【正文】 則有某種程度的變動(dòng)，使其有可能與幾種不同的堿基配對。ES細(xì)胞的培養(yǎng)：分離胚泡的內(nèi)層細(xì)胞團(tuán)進(jìn)行培養(yǎng)。 基因文庫的構(gòu)建對重組子的篩選舉出3種方法并簡述過程。因此RNA聚合酶難以與其結(jié)合。 利用雙脫氧末端終止法（Sanger法）測定DNA一級結(jié)構(gòu)的原理與方法？原理是采用核苷酸鏈終止劑—2，3，雙脫氧核苷酸終止DNA的延長。e、根據(jù)基因工程的特殊要求加裝特殊的基因元件 4．舉例說明差示篩選組織特異cDNA的方法？制備兩種細(xì)胞群體，目的基因在其中一種細(xì)胞中表達(dá)或高表達(dá)，在另一種細(xì)胞中不表達(dá)或低表達(dá)，然后通過雜交對比找到目的基因。24．質(zhì)粒DNA具有三種不同的構(gòu)型分別是：（ SC構(gòu)型 ）、（ oc構(gòu)型 ）、（ L構(gòu)型 ）。21．RNA聚合酶Ⅱ的基本轉(zhuǎn)錄因子有、TFⅡA、TFⅡB、TFIID、TFⅡE他們的結(jié)合順序是： （ D、A、B、E ）。14．PCR的反應(yīng)體系要具有以下條件：a、被分離的目的基因兩條鏈各一端序列相互補(bǔ)的 DNA引物（約20個(gè)堿基左右）。有G時(shí)轉(zhuǎn)錄從（ S2 ）開始，無G時(shí)轉(zhuǎn)錄從（ S1 ）開始。5．啟動(dòng)子中的元件通常可以分為兩種：（核心啟動(dòng)子元件 ）和（上游啟動(dòng)子元件 ）。17．順式作用元件：在DNA中一段特殊的堿基序列，對基因的表達(dá)起到調(diào)控作用的基因元件。11．上游啟動(dòng)子元件：是指對啟動(dòng)子的活性起到一種調(diào)節(jié)作用的DNA序列，10區(qū)的TATA、35區(qū)的TGACA及增強(qiáng)子，弱化子等。3．CAP：環(huán)腺苷酸（cAMP）受體蛋白CRP（cAMP receptor protein ），cAMP與CRP結(jié)合后所形成的復(fù)合物稱激活蛋白CAP（cAMP activated protein ）4．回文序列：DNA片段上的一段所具有的反向互補(bǔ)序列，常是限制性酶切位點(diǎn)。5．micRNA：互補(bǔ)干擾RNA或稱反義RNA，與mRNA序列互補(bǔ)，可抑制mRNA的翻譯。12．DNA探針：是帶有標(biāo)記的一段已知序列DNA，用以檢測未知序列、篩選目的基因等方面廣泛應(yīng)用。18．Klenow酶：DNA聚合酶I大片段，只是從DNA聚合酶I全酶中去除了5’ → 3’外切酶活性19．錨定PCR：用于擴(kuò)增已知一端序列的目的DNA。6．分子生物學(xué)的研究內(nèi)容主要包含（結(jié)構(gòu)分子生物學(xué) ）、（基因表達(dá)與調(diào)控 ）、（ DNA重組技術(shù) ）三部分。12．DNA重組技術(shù)也稱為（基因克隆）或（分子克隆 ）。b、具有熱穩(wěn)定性的酶如：TagDNA聚合酶。其中TFIID的功能是（與TATA盒結(jié)合 ）。在電泳中最前面的是（ SC構(gòu)型 ）。 例如：在腫瘤發(fā)生和發(fā)展過程中，腫瘤細(xì)胞會(huì)呈現(xiàn)與正常細(xì)胞表達(dá)水平不同的mRNA，因此，可以通過差示雜交篩選出與腫瘤相關(guān)的基因。