【正文】 酶的作用下，將DNA分子中受損傷部分切除，以互補鏈為模板，合成出空缺的部分，使DNA恢復(fù)正常結(jié)構(gòu)的過程。35．轉(zhuǎn)錄加工(posttranscriptional processing)：細(xì)菌中很多RNA分子和幾乎全部真核生物的RNA在合成后都需要不同程度的加工，才能形成成熟的RNA分子，這個過程叫轉(zhuǎn)錄后加工。 DNA復(fù)制時，由DNA解旋酶(又稱解鏈酶)通過水解ATP獲得能量來解開DNA雙鏈，并沿復(fù)制叉方向移動，所產(chǎn)生的單鏈很快被單鏈結(jié)合蛋白所覆蓋，防止DNA的變性并保護其單鏈不被降解，復(fù)制叉前進過程中，雙螺旋產(chǎn)生的應(yīng)力在拓?fù)洚悩?gòu)酶的作用下得到調(diào)整。，σ因子表達發(fā)生變化，細(xì)胞大量表達σ32，而σ32與σ70識別啟動子序列不同，因而RNA pol選擇轉(zhuǎn)錄的基因發(fā)生變化，主要是大約17種蛋白被稱為熱激蛋白。10．DNA生物合成的方向是__ 5’→3’_____，岡奇片段合成方向是__ 5’→3’_____。它是一種___環(huán)____狀雙鏈 DNA，在基因工程中，它做為___基因載體____。 ①引起堿基置換 ②形成嘧啶二聚體 ③導(dǎo)致堿基缺失 ④發(fā)生堿基插入 l0．有關(guān)轉(zhuǎn)錄的錯誤描述是( ③ )。①需RNA引物 ②以3’→ 5’方向DNA為模板 ③兩條模板鏈同時合成④新鏈生成方向5’→3’ ⑤形成3’,5’ 磷酸二酯鍵24．DNA的切除修復(fù)需要以下哪幾種酶參與( ②③④ )①光裂合酶 ②核酸內(nèi)切酶 ③DNA聚合酶I ④DNA連接酶 ⑤RNA聚合酶25．目的基因的制備方法有( ③④⑤ )①DNA復(fù)制 ②RNA轉(zhuǎn)錄 ③mRNA逆轉(zhuǎn)錄 ④化學(xué)合成法 ⑤限制性內(nèi)切酶切取26．真核細(xì)胞mRNA的加工修飾包括以下內(nèi)容( ①②④⑤ )。( √ )8．依賴DNA的RNA聚合酶由緊密結(jié)合的α2ββ’σ亞基組成，其中σ因子具有識別起始部位和催化RNA合成的功能。( √ )，不管它是否被翻譯。( )4．以一條親代DNA(3’→ 5’)為模板時，子代鏈合成方向5’→ 3’，以另一條親代DNA鏈 5’→ 3’)為模板時，子代鏈合成方向3’→ 5’。①DNA復(fù)制 ②RNA復(fù)制 ③轉(zhuǎn)錄 ④逆轉(zhuǎn)錄 ⑤翻譯20．DNA生物合成中需要以下哪些酶參與( ①②③④⑤ )。 ①合成酶類 ②轉(zhuǎn)移酶類 ③裂解酶類 ④氧化還原酶類 6．催化真核生物mRNA生物合成的RNA聚合酶Ⅱ?qū)Ζ六Z膏蕈堿( ③ )。21．DNA復(fù)制中，___前導(dǎo)__鏈的合成是___連續(xù)__的，合成的方向和復(fù)制叉移動方向相同；_后隨_鏈的合成是___不連續(xù)____的，合成的方向與復(fù)制叉方向相反。6．在DNA復(fù)制過程中，改變DNA螺旋程度的酶叫___拓?fù)洚悩?gòu)酶____。8. 試列表比較常染色質(zhì)DNA與端粒DNA的復(fù)制。由于DNA聚合酶不能從無到有合成新鏈，所以DNA復(fù)制需要有含3’OH的引物，引物由含有引物酶的引發(fā)體合成一段含3一10個核苷酸的RNA片段；②延長：DNA復(fù)制時，分別以兩條親代DNA鏈為模板，當(dāng)復(fù)制叉沿DNA移動時，以親代3’→5’鏈為模板時，子鏈的合成方向是539。31．啟動子(promoter)：DNA鏈上能指示RNA轉(zhuǎn)錄起始的DNA序列稱啟動子。18．結(jié)構(gòu)畸變：基因中的缺口、或插入(insertion)或缺失(deletion)某些堿基造成移碼突變使 DNA的模板鏈?zhǔn)スδ?。大腸桿菌的引物酶單獨沒有活性，只有與其它蛋白質(zhì)結(jié)合在一起，形成一個復(fù)合體，即引發(fā)體才有生物活性。( )14．核糖體大小亞基的結(jié)合和分離與Mg2+，的濃度有關(guān)。①肽基轉(zhuǎn)移酶 ②鳥苷三磷酸 ③mRNA ④甲酰甲硫氨酰tRNA⑤EFTu、EFTs、 EFG(SD順序)是指: ( ① )①在mRNA分子的起始碼上游813個核苷酸處的順序②在DNA分子上轉(zhuǎn)錄起始點前813個核苷酸處的順序③16srRNA339。(四)選擇題1．蛋白質(zhì)生物合成的方向是( ④ )。(三)填空題1．