微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)[最終定稿](文件)
【正文】 每次實(shí)驗(yàn)前預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)的目的、原理和方法，做到心中有數(shù)。實(shí)驗(yàn)過程中認(rèn)真及時(shí)做好實(shí)驗(yàn)記錄。帶菌材料的處理：含菌培養(yǎng)基應(yīng)滅菌后再作為垃圾處理?？己藘?nèi)容共8項(xiàng)，每位同學(xué)通過抽簽考其中的一項(xiàng)內(nèi)容。（2）、掌握血清對(duì)倍稀釋的原理及方法，能正確使用刻度吸管。革蘭氏染色法（1）、口試回答細(xì)菌涂片的制作方法（2）、將一張已涂好的細(xì)菌玻片進(jìn)行革蘭氏染色（3）、要求染色步驟及各項(xiàng)染色時(shí)間正確，操作熟練。液體和半固體培養(yǎng)基的細(xì)菌接種方法（無菌操作）（1）、將菌種接種到液體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基內(nèi)。（3）、正確觀察出鏡下細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)。補(bǔ)考成績通過后只計(jì)及格。本實(shí)驗(yàn)主要介紹目前微生物學(xué)研究中最常用的普通光學(xué)顯微鏡的結(jié)構(gòu)和使用方法，目的在于使同學(xué)們通過本實(shí)驗(yàn)，對(duì)光學(xué)顯微鏡有比較全面的了解，并重點(diǎn)掌握明視野普通光學(xué)顯微鏡中油鏡的使用。α為鏡口角。六、作業(yè)（可選）哪些方法可以提高顯微鏡的分辨率？為什么有時(shí)候在低倍鏡下可看到的目標(biāo)，換用高倍鏡則無法看到？實(shí)驗(yàn)二 細(xì)菌、放線菌的形態(tài)觀察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康募耙? 二、細(xì)菌染色的基本原理 G＋與G－細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)不同，當(dāng)用結(jié)晶紫初染后，像簡單染色法一樣，所有細(xì)菌都被染成蘭紫色，碘作為媒染劑，它能與結(jié)晶紫結(jié)合成結(jié)晶紫碘的復(fù)合物，從而增強(qiáng)了染料與細(xì)菌的結(jié)合力。細(xì)菌常用堿性染料來進(jìn)行簡單染色，這是因?yàn)樵谥行?，堿性或弱酸性溶液中，細(xì)菌細(xì)胞通常帶負(fù)電荷，而堿性染料在電離時(shí)，其分子的染色部分帶正電荷，很容易使細(xì)菌結(jié)合使菌體著色，經(jīng)染色后的細(xì)菌細(xì)胞與背景形成鮮明的對(duì)比，在顯微鏡下更易于識(shí)別。4．氣生菌絲、孢子絲的印片觀察載玻片——滴1滴美蘭染液——蓋玻片印片——印片面向下置于美蘭中——吸去多余染液——鏡檢（用油鏡觀察）——維護(hù)還原顯微鏡。二、實(shí)驗(yàn)材料菌種啤酒酵母，黑根霉，高大毛霉器材顯微鏡，載玻片，蓋玻片，接種鉤，酒精燈，無菌水，乳酸苯酚，吸水紙等。（1）肉眼觀察（2）顯微鏡觀察打開培養(yǎng)皿蓋，將蓋倒置，在低倍鏡下觀察，注意假根和匍匐絲的結(jié)構(gòu)，孢囊結(jié)構(gòu)和孢囊孢子。比較酵母菌、放線菌和細(xì)菌的菌落特征。器材顯微鏡，載玻片，蓋玻片，接種環(huán)，酒精燈，乳酸苯酚，吸水紙等。比較青霉和曲霉屬霉菌的個(gè)體形態(tài)特點(diǎn)。但從營養(yǎng)角度分析，培養(yǎng)基中一般含有微生物所需的C源、N源、無機(jī)鹽、生長因子以及水等。器皿：移液管（1ml）、培養(yǎng)皿、試管、三角瓶、搪瓷缸、量筒等。營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的配制稱量45克營養(yǎng)瓊脂，加水至1000毫升，煮沸后分裝，加棉塞滅菌。平板分離法普遍適用于微生物的分離與純化，其基本原理是選擇適合于待分離微生物的生長條件，如營養(yǎng)成分、酸堿度、溫度和氧等要求，或加入某種抑制劑造成只利于該微生物生長，而抑制其它微生物生長的環(huán)境，從而淘汰一些不需要的微生物。