由于它缺少形成3/5/磷酸二脂鍵所需要的3OH，一旦參入到DNA鏈中，此DNA鏈就不能進(jìn)一步延長。 CAP的存在（功能）：能顯著提高酶與啟動(dòng)子結(jié)合常數(shù)。抗生素抗性篩選、抗性的插入失活、蘭白斑篩選 或PCR篩選、差式篩選、DNA探針 多數(shù)克隆載體均帶有抗生素抗性基因（抗氨芐青霉素、四環(huán)素）。ES在無飼養(yǎng)層中培養(yǎng)時(shí)會(huì)分化為肌細(xì)胞、N細(xì)胞等多種功能細(xì)胞，在含有成纖維細(xì)胞中培養(yǎng)時(shí)ES將保持分化功能。6．移碼突變(frameshift mutation)：在mRNA中，若插入或刪去一個(gè)核苷酸，就會(huì)使讀碼發(fā)錯(cuò)誤，稱為移碼，由于移碼而造成的突變、稱移碼突變。 (2)密碼不重疊：組成一個(gè)密碼的三個(gè)核苷酸只代表一個(gè)氨基酸，只使用一次，不重疊使用。 (3)rRNA 核糖體的組分，在形成核糖體的結(jié)構(gòu)和功能上起重要作用，它與核糖體中蛋白質(zhì)以及其它輔助因子一起提供了翻譯過程所需的全部酶活性。 (2)肽鏈合成的起始：由起始因子參與，mRNA與30S小亞基、50S大亞基及起始甲酰甲硫氨酰tRNA(fMettRNAt)形成70S起始復(fù)合物，整個(gè)過程需GTP水解提供能量。11．蛋白質(zhì)的高級結(jié)構(gòu)是怎樣形成的? 提示：蛋白質(zhì)的高級結(jié)構(gòu)是由氨基酸的順序決定的，不同的蛋白質(zhì)有不同的氨基酸順序，各自按一定的方式折疊而成該蛋白質(zhì)的高級結(jié)構(gòu)。DNARNA一級結(jié)構(gòu)Primary structure核苷酸序列AGTTCT 或AGUUCU 的排列順序3，5， 磷酸二酯鍵氨基酸排列順序肽鍵二級結(jié)構(gòu)Secondarystructure多條肽鏈（或不同蛋白）15. 試比較原核生物與真核生物的翻譯。5．延長因子T由Tu和Ts兩個(gè)亞基組成，Tu為對熱___不穩(wěn)定___蛋白質(zhì)，Ts為對熱__ 穩(wěn)定_蛋白質(zhì)。13．原核生物的核糖體由_____30S_______小亞基和____50S________大亞基組成，真核生物核糖體由___40S______小亞基和_______60S________大亞基組成。 ①A、G ②C、U ③U ④U、C、A 6．蛋白質(zhì)合成所需能量來自( ③ )。 ①氨基酸必須活化 ②需要消耗能量 ③每延長一個(gè)氨基酸必須經(jīng)過進(jìn)位、轉(zhuǎn)肽、移位、稅落四個(gè)步驟 ④合成肽鏈由C端向N端不斷延長 ⑤新生肽鏈需加工才能成為活性蛋白質(zhì)15．下列哪些內(nèi)容屬于蛋白質(zhì)合成后的加工、修飾( ②③④⑤ )。( √ )3．每—種氨基酸都有兩種以上密碼子。( √ )11．每種氨基酸只能有一種特定的tRNA與之對應(yīng)。2．半保留復(fù)制(簡稱復(fù)制)（semiconservative replication)：親代雙鏈DNA以每條鏈為模板，按堿基配對原則各合成一條互補(bǔ)鏈，這樣一條親代DNA雙螺旋，形成兩條完全相同的子代DNA螺旋，子代DNA分子中都有一條合成的“新”鏈和一條來自親代的舊鏈，稱為半保留復(fù)制。 7．DNA連接酶(DNA ligase)：是專門催化雙鏈DNA中缺口共價(jià)連接的酶，不能催化兩條游離的單鏈DNA鏈間形成磷酸二酯鍵。 