【正文】 PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備。在蛋白質(zhì)的復(fù)制和合成中起著儲存和傳遞遺傳信息的作用?？蓱?yīng)用于臨床微生物學(xué)、血液篩選、遺傳病診斷和預(yù)防、法醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的核酸檢測。每完成1個(gè)循環(huán)需2～4min，2～3h就能將待擴(kuò)目的基因擴(kuò)增放大幾百萬倍。bDNA不存在擴(kuò)增物的交叉污染,這較PCR是一大進(jìn)步。其它擴(kuò)增產(chǎn)物分析方法還有限制性內(nèi)切酶酶切分析、特異性探針雜交分析以及DNA序列分析等。（使用二次擴(kuò)增的套式PCR擴(kuò)增方法）PCR反應(yīng)需使用引物、dNTPs、DNA聚合酶（如Taq酶等）、緩沖液、和適量無RNA/DNA酶超純水、以及模板（DNA或cDNA）。兩套靶探針分別與病毒RNA的pol基因的不同區(qū)域特異結(jié)合。PCR由變性—退火—延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成。RNA平均長度大約為2000個(gè)核苷酸，而人的DNA卻是很長的，約有3X10^9個(gè)核苷酸。目前主要使用的方法有以下幾種：NASBA是由一對引物介導(dǎo)的、連續(xù)均一的、體外特異性核苷酸序列等溫?cái)U(kuò)增RNA的新技術(shù)。檢測HIVRNA,需要先利用逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)將RNA轉(zhuǎn)錄為cDNA，繼而以cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增即可，這樣的反應(yīng)稱為RTPCR。bDNA有數(shù)十個(gè)覆蓋整個(gè)基因組的探針,可以方便地檢測HIV某些變異株,但靈敏度不及PCR，提高bDNA靈敏度是一大難點(diǎn)。自動化核酸擴(kuò)增儀使用酶聯(lián)比色分析或熒光探針雜交等原理測定。使用商品化RTPCR一步法試劑進(jìn)行第一輪擴(kuò)增反應(yīng)。后者再與放大探針即bDNA探針雜交。(PCR)PC