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第十六章細胞因子與細胞粘附因子的測定(留存版)

2025-09-15 13:26上一頁面

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【正文】 毒RNA和 DNA合成的酶,保護細胞不受病毒感染,產(chǎn)生細胞病變效應( CPE)。直接 計數(shù)法 簡 便 、直觀 ,但費時、主觀因素影響大、難以標準化和自動化 216。 一、促進細胞增殖和增殖抑制測定法216。A549252。 該法操作復雜、影響因素較多,在試驗前應對所用的病毒進行滴定。優(yōu)點: 特異性高 操作簡便、快速,無需依賴細胞株 影響因素較少且易控制,重復性好,方法容易標準化。療效觀察和預后判斷:疾病急性期和恢復期雙份標本進行動態(tài)觀測216。? 細胞因子和粘附分子檢測的臨床意義。常用臨床標本:抗凝全血,并分離獲得單個核細胞216。區(qū)分不同分泌特性的細胞亞群: Th1細胞 IFNγ Th2細胞 IL4216。 MTT染色時,必須考慮待檢樣品中有無激活靶細胞的因素。本法常用于 TNF等的測定二、細胞毒活性測定法基本原理252。 DNA擴增法216。結(jié)果 客觀易于自 動化;適 用于大標本量 的測定 方法的特異性受依賴細胞株影響;放射性污染(1) 放射性核素摻入法常 見 細 胞 因 子 3HTdR摻 入 檢 測 法 所 需 細 胞 及 參 考 試 驗 條 件細 胞 株 所需濃度 (細胞數(shù) /ml) 3HTdR前培養(yǎng)時間 3HTdR后培養(yǎng)時間 檢測細胞因子 210 5 48 1820 IL1L929 210 5 56 16 IL1CTLL2 105 24 46 IL2FDCP1,32DCL27 510 4 24 48 IL3 105 24 46 IL4CH12 510 3 48 6 IL5B13 510 4 36 12 IL5T88M 110 5 24 12 IL5BCL1 105 72 6 IL5CloneK,IN/2bx 105 24 46 IL7TS1 310 4 66 6 IL9T10 105 72 6 IL11UT7 10 5 72 6 SCF(干細胞因子)CCL64* 510 8 72 8 TGFβ, IF 510 4 24 48 GMCSFM14/ 510 4 24 48 MCSF/GCSF特點:不使用放射性核素, 以細胞代謝變化為增殖指征 指示細胞的增殖情況與線粒體代謝活性相關(guān) 測定步驟類似與同位素摻入法相比摻入物: MTT而非 3HTdR;反應條件:選用的細胞及其濃度、 培養(yǎng)時間不同(2) MTT 比色法細胞株 /原代細胞 細胞終濃度(細胞數(shù) /ml) 加入 MTT前溫育時間( h) 檢測細胞因子B9, MH60,BSF2,TTD1 510 4/210 5 96/48 IL6B911 510 4 96 IL11B913 510 4 96 IL13KYM1D4 210 3 72MV3D9 510 3 120 TGFβWEHI164/clone13 210 3 72
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