蛋白質(zhì)的生物合成是以__ mRNA 為模板，以__ Cys: UGU UGC Ala: GCU GCC GCA CGC提示：(1)在正常肽段的第一個Val的密碼GUA的G后插入了一個C ；(2)12．真核細(xì)胞與原核細(xì)胞核糖體組成有什么不同?如何證明核糖體是蛋白質(zhì)的合成場所?原核細(xì)胞：70S核糖體由30S和50S兩個亞基組成；真核細(xì)胞：80S核糖體由40S和60S兩個亞基組成。(2)三位點模型 大腸桿菌上的70S核糖體上除A位和P位外，還存在第三個結(jié)合tRNA的位點，稱為E位，它特異地結(jié)合無負(fù)載的tRNA及無負(fù)載的tRNA最后從核糖體上離開的位點。9．多核糖體(polysome)：mRNA同時與若干個核糖體結(jié)合形成的念珠狀結(jié)構(gòu)，稱為多核糖體。 在含有兩個抗性基因的載體中，如果外源DNA片段插入其中一個基因并導(dǎo)致該基因失活，就可用兩個分別含不同藥物的平板對照篩選陽性重組子。 方法是分成四組分別為ddAMP、ddGMP、ddCMP、ddTMP反應(yīng)后，聚丙烯酰胺凝膠電泳按泳帶可讀出DNA序列。三、簡 答1． 分別說出5種以上RNA的功能？轉(zhuǎn)運RNA tRNA 轉(zhuǎn)運氨基酸 ；核蛋白體RNA rRNA 核蛋白體組成成 ；信使RNA mRNA 蛋白質(zhì)合成模板 ；不均一核RNA hnRNA 成熟mRNA的前體 ；小核RNA snRNA 參與hnRNA的剪接；小胞漿RNA scRNA/7SLRNA 蛋白質(zhì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位合成的信號識別體的組成成分；反義RNA anRNA/micRNA 對基因的表達起調(diào)節(jié)作用；核酶 Ribozyme RNA 有酶活性的RNA2．原核生物與真核生物啟動子的主要差別？原核生物TTGACA TATAAT起始位點 35 10真核生物增強子GC CAATTATAA—5mGpp—起始位點 110 70 253．對天然質(zhì)粒的人工構(gòu)建主要表現(xiàn)在哪些方面？天然質(zhì)粒往往存在著缺陷，因而不適合用作基因工程的載體，必須對之進行改造構(gòu)建：a、加入合適的選擇標(biāo)記基因，如兩個以上，易于用作選擇,通常是抗生素基因。17．雜交瘤細(xì)胞系的產(chǎn)生是由（脾B）細(xì)胞與（骨髓瘤 ）細(xì)胞雜交產(chǎn)生的，由于（脾細(xì)胞）可以利用次黃嘌呤，（ 骨細(xì)胞 ）提供細(xì)胞分裂功能，所以能在HAT培養(yǎng)基中生長。9．蛋白質(zhì)多亞基形式的優(yōu)點是（亞基對DNA的利用來說是一種經(jīng)濟的方法 ）、（可以減少蛋白質(zhì)合成過程中隨機的錯誤對蛋白質(zhì)活性的影響）、（活性能夠非常有效和迅速地被打開和被關(guān)閉 ）。15．考斯質(zhì)粒：是經(jīng)過人工構(gòu)建的一種外源DNA載體，保留噬菌體兩端的COS區(qū)，與質(zhì)粒連接構(gòu)成。分子生物學(xué)試題及答案一、名詞解釋1．cDNA與cccDNA：cDNA是由mRNA通過反轉(zhuǎn)錄酶合成的雙鏈DNA；cccDNA是游離于染色體之外的質(zhì)粒雙鏈閉合環(huán)形DNA。16．藍白斑篩選：含LacZ基因（編碼β半乳糖苷酶）該酶能分解生色底物Xgal(5溴4氯3吲哚βD半乳糖苷)產(chǎn)生藍色，從而使菌株變藍。10．蛋白質(zhì)折疊機制首先成核理論的主要內(nèi)容包括（成核 ）、（結(jié)構(gòu)充實）、（最后重排）。18．隨著研究的深入第一代抗體稱為（多克隆抗體）、第二代（單克隆抗體）、第三代（基因工程抗體 ）。b、增加或減少合適的酶切位點，便于重組。 激活蛋白（CAP）對轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控作用？環(huán)腺苷酸（cAMP）受體蛋白CRP（cAMP receptor protein），cAMP與CRP結(jié)合后所形成的復(fù)合物稱激活蛋白CAP（cAMPactivated protein ）。 如pUC質(zhì)粒含LacZ基因（編碼β半乳糖苷酶）該酶能分解生色底物Xgal(5溴4氯3吲哚βD半乳糖苷)產(chǎn)生藍色，從而使菌株變藍。(二)問答題1．參與蛋白質(zhì)生物合成體系的組分有哪些?它們具有什么功能?