【正文】 家食品藥品監(jiān)督管理局公布的可用于保健食品、衛(wèi)生部公布或批準可以食用以及生產(chǎn)普通食品的范圍內(nèi)，擬用于保健食品的原料。 鑒于動物、人的種屬和個體之間的生物學差異，安全系數(shù)通常為 100。 ，需大于或等于人攝入量的 300倍。 30天喂養(yǎng)試驗 劑量設計 ：至少設三個劑量組和一個對照組。精子的畸形主要是指形態(tài)的異常，已知精子的畸形是決定精子形成的基因發(fā)生突變的結(jié)果。一般取 LD50的 1/ 1/ 1/8作為三個劑量。 急性聯(lián)合毒性：兩種或兩種以上的受試物，可能發(fā)生拮抗、相加或協(xié)同的聯(lián)合方式，可以根據(jù)一定的公式計算和判定標準來確定這三種不同的作用。 ： ? 一、二階段試驗結(jié)果與國外產(chǎn)品不一致的 ? 國外少數(shù)國家或地區(qū)食用的原料或成分 ? 水提取物，大于常規(guī)服用量 ? 用水提以外的其它常用工藝生產(chǎn)的，大于常規(guī)用量 選擇毒理學試驗的基本原則 國內(nèi)外均無食用先例 不同食用人群和（或）不同功能的保健食品 選擇毒理學試驗的基本原則 對受試保健食品的要求 ? 單一已知化學成分，應提供物理和化學性質(zhì) ? 多種原料的配方產(chǎn)品，應提供配方 ? 配方產(chǎn)品，必要時還應提供各組分，功效成分的 ? 物理和化學性質(zhì)及其檢測報告 ? 提供原料來源、生產(chǎn)工藝、人的可能攝入量。 如僅以該原料生產(chǎn)的，可申請免做毒理學試驗。 骨髓細胞微核試驗 目的 ： 檢測整體動物體內(nèi)骨髓嗜多染紅細胞微核發(fā)生率，以評價受試物致突變的可能性。 取股骨，收集骨髓，制片，染色，鏡檢 劑量設計 ：同骨髓細胞微核試驗 哺乳動物骨髓細胞染色體畸變試驗 觀察及評價指標 ： 每只動物分析 100個中期相細胞 ，每個劑量組不少于1000個。 如三項試驗均為陰性，則可繼續(xù)進行下一步的毒性試驗。 最小觀察到有害作用劑量 ≤ 人可能攝入量的 100倍，或觀察到毒性反應的最小劑量組其受試物在飼料中比例 ≤10 ％，放棄。 應綜合考慮的問題 毒性效應關系 對由受試物引起的毒性效應進行分析評價時，要考慮在同一劑量水平下毒性效應隨時間的變化情況。 （ 2）產(chǎn)品的原料、配方存在明顯的安全性問題，如配方含有“可用于保健食品的原料”名單以外的原料，且未進行新資源食品安全性毒理學評價。 存在的問題 ? 充分了解受試物 ， 至少是中試產(chǎn)品 。 存在的問題 ? Ames實驗 8磅15分鐘高壓滅菌 。 177。 存在的問題 ? 30天或 90天喂養(yǎng)實驗 30天喂養(yǎng)試驗以體重的 10%計 ， 90天喂養(yǎng)試驗以體重的 8%計 ， 這是經(jīng)過大量資料統(tǒng)計得出 ，但將受試物以 1020%的濃度飲水給予動物 ， 又不計飲水量 ， 與報告的劑量設計是否基本一致 ？ 有的按每 100gBw給 10ml含有受試物的水 ， 飲畢再給飲用水 ？ ， 解釋是受試物不好吃 。 （ 3） 均衡性 試驗組間年齡、性別、社會狀況構(gòu)成、身體狀況以及試驗開始時各項功能主要指標均衡可比。 注意事項：不認可增強單項免疫力功能 。 各功能試驗審評要點 根據(jù)樣品的用途進行選擇 ， 方案一 （ 四氯化碳肝損傷模型 ） 和方案二（ 酒精肝損傷模型 ） 方案一 主要指標：谷丙轉(zhuǎn)氨酶 +谷草轉(zhuǎn)氨酶 +肝組織病理學檢查 判定：模型成立的前提下 ， ALT或 AST任一項指標陽性 ， 病理結(jié) 果陽性 。 各功能試驗審評要點 5. 改善皮膚油份功能試驗 受試對象：受試者的年齡為 30～ 50歲 ， 皮膚油份≦ 10或皮膚油份 ≥ 27。 