【正文】 實驗通常包括哪些步驟？a、提取供體生物的目的基因（或稱外源基因），酶接連接到另一DNA分子上（克隆載體），形成一個新的重組DNA分子。 在含有兩個抗性基因的載體中，如果外源DNA片段插入其中一個基因并導致該基因失活，就可用兩個分別含不同藥物的平板對照篩選陽性重組子。蛋白質的生物合成(一)名詞解釋1．翻譯(translation)：以mRNA為模板，氨酰tRNA為原料直接供體，在多種蛋白質因子和酶的參與下，在核糖體上將mRNA分子上的核苷酸順序表達為有特定氨基酸順序的蛋白質的過程。9．多核糖體(polysome)：mRNA同時與若干個核糖體結合形成的念珠狀結構，稱為多核糖體。 (5)通用性及例外：地球上的一切生物都使用同一套遺傳密碼，但近年來已發(fā)現(xiàn)某些個別例外現(xiàn)象，如某些哺乳動物線粒體中的UGA不是終止密碼而是色氨酸密碼子。(2)三位點模型 大腸桿菌上的70S核糖體上除A位和P位外，還存在第三個結合tRNA的位點，稱為E位，它特異地結合無負載的tRNA及無負載的tRNA最后從核糖體上離開的位點。 (4)肽鏈合成終止，當核糖體移至終止密碼UAA、UAG或UGA時，終止因子RFRF2識別終止密碼，并使肽酰轉移酶活性轉為水解作用，將P位肽酰tRNA水解，釋放肽鏈，合成終止。12．真核細胞與原核細胞核糖體組成有什么不同?如何證明核糖體是蛋白質的合成場所?原核細胞：70S核糖體由30S和50S兩個亞基組成；真核細胞：80S核糖體由40S和60S兩個亞基組成。 突變體肽段 MetAlaMetArg Cys: UGU UGC Ala: GCU GCC GCA CGC提示：(1)在正常肽段的第一個Val的密碼GUA的G后插入了一個C ；(2)有規(guī)則重復的構象（αhelix ，β－sheet，βturn）氫鍵三級結構Tertiary structure(三)填空題1．蛋白質的生物合成是以__ mRNA 為模板，以__ 8．原核細胞的起始氨基酸是__甲酰甲硫氨酸___，起始氨酰tRNA是___甲酰甲硫氨酰tRNA___。(四)選擇題1．蛋白質生物合成的方向是( ④ )。 ①空載tRNA的脫落發(fā)生在“A”位上 ②核糖體沿mRNA的3’→5’方向相對移動 ③核糖體沿mRNA的5’→3’方向相對移動 ④核糖體在mRNA上一次移動的距離相當于二個核苷酸的長度9．在蛋白質合成中，下列哪一步不需要消耗高能磷酸鍵( ① )。①肽基轉移酶 ②鳥苷三磷酸 ③mRNA ④甲酰甲硫氨酰tRNA⑤EFTu、EFTs、 EFG(SD順序)是指: ( ① )①在mRNA分子的起始碼上游813個核苷酸處的順序②在DNA分子上轉錄起始點前813個核苷酸處的順序③16srRNA339。( √ )6．大腸桿菌的核糖體的小亞基必須在大亞基存在時，才能與mRNA結合。( )14．核糖體大小亞基的結合和分離與Mg2+，的濃度有關。4．解旋酶(helicase)：是一類通過水解ATP提供能量，使DNA雙螺旋兩條鏈分開的酶，每解開一對堿基，水解2分子ATP。大腸桿菌的引物酶單獨沒有活性，只有與其它蛋白質結合在一起，形成一個復合體，即引發(fā)體才有生物活性。14．逆轉錄(reverse transcription)：以RNA為模板合成DNA的過程。18．結構畸變：基因中的缺口、或插入(insertion)或缺失(deletion)某些堿基造成移碼突變使 DNA的模板鏈失去功能。SOS修復是一種易出差錯的修復過程，雖能修復DNA的損傷而避免死亡。31．啟動子(promoter)：DNA鏈上能指示RNA轉錄起始的DNA序列稱啟動子。(二)問答題1．試述Meselson和Stahl關于DNA半保留復制的證明實驗。由于DNA聚合酶不能從無到有合成新鏈，所以DNA復制需要有含3’OH的引物，引物由含有引物酶的引發(fā)體合成一段含3一10個核苷酸的RNA片段；②延長：DNA復制時，分別以兩條親代DNA鏈為模板，當復制叉沿DNA移動時，以親代3’→5’鏈為模板時，子鏈的合成方向是539。