①mRNA：蛋白質(zhì)合成的模板；②tRNA：蛋白質(zhì)合成的氨基酸運載工具；③核糖體：蛋白質(zhì)合成的場所；④輔助因子：(a)起始因子—參與蛋白質(zhì)合成起始復(fù)合物形成；(b)延長因子—肽鏈的延伸作用；(c)釋放因子一終止肽鏈合成并從核糖體上釋放出來。6．氨基酸在蛋白質(zhì)合成過程中是怎樣被活化的?催化氨基酸活化的酶稱氨酰tRNA合成酶，形成氨酰tRNA，反應(yīng)分兩步進行： (1)活化 需Mg2+和Mn2+，由ATP供能，由合成酶催化，生成氨基酸AMP酶復(fù)合物。利用放射性同位素標(biāo)記法，通過核糖體的分離證明之。正常肽段的核苷酸序列為：AUG GUA UGC GU… CG…；突變體肽段的核苷酸序列為：AUG GCU AUG CGU 。氨酰tRNA __為原料直接供體，以__核糖體_____為合成楊所。 ①從C→N端 ②定點雙向進行 ③從N端、C端同時進行 ④從N→C端2．不能合成蛋白質(zhì)的細(xì)胞器是( ③ )。端富含嘧啶的互補順序 ④啟動基因的順序特征 ⑤以上都正確19.( √ )15．核糖體的活性中心“A”位和“P”位都主要在大亞基上。 9．復(fù)制叉(replication fork)：復(fù)制中的DNA分子，末復(fù)制的部分是親代雙螺旋，而復(fù)制好的部分是分開的，由兩個子代雙螺旋組成，復(fù)制正在進行的部分呈丫狀叫做復(fù)制叉。19．誘變劑(mutagen)：使基因組發(fā)生突變的物理、化學(xué)、生物因素叫誘變劑。32．轉(zhuǎn)錄單位(transcription unit)：RNA的轉(zhuǎn)錄只在DNA的一個片段上進行，這段DNA序列叫轉(zhuǎn)錄單位?！?39。7．SSB的中文名稱___單鏈DNA結(jié)合蛋白____，功能特點是___使單鏈保持伸長狀態(tài)____。22．一條單鏈DNA(+)的堿基組成A2l％、G29％，復(fù)制后，RNA聚合酶催化轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物的堿基組成是__ A21％、G29％、U21％、C29％_____。 ①不敏感 ②敏感 ③高度敏感 ④低度敏感 7．DNA復(fù)制中RNA引物的主要作用是( ① )。①引物酶 ②解旋酶 ③解鏈酶 ④DNA連接酶 ⑤DNA聚合酶21．RNA聚合酶的核心酶由以下哪些亞基組成( ①③④ )。( )5．在DNA生物合成中，半保留復(fù)制與半不連續(xù)復(fù)制指相同概念。( )( )7．目前發(fā)現(xiàn)的逆轉(zhuǎn)錄酶大部分來自于病毒粒子。①終止子 ②ρ 因子 ③ δ 因子 ④dnaβ蛋白 ⑤ α亞基23．RNA與DNA生物合成相同的是( ②④⑤ )。 ①與單鏈DNA結(jié)合防止堿基重新配對 ②保護復(fù)制中單鏈DNA不被核酸酶降解 ③與單鏈DNA結(jié)合，降低雙鏈DNA Tm值 ④以上都不對 9．紫外線對DNA的損傷主要是( ② )。24．在細(xì)菌細(xì)胞中，獨立于染色體之外的遺傳因子叫__質(zhì)粒_____。9．DNA生物合成的起始，需要一段___ RNA ____為引物，引物由__引物_____酶催化完成，該酶需與—些特殊___蛋白質(zhì)____結(jié)合形成___引物體____復(fù)合物才有活性。在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控中，一種方式就是不同σ因子的表達和大量使用。OH與前一個岡崎片段的5’磷酸接近時，復(fù)制停止，由DNA聚合酶I切除引物，填補空隙，連接酶連接相鄰的DNA片段。 34．外顯子(exon)：真核生物基因中，在mRNA上出現(xiàn)并代表蛋白質(zhì)的DNA序列，叫外顯子。21．光裂合酶修復(fù)(又稱光復(fù)活)(photoreactivation)：可見光將光裂合酶激活，它分解DNA上由紫外線照射而形成的嘧啶二聚體，使它們恢復(fù)成兩個單獨的嘧啶堿。復(fù)制眼在環(huán)狀DNA上形成的結(jié)構(gòu)與希臘字母θ相象，所以叫θ結(jié)構(gòu)。( √ ) 核酸的生物合成(一)名詞解釋1．中心法則(central dogma)：生物體遺傳信息流動途徑。氨基酸活化酶：( ④ )①活化氨基酸的氨基 ②利用GTP作為活化氨基酸的能量來源③催化在tRNA的5’磷酸與相應(yīng)氨基酸間形成酯鍵④每一種酶特異地作用于一種氨基酸及相