儀器：電爐、恒溫培養(yǎng)箱。（2）平板劃線法：制平板—制菌懸液—?jiǎng)澗€—培養(yǎng)—獲得純種微生物。培養(yǎng)基：PDA培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。取225ml蒸餾水于500ml具塞三角瓶中，包扎后滅菌。其他：牛皮紙、紗布、棉花、棉線繩。任何一種培養(yǎng)基制成后應(yīng)及時(shí)的滅菌，以備培養(yǎng)菌使用，一般培養(yǎng)基滅菌采用高壓蒸汽滅菌。由于微生物具有不同的營養(yǎng)類型，對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的要求也各不相同。：(1)制片：取干凈載玻片——加1滴乳酸苯酚——在菌落中心與邊緣之間鉤出少量菌（帶培養(yǎng)基）置于乳酸苯酚——加蓋玻片煮微沸——鏡檢.(2)觀察：將制片放在顯微鏡下，用低倍鏡觀察菌絲的粗細(xì)、顏色、分生孢子頭形態(tài)；曲霉頂囊大小、形態(tài)、可育面積、分生孢子梗粗細(xì)、顏色、表面特征，有無橫隔，小梗著生情況、大小、層數(shù)，分生孢子形態(tài)，大小，表面特征。掌握觀察曲霉、青霉的主要形態(tài)特征的制片方法。區(qū)別孢囊與氣泡在顯微鏡下的差別：氣泡會(huì)吸附大量孢子，且中央亮，兩邊暗，而孢囊中間厚，整個(gè)區(qū)域都暗。（水浸片法）無菌水滴加于載玻片上——取菌——涂片——蓋上蓋玻片——鏡檢（10倍定位，40倍觀察芽殖）。放線菌菌落和細(xì)菌菌落有何不同之處？放細(xì)菌的菌體為何不易挑?。繉?shí)驗(yàn)三 酵母菌和接合菌的形態(tài)觀察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康募耙笳莆战湍妇徒雍暇浼皞€(gè)體主要形態(tài)特征。四、方法和步驟 取菌（要求無菌操作）——涂片——干燥——固定——染色（1min）——水洗——干燥——鏡檢（形狀、大小、排列方式）（1）表面形狀大小、顏色、邊緣、緊密程度等。G－菌肽聚糖層薄，交聯(lián)松散，乙醇脫色不能使其結(jié)構(gòu)收縮，其脂含量高, 乙醇將脂溶解，縫隙加大，結(jié)晶紫碘復(fù)合物溶出細(xì)胞壁，沙黃復(fù)染后呈紅色。鏡檢：低倍鏡——定位；高倍鏡——觀察；油鏡——觀察鏡檢完畢后的工作：擦拭鏡頭（標(biāo)本）等，還原顯微鏡，登記，洗手，離開。（2）光學(xué)系統(tǒng)：目鏡、物鏡、聚光器、反光鏡、濾光片。要求把題目和答案寫在實(shí)驗(yàn)報(bào)告紙上，統(tǒng)一收齊后和第一次實(shí)驗(yàn)報(bào)告一起送到我辦公室生科樓104。（2）、操作技術(shù)手法正確熟練（3）、脫色程度控制較好。細(xì)菌在培養(yǎng)基中生長情況及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀察（1）、正確描述固體培養(yǎng)基的菌落、菌苔。（2）、要求劃線分區(qū)正確，接種劃線手法正確、熟練。（2）、要求操作方法、步驟正確，能準(zhǔn)確判斷結(jié)果?？己说攸c(diǎn)：微免實(shí)驗(yàn)課上課的實(shí)驗(yàn)室考核內(nèi)容及要求如下：顯微鏡（油鏡）的使用和保護(hù)方法（1）、提供一張細(xì)菌玻片標(biāo)本，要求能正確使用油鏡觀察到細(xì)菌的基本形態(tài)。1認(rèn)真按要求完成實(shí)驗(yàn)報(bào)告。如遇火險(xiǎn)，先關(guān)掉火源，再用濕布掩滅，必要時(shí)用滅火器。實(shí)驗(yàn)過程中要嚴(yán)格無菌操作、防止雜菌污染。(3)次生代謝產(chǎn)物的大量積累在哪個(gè)時(shí)期？根據(jù)細(xì)菌生長繁殖的規(guī)律，采用哪些措施可使次生代謝產(chǎn)物積累更多？評(píng)論這張第二篇：微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)基本要求微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)基本要求及成績?cè)u(píng)定一、思想和態(tài)度要求樹立嚴(yán)謹(jǐn)認(rèn)
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