【正文】 個半胱氨酸 ? 成熟的 IFNγ 由 143個氨基酸組成，以同源雙體形式存在，對酸不穩(wěn)定。 MAFC I ( macrophageactivating factor for cytotoxicity I )。 27 7 細(xì)胞因子和細(xì)胞因子受體 Cytokine and Cytokine Receptor 王 露 北京大學(xué)人類疾病基因研究中心 細(xì)胞因子概念 ? 細(xì)胞因子（ Cytokine）是細(xì)胞應(yīng)對各類刺激而分泌的小分子蛋白，它們調(diào)控細(xì)胞生長與分化、組織的發(fā)育與修復(fù)等多種生命過程，在天然免疫和獲得性免疫中起著重要作用。 4 23 LCM factor ( lymphocyteconditioned medium factor ) LPF ( lymphocyte proliferation factor )。 ? IFNα 、 IFNβ 均定位 9號染色體，單外顯子； ? 許多刺激劑可活化基因表達(dá)； ? IFNα 、 IFNβ 分子結(jié)構(gòu)有相似之處； ? 成熟的 IFNα 各亞型有 166個氨基酸 (IFNα2 165 個 ),高度同源 ,4個保守的半胱氨酸。 ? 但是。起源于上皮組織的癌細(xì)胞從原發(fā)上皮細(xì)胞的穩(wěn)定極性模式演變?yōu)樯贁?shù)具有遷移能力的細(xì)胞才具有的動態(tài)極性模式，從而獲得了侵襲和轉(zhuǎn)移的能力，此即癌細(xì)胞演進(jìn)的 EMT學(xué)說。應(yīng)用 sCKR為減輕或防止細(xì)胞因子造成的病理損害提供了新的治療途經(jīng)。 非成熟 DC： CCR1， 2， 5， CXCR4，向炎癥部位聚集，攝取抗原； 成熟 DC： CCR4， 7， CXCR4，負(fù)載抗原 ,向淋巴組織遷移。 MTT法基本可以替代。但 2022年發(fā)現(xiàn) 2例出現(xiàn)白血病 , 基因均整合至癌基因 LMO2。 。 ? 阻斷和拮抗 – IL1RA， TNF單抗，可溶性 TNFR 生物佐劑： 增強抗原性 ? C I K細(xì)胞制備方法 ： ? 取患者自體外周血 2 0 ml ，分離單個核細(xì)胞，置含 γ 干擾素、 IL2 、抗 CD3單抗的完全 1640培養(yǎng)液中，第 l 0 d ～ 1 3 d細(xì)菌霉菌培養(yǎng)陰性收獲細(xì)胞，洗滌后制備成細(xì)胞懸液用于治療。 ? 其它如重癥肌無力、 2型糖尿病、動脈粥樣硬化、結(jié)核病、骨關(guān)節(jié)病等都與細(xì)胞因子密切相關(guān)。 （ 3） Neu：定向遷移、活化（ CXCL8）。 HIV感染人體細(xì)胞的過程 Chem Biol Drug Des 2022。 特點： 上皮細(xì)胞的極性消失 細(xì)胞與細(xì)胞之間的連接喪失； 細(xì)胞骨架和細(xì)胞器的分布狀態(tài)發(fā)生改變等； 細(xì)胞表達(dá)間質(zhì)細(xì)胞特有的某些分子如波形蛋白（ vimentin), 上皮細(xì)胞的標(biāo)志分子如 Ecadherin則消失 。 TNF超家族 特征 ? 絕大多數(shù)成員為 II型膜蛋白；在特異性金屬蛋白酶作用下，形成可溶形式 ? 活性形式多為同源三聚體； ? TNF超家族 包括 TNFa,?, TRAIL, FASL等；此外，尚有一批與 TNFa序列同源，但缺乏誘導(dǎo)凋亡活性的 TNF家族成員。 促進(jìn)殺傷細(xì)胞分化和效應(yīng)： CTL， NK， LAK； 誘導(dǎo)殺傷細(xì)胞： IFNγ ， TNFα 產(chǎn)生，增強 CTL穿孔素表達(dá) 直接、間接作用于 B細(xì)胞 ：促進(jìn)增殖分化， Ig分泌 促進(jìn)巨噬細(xì)胞通過 ADCC機制殺傷腫瘤 IL2主要生物學(xué)活性 ? 白細(xì)胞介素 2超家族 : one important family of type I cytokines is the mon cytokine receptor γchain (γc) family, which consists of IL2, IL4, IL7, IL9, IL15 and IL21, and is so named because the receptors for these cytokines share γc (also known as IL2Rγand CD132) Yrina Rochman et al. Nature ： 480490 (ColonyStimulating Factor, CSF) ? 能夠刺激多能造血干細(xì)胞和不同發(fā)育階段的造血祖細(xì)胞增殖分化，并在半固體培養(yǎng)基中形成相應(yīng)細(xì)胞集落的細(xì)胞因子。 Costimulator 。 24 白細(xì)胞介素的分類 ? IL1 家族： IL1α/β 目前的新細(xì)胞因子克隆化策略主要利用反向生物學(xué)原理，從人類基因組發(fā)現(xiàn)新細(xì)胞因子或其受體編碼基因。 11 5 TCPA ( T colonypromoting activity )。有抗病毒、抗腫瘤的活性，但免疫調(diào)節(jié)的作用比 IFNα/β 重要的多，有較嚴(yán)格的種屬特異性。 ? 分子結(jié)構(gòu)和編碼基因 ? 