【正文】 相同。（二）基本原理顯微鏡直接計數(shù)法是將小量待測樣品的懸浮液置于一種特別的具有確定面積和容積的載玻片上(又稱計菌器)，于顯微鏡下直接計數(shù)的一種簡便、快速、直觀的方法。B（個）同理，如果是16個中方格的計數(shù)板，1mL菌液中的總菌數(shù)=A/516104B=32000A鏡檢，觀察每小格內(nèi)是否有殘留菌體或其他沉淀物。(稀釋度)各3套。5．計數(shù)培養(yǎng)48h后，取出培養(yǎng)平板，算出同一稀釋度三個平板上的菌落平均數(shù)，并按下列公式進(jìn)行計算，每毫升中菌落形成單位(cfu)=同一稀釋度三次重復(fù)的平均菌落數(shù)稀釋倍數(shù)5一般選擇每個平板上長有30~300個菌落的稀釋度計算每毫升的含菌量較為合適。制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時，菌體計數(shù)可采用血細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)，平板菌落計數(shù)或細(xì)胞干重測定等方法。3．根據(jù)所測得的光密度值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得每毫升的含菌數(shù)。2．接種(培養(yǎng)10~12h)轉(zhuǎn)入盛有50ml LB液的三角瓶內(nèi)，混合均勻后分別取5ml混合液放入上述標(biāo)記的11支無菌大試管中。實驗過程中，嚴(yán)格按正確方法操作實驗儀器。（3）、無菌操作正確。第五篇：微生物學(xué)實驗教案實驗一 顯微鏡的構(gòu)造和使用方法一、實驗?zāi)康募耙?二、原 理微生物最顯著的特點是個體微小，必須借助顯微鏡才能觀察它們的個體形態(tài)和細(xì)胞構(gòu)造，熟悉顯微鏡和掌握其操作技術(shù)是研究微生物不可缺少的手段。（2）區(qū)別營養(yǎng)菌絲、氣生菌絲、孢子絲 、孢子絲的活體觀察將培養(yǎng)皿蓋打開，選擇菌絲和孢子絲生長較薄的部位，直接用低倍鏡和高倍鏡觀察。二、實驗材料實驗菌種灰綠曲霉，黑曲霉，黃曲霉、青霉等。四、實驗方法與步驟馬鈴薯削皮——切塊——稱量——加水煮沸——過濾——往濾液中加葡萄糖、瓊脂粉等——煮沸——分裝——加棉塞——包扎——滅菌（濕熱）。微生物的接種（1）斜面接種五步曲： （2）培養(yǎng)皿接種：（霉菌形態(tài)觀察及鑒定用）倒平板—接種（單/三點接）—接種環(huán)滅菌五、作業(yè)題為什么用稀釋法和平板劃線法能獲得微生物純種？霉菌平板接種為什么要使平板倒置？要求根據(jù)實驗結(jié)果寫一篇論文，字?jǐn)?shù)在2000字左右。三、實驗器材試劑：馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂，營養(yǎng)瓊脂、淀粉等。四、作業(yè)畫出供試菌典型結(jié)構(gòu)（不是在一個視野可全部看到），并注明放大倍數(shù)和名稱。細(xì)菌細(xì)胞小而透明，在普通光學(xué)顯微鏡下不易識別，必須對它們進(jìn)行染色。注：經(jīng)一次考核不及格者，可在全班同學(xué)考核結(jié)束后，允許補(bǔ)考一次。（2）、掌握顯微鏡（油鏡）保護(hù)方法血清對倍稀釋法（1）、用生理鹽水將血清進(jìn)行對倍稀釋，終濃度達(dá)到1/ 1/ 1 /8三個稀釋度。無故一次不到扣除1分。如果需要，可根據(jù)公式1 klett units=OD/。比色測定時，用無菌生理鹽水作空白對照，并將OD值填入下表管號12345678細(xì)胞數(shù)106/ml光密度（OD）每管菌懸液在測定OD值時均必須先搖勻后再倒入比色皿中測定(4)以光密度(OD)值為縱坐標(biāo)，以每毫升細(xì)胞數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。