驟馬鈴薯削皮——切塊——稱(chēng)量——加水煮沸——過(guò)濾——往濾液中加葡萄糖、瓊脂粉等——煮沸——分裝——加棉塞——包扎——滅菌（濕熱）。微生物的接種（1）斜面接種五步曲： （2）培養(yǎng)皿接種：（霉菌形態(tài)觀察及鑒定用）倒平板—接種（單/三點(diǎn)接）—接種環(huán)滅菌五、作業(yè)題為什么用稀釋法和平板劃線法能獲得微生物純種？霉菌平板接種為什么要使平板倒置？要求根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果寫(xiě)一篇論文，字?jǐn)?shù)在2000字左右。三、實(shí)驗(yàn)器材試劑：馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂，營(yíng)養(yǎng)瓊脂、淀粉等。四、作業(yè)畫(huà)出供試菌典型結(jié)構(gòu)（不是在一個(gè)視野可全部看到），并注明放大倍數(shù)和名稱(chēng)。細(xì)菌細(xì)胞小而透明，在普通光學(xué)顯微鏡下不易識(shí)別，必須對(duì)它們進(jìn)行染色。注：經(jīng)一次考核不及格者，可在全班同學(xué)考核結(jié)束后，允許補(bǔ)考一次。（2）、掌握顯微鏡（油鏡）保護(hù)方法血清對(duì)倍稀釋法（1）、用生理鹽水將血清進(jìn)行對(duì)倍稀釋?zhuān)K濃度達(dá)到1/ 1/ 1 /8三個(gè)稀釋度。無(wú)故一次不到扣除1分。如果需要，可根據(jù)公式1 klett units=OD/。比色測(cè)定時(shí)，用無(wú)菌生理鹽水作空白對(duì)照，并將OD值填入下表管號(hào)12345678細(xì)胞數(shù)106/ml光密度（OD）每管菌懸液在測(cè)定OD值時(shí)均必須先搖勻后再倒入比色皿中測(cè)定(4)以光密度(OD)值為縱坐標(biāo)，以每毫升細(xì)胞數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。二、基本原理當(dāng)光線通過(guò)微生物菌懸液時(shí)，由于菌體的散射及吸收作用使光線的透過(guò)量降低。，這樣容易加大同一稀釋度幾個(gè)重復(fù)平板間的操作誤差。（三）器材1．菌種 大腸桿菌菌懸液。位于格線上的菌體一般只數(shù)上方和右邊線上的。計(jì)數(shù)室的刻度一般有兩種規(guī)格，一種是一個(gè)大方格分成25個(gè)中方格，而每個(gè)中方格又分成16個(gè)小方格(圖15—2)；另一種是一個(gè)大方格分成16個(gè)中方格，而每個(gè)中方格又分成25個(gè)小方格，但無(wú)論是哪一種規(guī)格的計(jì)數(shù)板，每一個(gè)大方格中的小方格都是400個(gè)。總之，測(cè)定微生物生長(zhǎng)量的方法很多，各有優(yōu)缺點(diǎn)，工作中應(yīng)根據(jù)具體情況要求加以選擇。但此法的缺點(diǎn)是所測(cè)得的結(jié)果通常是死菌體和活菌體的總和。3．加樣品將清潔干燥的血細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋上蓋玻片，再用無(wú)菌的毛細(xì)滴管將搖勻的釀酒酵母菌懸液由蓋玻片邊緣滴一小滴，讓菌液沿縫隙靠毛細(xì)滲透作用自動(dòng)進(jìn)入計(jì)數(shù)室，一般計(jì)數(shù)室均能充滿(mǎn)菌液。二平板菌落計(jì)數(shù)法（一）目的要求學(xué)習(xí)習(xí)近平板菌落計(jì)數(shù)的基本原理和方法。另取一支lml吸管插入10?1試管中來(lái)回吹吸菌懸液三次，進(jìn)一步將菌體分散、混勻。一般以三個(gè)連續(xù)稀釋度中的第二個(gè)稀釋度倒平板培養(yǎng)后所出現(xiàn)的平均菌落數(shù)在50個(gè)左右為好，否則要適當(dāng)增加或減少稀釋度加以調(diào)整。光波的選擇通常在400~700nm之間，具體到某種微生物采用多少還需要經(jīng)過(guò)最大吸收波長(zhǎng)以及穩(wěn)定性試驗(yàn)來(lái)確定。以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，以細(xì)菌數(shù)目的對(duì)數(shù)或生長(zhǎng)速率為縱坐標(biāo)作圖所繪制的曲線稱(chēng)為該細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線。測(cè)定完畢后，取出試管置37℃繼續(xù)振蕩培養(yǎng)。帶菌材料的處理：含菌培養(yǎng)基應(yīng)滅菌后再作為垃圾處理。液體和半固體培養(yǎng)基的細(xì)菌接種方法（無(wú)菌操作）（1）、將菌種接種到液體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基內(nèi)。α為鏡口角。二、實(shí)驗(yàn)材料菌種啤酒酵母，黑根霉，高大毛霉器材顯微鏡，載玻片，蓋玻片，接種鉤，酒精燈，無(wú)菌水，乳酸苯酚，吸水紙等。比較青霉和曲霉屬霉菌的個(gè)體形態(tài)特點(diǎn)。平板分離法普遍適用于微生物的分離與純化，其基本原理是選擇適合于待分離微生物的生長(zhǎng)條件，如營(yíng)養(yǎng)成分、酸堿度、溫度和氧等要求，或加入某種抑制劑造成只利于該微生物生長(zhǎng)，而抑制其它微生物生長(zhǎng)的環(huán)境，從而淘汰一些不需要的微生物。培養(yǎng)基：PDA培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。由于微生物具有不同的營(yíng)養(yǎng)類(lèi)型，對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的要求也各不相同。（水浸片法）無(wú)菌水滴加于載玻片上——取菌——涂片——蓋上蓋玻片——鏡檢（10倍定位，40倍觀察芽殖）。鏡檢：低倍鏡——定位；高倍鏡——觀察；油鏡——觀察鏡檢完畢后的工作：擦拭鏡頭（標(biāo)本）等，還原顯微鏡，登記，洗手，離開(kāi)。細(xì)菌在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)情況及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀察（1）、正確描述固體培養(yǎng)基的菌落、菌苔。1認(rèn)真按要求完成實(shí)驗(yàn)報(bào)告。該方法準(zhǔn)確度高、操作簡(jiǎn)便。測(cè)