1985年克隆成功 ,哺乳動物有 : TGFβ1, TGF β2, TGFβ3, TGF β4 四個亞型 ,前三種為同源二聚體分子 PreproTGFβ Pre proTGFβN pro TGFβ TGFβ( 有活性 ) TGFβ 的產(chǎn)生 機體多種細(xì)胞都可分泌非活性狀態(tài)的 TGFβ 。 CC C C C1C3C2 C1C3C2 C1C3C2 C1C3C2 G 蛋白 I類細(xì)胞因子受體 II類細(xì)胞因子受體 TNFR 趨化因子受體 ： （ 造血因子受體家族） 2.Ⅱ 型細(xì)胞因子受體家族：（干擾素受體家族） 3.Ⅲ 型細(xì)胞因子受體家族：（腫瘤壞死因子受體家族） （ CKR）家族： （ I類） ? 結(jié)構(gòu)特征：是細(xì)胞因子受體中最大的一個家族，多數(shù)成員屬于多亞單位受體，其中一種或兩種亞單位多肽負(fù)責(zé)結(jié)合細(xì)胞因子 ? 膜外區(qū)序列結(jié)構(gòu)相似于 EpoR,即膜外 N端含 4個高度保守 Cys,近膜側(cè)含 1個TrpSerXaaTrpSer(WSXWS)的基序 D200 (II類細(xì)胞因子受體家族 ) ? 結(jié)構(gòu)特征：兩條肽鏈組成，胞外區(qū) Fn3樣結(jié)構(gòu)域由 200個氨基酸殘基組成，也稱 D200，并含有 4個不連續(xù)的半胱氨酸，包括 IFN和IL10受體 7個 aa 22個aa IL10 TNF a TNF ? CD40L Nerve growth factor (NGF) FASL 3. TNFR超家族 ? 主要包括： TNF、 Fas、 CD神經(jīng)生長因子受體 等 ? 結(jié)構(gòu)特征： 這類受體富含半胱氨酸，在與細(xì)胞因子結(jié)合后三聚體化。 造血干 /祖細(xì)胞： IL3， SCF。 細(xì)胞因子與臨床 ? 細(xì)胞因子及受體缺陷 ? 細(xì)胞因子過高表達(dá) ? 可溶性受體水平升高 ? 炎癥性細(xì)胞因子 ? 近年來炎癥性細(xì)胞因子由于其在介導(dǎo)炎癥炎癥和許多疾病中的關(guān)鍵作用而備受關(guān)注，主要是 IL1 TNFα、 IFNγ、 IL6和 IL1β等。 ? Transwell ? 將 Transwell小室放入培養(yǎng)板中，小室內(nèi)稱上室，培養(yǎng)板內(nèi)稱下室，上室內(nèi)盛裝上層培養(yǎng)液，下室內(nèi)盛裝下層培養(yǎng)液，上下層培養(yǎng)液以聚碳酸酯膜相隔。正如傳統(tǒng)疫苗可通過添加佐劑來增加其免疫作用一樣，基因工程疫苗也可通過添加佐劑來達(dá)到增強免疫作用的目的。 ? 1 增強細(xì)胞免疫反應(yīng)的細(xì)胞因子 ? IFNγ ， IL2， IL12， IL15或 IL18會降低 IgGl/IgG2的比例，顯示 Thl傾向性，同時加強遲發(fā)型超敏反應(yīng)（ delayed type hypersensitivity,DTH） 和升高 CTL反應(yīng)。 ? 腫瘤細(xì)胞遷移實驗 、 ，上室種腫瘤細(xì)胞，下室加入 FBS或某些特定的趨化因子，腫瘤細(xì)胞會向營養(yǎng)成分高的下室跑，計數(shù)進(jìn)入下室的細(xì)胞量可反映腫瘤細(xì)胞的遷移能力。如 IL 1 1 TNFα 、 IFNγ 等。 淋巴樣干細(xì)胞： IL7。 ? TNFR I（ P55， CD120a）：胞內(nèi)同源序列即 “ 死亡結(jié)構(gòu)域 ” ? TNFR II（ P75， CD120b）不含死亡結(jié)構(gòu)域 L 腫瘤壞死因子受體可發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用 ? 腫瘤壞死因子受體家族的 CD40和 FAS具有重要的免疫調(diào)節(jié)作用 : – CD40 B細(xì)胞，巨噬細(xì)胞 – CD40L， FASL效應(yīng) T細(xì)胞 – CD40L+B細(xì)胞 CD40— B細(xì)胞增生， Ig類別轉(zhuǎn)換 – CD40L+巨噬細(xì)胞 CD40巨噬細(xì)胞分泌 TNF – FAS+FASL表達(dá) FASL的 CTL可清除表達(dá) FAS的淋巴細(xì)胞，這是一種重要的免疫應(yīng)答的負(fù)反饋調(diào)節(jié)機制。 幾乎所有腫瘤細(xì)胞均可檢測到 TGFβmRNA 。 病毒 病毒復(fù)制 抑制病 毒復(fù)制 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) IFNa IFN誘導(dǎo)蛋白 誘導(dǎo)刺激 胞核 胞核 I型干擾素 α：抗病毒 10 –12 g干擾素能在培養(yǎng)組織中保護一百萬個細(xì)胞免受一千萬個病毒顆粒的感染 ? IFN與臨床： ? 自身免疫?。捍傺?/抑炎，一些實驗表明 IFNγ 通過抑制 Th17的分化，從而調(diào)節(jié)炎癥和自身免疫性疾病。 TMF ( thymocyte mitogenic factor )。 11 ? IL8（趨化因子） ? 其它 IL： IL 13 30 篩選潛在的細(xì)胞因子的策略 ? 未知蛋白的生物信息學(xué)分析： – 無功能性文章報道或無免疫相關(guān)的功能性報道 – 具有潛在的信號肽或被證實為分泌