5．DNA的損傷原因是什么?提示：①自身復制過程中發(fā)生的錯誤：②外界環(huán)境的影響，如物理因素(紫外線、X一射線輻射等)，化學因素(各種誘變劑、抗菌素等)。8. 試列表比較常染色質DNA與端粒DNA的復制。原核生物：操縱子 RNA聚合酶 核心酶加σ因子 不需加工與翻譯相偶聯(lián) 類核真核生物：單基因 RNA聚合酶Ⅱ 聚合酶加轉錄因子 需加工故與翻譯相分離 核內(三)填空題1．MeselsonStahl的DNA半保留復制證實試驗中，區(qū)別不同DNA用__同位素示蹤_____方法。6．在DNA復制過程中，改變DNA螺旋程度的酶叫___拓撲異構酶____。14．RNA生物合成中，RNA聚合酶的活性需要__ DNA _____模板，原料是__ ATP _____、__ GTP _____、__ UTP _____、___ CTP ____。21．DNA復制中，___前導__鏈的合成是___連續(xù)__的，合成的方向和復制叉移動方向相同；_后隨_鏈的合成是___不連續(xù)____的，合成的方向與復制叉方向相反。其產物分子的放射性情況如何( ① )。 ①合成酶類 ②轉移酶類 ③裂解酶類 ④氧化還原酶類 6．催化真核生物mRNA生物合成的RNA聚合酶Ⅱ對α鵝膏蕈堿( ③ )。 ①它是一個金屬酶 ②它能從3’OH端逐步水解單股DNA鏈 ③它在雙螺旋區(qū)有5’→ 3’核酸酶活性 ④它需要DNA模板上的游離5’OH ；14．試將下列DNA復制的有關步驟按正確的順序排列( ②→①→③→⑤→④ )。①DNA復制 ②RNA復制 ③轉錄 ④逆轉錄 ⑤翻譯20．DNA生物合成中需要以下哪些酶參與( ①②③④⑤ )。③高度重復順序( )4．以一條親代DNA(3’→ 5’)為模板時，子代鏈合成方向5’→ 3’，以另一條親代DNA鏈 5’→ 3’)為模板時，子代鏈合成方向3’→ 5’。( )12．岡崎片段的合成需要RNA引物。( √ )，不管它是否被翻譯。( √ )16．亞硝酸做為一種有效誘變劑，是因為它直接作用于DNA，使堿基中的氨基氧化生成羰 (酮)基，造成堿基配對錯誤。( √ )8．依賴DNA的RNA聚合酶由緊密結合的α2ββ’σ亞基組成，其中σ因子具有識別起始部位和催化RNA合成的功能。③校正tRNA的作用④核糖體對mRNA的校正 ①需RNA引物 ②以3’→ 5’方向DNA為模板 ③兩條模板鏈同時合成④新鏈生成方向5’→3’ ⑤形成3’,5’ 磷酸二酯鍵24．DNA的切除修復需要以下哪幾種酶參與( ②③④ )①光裂合酶 ②核酸內切酶 ③DNA聚合酶I ④DNA連接酶 ⑤RNA聚合酶25．目的基因的制備方法有( ③④⑤ )①DNA復制 ②RNA轉錄 ③mRNA逆轉錄 ④化學合成法 ⑤限制性內切酶切取26．真核細胞mRNA的加工修飾包括以下內容( ①②④⑤ )?！?539。 ①引起堿基置換 ②形成嘧啶二聚體 ③導致堿基缺失 ④發(fā)生堿基插入 l0．有關轉錄的錯誤描述是( ③ )。 ③RNA鏈的延長方向是5’→ 3’。它是一種___環(huán)____狀雙鏈 DNA，在基因工程中，它做為___基因載體____。18．真核生物RNA聚合酶共三種___ RNA聚合酶I ___、___ RNA聚合酶Ⅱ___、__ RNA聚合酶Ⅲ____，它們分別催化__ rRNA _____、__ mRNA _____和 ___ tRNA 5SrRNA ____的生物合成。10．DNA生物合成的方向是__ 5’→3’_____，岡奇片段合成方向是__ 5’→3’_____。DNA聚合酶Ⅱ主要負責DNA的___修復____作用。，σ因子表達發(fā)生變化，細胞大量表達σ32，而σ32與σ70識別啟動子序列不同，因而RNA pol選擇轉錄的基因發(fā)生變化，主要是大約17種蛋白被稱為熱激蛋白。