【正文】 如離子交換層析法或排阻層析法，分級聚乙二醇沉淀法等，也可獲得較好質(zhì)量的質(zhì)粒DNA。 2. pUC系統(tǒng) ? 如 pUCl8和 pUCI9，由 pBR322的 ampr基因和復(fù)制子，以及大腸桿菌部分 1acZ基因和一個多種限制性內(nèi)切酶單一位點的接頭構(gòu)成，全長 2 666bp， pUCl8和 pUCl9所含多位點接頭的方向正好相反。 細(xì)菌生長幾代之后 ， 占少數(shù)的質(zhì)粒將會喪失殆盡 ， 在原始細(xì)胞的后代中可含有兩種質(zhì)粒中的任意一種 ， 但不會兼而有之 。 ? 已經(jīng)在形形色色的細(xì)菌類群中發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒 . ? 這些質(zhì)粒都是獨立于細(xì)菌染色體之外進(jìn)行復(fù)制和遺傳的輔助性遺傳單位 。 ? 由于質(zhì)粒分子是從細(xì)胞內(nèi)的質(zhì)粒庫中隨機(jī)選取出來進(jìn)行復(fù)制的 ， 所以兩個不同的質(zhì)粒在一個單細(xì)胞中的拷貝數(shù)并不總能保持相同 。 ? 若這種單一的限制性內(nèi)切酶位點處于選擇標(biāo)記基因的內(nèi)部，外源基因片斷插入后會導(dǎo)致該基因失活便于篩選。 3．質(zhì)粒 DNA純化 ? 質(zhì)粒從細(xì)菌中分離出來以后，為滿足有些實驗的要求還應(yīng)進(jìn)一步純化。 ? 1966年 Vinograd等人對這個問題作過報道 ， 但目前 ， 仍有些實驗人員 ， 對這一關(guān)鍵問題并沒有足夠的重視 。如果依然存在 ， 可用離心柱層析法純化ＤＮＡ 。 細(xì)菌懸浮液中含有10%蔗糖以提高溶液的滲透壓 ， 減輕細(xì)菌裂解時 DNA泄漏過快產(chǎn)生的機(jī)械剪切力 。 而且細(xì)菌量的減少 ， 使得裂解物的復(fù)雜性和粘稠度降低 ， 操作更方便 、 有效 ， 對煮沸法更是如此 。 ? 另一常用的抗藥性基因為四環(huán)素抗性(tetracycline resistance， tetr)基因，該基因編碼一種含 399氨基酸殘基的膜相關(guān)蛋白質(zhì)，能阻止四環(huán)素進(jìn)入細(xì)胞。 ? 質(zhì)粒是攜帶外源基因進(jìn)入細(xì)菌中擴(kuò)增或表達(dá)的重要媒介物，這種基因運載工具在基因工程中具有極廣泛的應(yīng)用價值，而質(zhì)粒的分離與提取則是最常用、最基本的實驗技術(shù)． 二、 質(zhì)粒特性 1. 分子相對小 ? 在 5kb左右，質(zhì)粒較小，比較穩(wěn)定，不易受物理因素的損傷，此外，較小的質(zhì)粒一般有較高的拷貝數(shù)。 ? 由質(zhì)粒產(chǎn)生的表型包括對抗生素的抗性 、產(chǎn)抗生素 、 降解復(fù)雜有機(jī)化合物 ， 以及產(chǎn)生大腸桿菌素 、 腸毒素及限制酶與修飾酶等等 。 ? 常用來作為標(biāo)記的有氨芐青霉素抗性(ampicillin resistance， ampr)基因，此基因編碼 β — 內(nèi)酰胺酶，該酶能水解氨芐青霉素的 β — 內(nèi)酰胺環(huán)使之失效，從而賦予細(xì)菌抗藥性。 ? 長時間在氯霉素存在下 ， 質(zhì)粒 DNA合成