人體試驗 受試對象：選則年齡在 45－ 65歲身體健康者 要求 ： （ 1） 盡可能考慮如年齡 、 性別 、 飲食等因素 。 人體試驗 受試對象：慢性咽炎人群 ， 咽炎的急性發(fā)作期及病變轉(zhuǎn)移至咽部的人應排除 。 注意事項： （ 1） 選用雄性大鼠 。 ⑤ 同時報告中還要求有對其它不良發(fā)應觀察描述 。 各功能試驗審評要點 12. 調(diào)節(jié)腸道菌群功能檢測方法 動物實驗 主要指標： 雙歧桿菌 、 乳桿菌 、 腸球菌 、 腸桿菌 、 產(chǎn)氣莢膜梭菌 判定：符合以下任一項 ， 可判定動物實驗結(jié)果陽性 （ 1） 雙歧桿菌和 /或乳桿菌明顯增加 ， 產(chǎn)氣莢膜梭菌減少或無明顯變化 ， 腸球菌 、腸桿菌無明顯變化 。 各功能試驗審評要點 動物實驗 主要指標：小腸運動實驗 排便時間 糞便重量 糞便粒數(shù) 糞便性狀 判定： 5或 6小時內(nèi)排糞便重量或糞便粒數(shù)任一項指標陽性 ， 同時小腸運動實驗和首次排便時間任一指標陽性 注意事項： （ 1） 該實驗經(jīng)常存在著毒理學與功能學食物利用率不一致的現(xiàn)象 。 ? 人體資料：由于存在著動物與人之間的種屬差異 ， 在將動物實驗結(jié)果外推到人時 ， 應盡可能收集人群服用受試樣品后的效應資料 。 注意事項：選用健康大鼠 ， 體重 160～ 180克 。 （ 2） 成人方案： 試驗設計：采用自身和組間兩種對照設計 。 排除因病理性原因?qū)е仑氀皣乐刎氀颊?。 ② 報告中應有對運動狀況的描述 。 人體試驗 受試對象：乳母年齡 35歲 ， 乳量不足 ， 嬰兒吃不飽 ， 母子身體均健康的志愿受試者 。 人體試驗 受試對象：選擇血鉛含量較高的自愿受試者 ， 兒童血鉛 100μg/L 以上 ，成人血鉛 200μg/L 以上 。 要求： （ 1） 在試驗分組時 ， 盡可能考慮如病程 、 服藥種類等因素 ， 進行均衡性檢驗 。 各功能試驗審評要點 4. 改善皮膚水份功能試驗 受試對象：受試者的年齡為 30～ 50歲 ， 皮膚水分≦ 12。 各功能試驗審評要點 （ 方案二 ） ① 不含鈣的產(chǎn)品：骨鈣含量 /骨密度較模型對照組明顯增加 ， 其它指標 （ 體重除外 ） 不顯著低于卵巢切除＋溶劑組 。 （ 4） 對于選擇的受試人群需要長期服藥的試驗 ， 受試者必須在服藥的基礎上進行試食試驗 。 ? 當載體或輔料本身可能具有與受試物相同的功能時 ， 應設載體對照 。 177。 177。 存在的問題 ? 樣品前處理 （ 一 ） 液體類 （ 二 ） 酒類 （ 三 ） 固體類 （ 四 ） 菌類 （ 五 ） 以某些食品為載體的保健食品：如富含微量元素的雞蛋 、 南瓜粉等 存在的問題 ? LD50中存在的問題 LD50還用對照組 。 新原料安全性毒理學試驗要求 毒性試驗的劑量設計 高劑量組應出現(xiàn)毒性作用但不引起動物死亡，低劑量組應不出現(xiàn)毒性作用，并求出未觀察到有害作用劑量（ NOAEL）。 （ 2）數(shù)據(jù)偏離歷史對照較大，需檢驗機構(gòu)做出解釋。 安全性評價的科學性和藝術(shù)性 安全性評價的藝術(shù)性 ： ； 、技術(shù)能力的相符性； 。 血液學指標 ：喂養(yǎng)結(jié)束后測定血紅蛋白、紅和白細胞總數(shù)及分類，必要時測定血小板或網(wǎng)織紅細胞數(shù)等指標。 小鼠睪丸染色體畸變試驗 時間周期 ：一般為 7周 35天適應期 小鼠經(jīng)口連續(xù)染毒 5天，與首次給樣后的 1214天處死動物取材，（取材前 6h，腹腔注 射秋水仙素）。 原理 ：當受試物作用于細胞周期 G1期和 S期時，可誘發(fā)染色體型畸變，而作用于 G2期時則誘發(fā)染色體單體型畸變。