意義：①利用基因工程技術，可以大量生產在一些正常細胞中產量很低的多肽物質，用于醫(yī)藥等工業(yè)生產中；②定向改造生物墓因結構，生產抗病強、品質優(yōu)的各種農副產品，以提高經(jīng)濟價值；③用于生命科學的基礎研究；值得注意的是基因工程技術若使用不當、管理不善，也會給人類帶來災難。 DNA復制時，由DNA解旋酶(又稱解鏈酶)通過水解ATP獲得能量來解開DNA雙鏈，并沿復制叉方向移動，所產生的單鏈很快被單鏈結合蛋白所覆蓋，防止DNA的變性并保護其單鏈不被降解，復制叉前進過程中，雙螺旋產生的應力在拓撲異構酶的作用下得到調整。→3’外切酶活性，DNA復制后期，用于切除RNA引物；③339。35．轉錄加工(posttranscriptional processing)：細菌中很多RNA分子和幾乎全部真核生物的RNA在合成后都需要不同程度的加工，才能形成成熟的RNA分子，這個過程叫轉錄后加工。27．轉錄(transcription)：由依賴于DNA的RNA聚合酶催化，以DNA的一條鏈的一定區(qū)段為模板，按照堿基配對原則，合成一條與DNA鏈互補的RNA鏈的過程。22．切除修復(excision repair)：在一系列酶的作用下，將DNA分子中受損傷部分切除，以互補鏈為模板，合成出空缺的部分，使DNA恢復正常結構的過程。合成時需要引物與模板。 11．前導鏈(1eading strand)：在DNA復制過程中，以親代鏈(3’→ 5’為模板時，子代鏈的合成 (5’→ 3’)是連續(xù)的．這條能連續(xù)合成的鏈稱前導鏈。它的功能在于穩(wěn)定DNA解開的單鏈，阻止復性和保護單鏈部分不被核酸酶降解。最初由Crick(1958)提出，經(jīng)后人的不斷補充和修改，現(xiàn)包括反轉錄和RNA復制等內容。( )10．線粒體和葉綠體內的蛋白質生物合成起始與原核生物相同。( )2．密碼子在mRNA上的閱讀方向為5’→ 3’。 ①IF1 ②IF2 ③eIF2 ④eIF4 ⑤elF4A14．蛋白質生物合成具有下列哪些特征( ①②③⑤ )。 ①RF ②RF一1 ③RF一2 ④RF一3 5．能與tRNA反密碼子中的I堿基配對的是( ④ )。12．肽鏈合成終止時，__終止因子_________進人“A”位，識別出___終止密碼子______，同時終止因子使__肽基轉移酶______的催化作用轉變?yōu)開__水解作用_________。4．植物細胞中蛋白質生物合成可在____核糖體____、____線粒體____和____葉綠體_______三種細胞器內進行。核酸（Nucleic acids） 蛋白質（Proteins）結果發(fā)現(xiàn)只有一個肽段的差異，測得其基酸順序如下： (2)起始氨酰tRNA不同：原核為fMettRNAf，真核MettRNAi(3)核糖體不同：原核為70S核粒體，可分為30S和50S兩種亞基，真核為80S核糖體，分40S和60S兩種亞基10．蛋白質合成后的加工修飾有哪些內容?提示：(1)水解修飾；(2)肽鍵中氨基酸殘基側鏈的修飾；(3)二硫鍵的形成；(4)輔基的連接及亞基的聚合。蛋白質合成可分四個步驟，以大腸桿菌為例： (1)氨基酸的活化：游離的氨基酸必須經(jīng)過活化以獲得能量才能參與蛋白質合成，由氨酰tRNA合成酶催化，消耗1分子ATP，形成氨酰tRNA。 (2)tRNA：蛋白質合成中氨基酸運載工具，tRNA的反密碼子與mRNA上的密碼子相互作用，使分子中的遺傳信息轉換成蛋白質的氨基酸順序是遺傳信息的轉換器。增加或刪除某個核苷酸會發(fā)生移碼突變。5．變偶假說(wobble hypothesis)：指反密碼子的前兩個堿基(3’端)按照標準與密碼子的前兩個堿基(5’端)配對，而反密碼子中的第三個堿墓