二、基本原理當(dāng)光線通過微生物菌懸液時，由于菌體的散射及吸收作用使光線的透過量降低。，這樣容易加大同一稀釋度幾個重復(fù)平板間的操作誤差。（三）器材1．菌種 大腸桿菌菌懸液。位于格線上的菌體一般只數(shù)上方和右邊線上的。計數(shù)室的刻度一般有兩種規(guī)格，一種是一個大方格分成25個中方格，而每個中方格又分成16個小方格(圖15—2)；另一種是一個大方格分成16個中方格，而每個中方格又分成25個小方格，但無論是哪一種規(guī)格的計數(shù)板，每一個大方格中的小方格都是400個?？傊?，測定微生物生長量的方法很多，各有優(yōu)缺點，工作中應(yīng)根據(jù)具體情況要求加以選擇。但此法的缺點是所測得的結(jié)果通常是死菌體和活菌體的總和。3．加樣品將清潔干燥的血細(xì)胞計數(shù)板蓋上蓋玻片，再用無菌的毛細(xì)滴管將搖勻的釀酒酵母菌懸液由蓋玻片邊緣滴一小滴，讓菌液沿縫隙靠毛細(xì)滲透作用自動進(jìn)入計數(shù)室，一般計數(shù)室均能充滿菌液。二平板菌落計數(shù)法（一）目的要求學(xué)習(xí)習(xí)近平板菌落計數(shù)的基本原理和方法。另取一支lml吸管插入10?1試管中來回吹吸菌懸液三次，進(jìn)一步將菌體分散、混勻。一般以三個連續(xù)稀釋度中的第二個稀釋度倒平板培養(yǎng)后所出現(xiàn)的平均菌落數(shù)在50個左右為好，否則要適當(dāng)增加或減少稀釋度加以調(diào)整。光波的選擇通常在400~700nm之間，具體到某種微生物采用多少還需要經(jīng)過最大吸收波長以及穩(wěn)定性試驗來確定。以培養(yǎng)時間為橫坐標(biāo)，以細(xì)菌數(shù)目的對數(shù)或生長速率為縱坐標(biāo)作圖所繪制的曲線稱為該細(xì)菌的生長曲線。測定完畢后，取出試管置37℃繼續(xù)振蕩培養(yǎng)。帶菌材料的處理：含菌培養(yǎng)基應(yīng)滅菌后再作為垃圾處理。液體和半固體培養(yǎng)基的細(xì)菌接種方法（無菌操作）（1）、將菌種接種到液體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基內(nèi)。α為鏡口角。二、實驗材料菌種啤酒酵母，黑根霉，高大毛霉器材顯微鏡，載玻片，蓋玻片，接種鉤，酒精燈，無菌水，乳酸苯酚，吸水紙等。比較青霉和曲霉屬霉菌的個體形態(tài)特點。平板分離法普遍適用于微生物的分離與純化，其基本原理是選擇適合于待分離微生物的生長條件，如營養(yǎng)成分、酸堿度、溫度和氧等要求，或加入某種抑制劑造成只利于該微生物生長，而抑制其它微生物生長的環(huán)境，從而淘汰一些不需要的微生物。培養(yǎng)基：PDA培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。由于微生物具有不同的營養(yǎng)類型，對營養(yǎng)物質(zhì)的要求也各不相同。（水浸片法）無菌水滴加于載玻片上——取菌——涂片——蓋上蓋玻片——鏡檢（10倍定位，40倍觀察芽殖）。鏡檢：低倍鏡——定位；高倍鏡——觀察；油鏡——觀察鏡檢完畢后的工作：擦拭鏡頭（標(biāo)本）等，還原顯微鏡，登記，洗手，離開。細(xì)菌在培養(yǎng)基中生長情況及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀察（1）、正確描述固體培養(yǎng)基的菌落、菌苔。1認(rèn)真按要求完成實驗報告。該方法準(zhǔn)確度高、操作簡便。測