可設五個劑量組，組間距不超過 5倍。 樣品的預處理原則 處理方法與產(chǎn)品推薦飲用方法相同 推薦用： 80℃ 90℃ 常壓用水浸泡 30min 水量為受試物的 10倍，提取 2次， 2次提取液合并濃縮至所需濃度 標明該濃縮液與受試物的比例 樣品的預處理原則 （ 1）不需濃縮的受試物 乙醇濃度 15％ 直接進行試驗 乙醇濃度 15％ 乙醇濃度應調(diào)至 15％ （ 2）需濃縮的受試物 乙醇濃度 15％ 濃縮后調(diào)至原乙醇濃度 乙醇濃度 15％ 濃縮后調(diào)至 15％乙醇濃度 在進行乙醇濃度調(diào)整時必須用原酒基 樣品的預處理原則 選擇可溶性介質(zhì) 給受試物的方法：灌胃 其最高濃度最大灌胃量時達不到人體推薦量的 100倍，按采用實際達到的倍數(shù) 標明受試物的膨脹系數(shù) 樣品的預處理原則 在進行 Ames試驗或體外細胞試驗時需將受試物滅活。 受試物濃縮倍數(shù)應符合試驗要求。 鼠傷寒沙門氏菌（ Ames）試驗 目的： 檢測受試物的誘變性，預測其遺傳危害和潛在致癌作用的可能性。同時觀察嗜多染紅細胞與成熟紅細胞的比例。 小鼠睪丸染色體畸變試驗 目的 ：檢測整體動物睪丸染色體畸變發(fā)生率，以評價受試物對整體哺乳動物睪丸生殖細胞的致突變性。 對于不能獲得 LD50的受試物 ：最高劑量為人可能攝入量的 100倍，或按最大灌胃劑量或在飼料中的最大摻入量。 實驗組和對照組均發(fā)生腫瘤，但實驗組發(fā)生率高。 （ 10％）或液體受試物經(jīng)濃縮后仍達不到最大觀察到有害作用劑量為人的可能攝入量的規(guī)定倍數(shù)時，如何綜合其它的毒性試驗結(jié)果進行安全性評價。 新原料安全性毒理學試驗項目的選擇 ①無食用史 需做四階段試驗 ②局部地區(qū)有食用史 需做三階段試驗 可只做一、二階段實驗的包括 1） 推薦食用量未超過人群常規(guī)用量的新原料，若根據(jù)有關文獻資料及成分分析，未發(fā)現(xiàn)有毒或毒性甚微不至對健康構(gòu)成損害，或者較大數(shù)量人群有長期食用歷史且未發(fā)現(xiàn)有害作用的 2）已有權(quán)威機構(gòu)進行系統(tǒng)的毒理學安全性評價，且有資料證明所用原料與其一致 如試驗結(jié)果與權(quán)威機構(gòu)進行的評價不一致，需進入下階段的試驗 新原料安全性毒理學試驗要求 新原料安全性毒理學試驗項目的選擇 ③ 多個國家或國內(nèi)多數(shù)地區(qū)廣泛食用 1）推薦食用量未超過人群常規(guī)用量：先進行第一、二階段毒性試驗，根據(jù)試驗結(jié)果決定是否進行下一階段毒理學試驗 2）推薦食用量超過人群常規(guī)用量：進行第一、二、三階段的毒性試驗，根據(jù)試驗結(jié)果決定是否進行第四階段毒性試驗。 存在的問題 ? 實驗項目的選擇 3. 藥食同源產(chǎn)品經(jīng)有機溶劑提取未做毒理試驗 ，或只做 LD50和微核試驗 。 存在的問題 ? 30天或 90天喂養(yǎng)實驗 177。 177。 ? 以大鼠為實驗動物必須有相當于人體推薦量 （ 折算為每公斤體重 ） 的 5倍劑量組 。 ? 常規(guī)的血液學指標 ? 生化指標 ? 功效性指標 ， 即與保健作用有關的指標 ， 如抗氧化 、 減肥等方面的指標 。 注意事項：選用小鼠 ， 受試樣品于照射前給予 14～ 30天 ，照射后仍然給予受試物 ， 必要時可延至 45天 。 要求： ? 盡可能考慮戶外活動 、 年齡 、 性別等因素 ， 進行均衡性檢驗 。 各功能試驗審評要點 2. 輔助降血糖功能檢驗方法 動物實驗 主要指標：空腹血糖 、 糖耐量 判定：在模型成立的前提下 ， 兩項指標中一項陽性 ， 且對正常動物空腹血糖無影響 。 （ 3） 施測順序是先聽覺測試