12．岡崎片段(Okazaki fragment)、后隨鏈(1agging strand)：在DNA復(fù)制過程中，以親代鏈(5’→ 3’)為模板時(shí)，子代鏈的合成不能以3’→ 5’方向進(jìn)行，而是按5’→ 3’方向合成出許多小片段，因?yàn)槭菍榈热搜芯堪l(fā)現(xiàn)，因此稱岡崎片段。16．突變(mutation)：基因組DNA順序上的任何一種改變都叫做突變。23．重組修復(fù)(rebination repair)：DNA在有損傷的情況下也可以復(fù)制，復(fù)制時(shí)子代鏈躍過損傷部位并留下缺口，通過分子間重組，從完整的另一條母鏈上將相應(yīng)的核苷酸序列片段移至子鏈缺口處，然后用再合成的多核苷酸的序列補(bǔ)上母鏈的空缺，此過程稱重組修復(fù)。28．模板鏈(template strand)[又稱負(fù)()鏈，反意義鏈(antisense strand)]：轉(zhuǎn)錄過程中用作模板的這條DNA鏈，稱模板鏈。36．核內(nèi)不均一RNA(hnRNA)：是真核生物細(xì)胞核內(nèi)的mRNA前體分子，分子量較大，并且不均一，含有許多內(nèi)含子。→5’外切酶活性，用以校對復(fù)制的正確性，當(dāng)出現(xiàn)錯(cuò)配堿基時(shí)，切除錯(cuò)配堿基直到正確配對為止；DNA聚合酶I不是DNA復(fù)制和校正中的主要聚合酶，它的功能主要是修復(fù)。DNA復(fù)制基本規(guī)律：①復(fù)制過程為半保留方式；②原核生物單點(diǎn)起始，真核生物多點(diǎn)起始，復(fù)制方向多為雙向，也有單向；③復(fù)制方式呈多樣性，(直線型、Q型、滾動(dòng)環(huán)型…等)；④新鏈合成需要引物，引物RNA長度—般為幾個(gè)～10個(gè)核苷酸，新鏈合成方向5’→ 3’，與模板鏈反向，堿基互補(bǔ)；⑤復(fù)制為半不連續(xù)的，以解決復(fù)制過程中，兩條不同極性的鏈同時(shí)延伸問題，即…—條鏈可按5’→ 3’方向連續(xù)合成稱為前導(dǎo)鏈，另一條鏈先按5’→ 3’方向合成許多不連續(xù)的岡崎片段(原核生物一般長10002000個(gè)核苷酸，真核生物一般長100200個(gè)核苷酸)，再通過連接酶連接成完整鏈，稱后隨鏈，且前導(dǎo)鏈與后隨鏈合成速度不完全—致，前者快，后者慢；⑥復(fù)制終止時(shí)，需切除前導(dǎo)鏈、岡崎片段的全部引物，填補(bǔ)空缺，連接成完整DNA鏈；⑦修復(fù)和校正DNA復(fù)制過程出現(xiàn)的損傷和錯(cuò)誤，以確保DNA復(fù)制的精確性。7．試比較轉(zhuǎn)錄與復(fù)制的區(qū)別。4．真核生物DNA聚合酶有__DNA聚合酶α_____，___DNA聚合酶β____，___DNA聚合酶γ____，__DNA聚合酶δ_____。11．由逆轉(zhuǎn)錄酶所催化的核酸合成是以__ RNA _____為模板，以__三磷酸脫氧核苷酸(dNTP) _____為底物，產(chǎn)物是__與RNA互補(bǔ)的DNA鏈_____。19．某DNA雙螺旋中，單鏈5’… ATCGCTCGA … 3’為有意義鏈，若轉(zhuǎn)錄mRNA，其中堿其排列順序?yàn)?’… __ AUCGCUCGA _____… 3’。25．hnRNA加工過程中，在mRNA上出現(xiàn)并代表蛋白質(zhì)的DNA序列叫__外顯子_____。 ④在多數(shù)情況下，只有一條DNA鏈作為模板。 ①只有在DNA存在時(shí)，RNA聚合酶方可催化RNA ②需要NTP做原料 ③RNA鏈的延伸方向是3’→ 5’ ④RNA的堿基需要與DNA互補(bǔ) 11．關(guān)于逆轉(zhuǎn)錄作用的錯(cuò)誤敘述是( ③ )。外切酶活力，而RNA聚合酶無相應(yīng)活力③脫氧核苷酸之間的氫鍵配對精確性高于脫氧核苷酸與核苷酸之間的配對④DNA聚合酶有5’→ 3’外切酶活力，RNA聚合酶無此活性17．有關(guān)逆轉(zhuǎn)錄酶的論述哪些是正確的( ①②④ )。①切除內(nèi)含子，連接外顯子 ②5’端接上“帽子” ③3’端接上CCA ④3’端添加多聚(A)尾 ⑤堿基甲基化27. 指導(dǎo)合成蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因大多數(shù)是( ① )①單考貝順序 ⑤以上都正確( ④ )①堿基替換 ②磷酸酯鍵斷裂 ③堿基丟失④形成共價(jià)連接的嘧啶二聚體 ⑤堿基插入30. 能編碼多肽鏈的最小DNA單位是( ⑤ )①順反子 ②操縱子 ③啟動(dòng)子 ④復(fù)制子 ⑤轉(zhuǎn)錄子 (五)是非題 1．大腸桿菌DNA生物合成中，DNA聚合酶I主要起聚合作用。( )9．RNA的生物合成不需要引物。( √ )17．大腸桿菌DNA聚合酶Ⅲ只起聚合作用，不能校對錯(cuò)配堿基。( √ )19．真核生物的各種RNA都必須經(jīng)過剪切、修飾才能成熟。( √ )11．DNA聚合酶I切除引物RNA屬3’→ 5’外切酶作用，切除錯(cuò)配的核苷酸屬5’→ 3’外切酶作用。( √ ) 3．DNA生物合成不需要核糖核苷酸。①腺嘌呤取代胞嘧啶 ②胞嘧啶取代尿嘧啶③缺失三個(gè)核苷酸 ④插入二個(gè)核苷酸19．Crick于1958年提出的中心法則包括( ①③⑤ )。 ①M(fèi)et ②S—腺苷甲硫氨酸 ③甲酰甲硫氨酸 ④MettRNA 13．關(guān)于大腸桿菌DNA聚合酶I的下列論述哪些是正確的( ①②③ )。 4．修補(bǔ)胸腺嘧啶有數(shù)種方法，其中之一是用DNA連接酶、DNA聚合酶等催化進(jìn)行，試問這些酶按下列哪種順序發(fā)揮作用( ③ )： ①DNA連接酶→DNA聚合酶→核酸內(nèi)切酶 ②DNA聚合酶→核酸內(nèi)切酶→DNA連接酶 ③核酸內(nèi)切酶→DNA聚合酶→DNA連接酶④核酸內(nèi)切酶→DNA連接酶→DNA聚合酶5．DNA聚合酶在分類時(shí)屬于六大酶類中的哪一種( ① )。(四)選擇題1．DNA以半保留方式復(fù)制，如果一個(gè)具有放射性標(biāo)記的雙鏈DNA分子，在無放射性標(biāo)記的環(huán)境中經(jīng)過兩輪復(fù)制。形成的分子基礎(chǔ)是__堿基互補(bǔ)配對_____。13．誘變劑大致分為__物理誘變劑_____、_化學(xué)誘變劑______、__生物誘變劑_____三種類型。5．解旋酶的作用是___使DNA雙螺旋打開____，反應(yīng)需要ATP_提供能量，結(jié)合在后隨鏈模板上的解旋酶，移動(dòng)方向__ 5’→3’____，結(jié)合在前導(dǎo)鏈的rep蛋白，移動(dòng)方向___ 3’→5’____?！?’方向合成。病毒的單鏈RNA在病毒進(jìn)入寄主細(xì)胞后被釋放出來，此 RNA帶有與模板互補(bǔ)的tRNA引物，病毒的逆轉(zhuǎn)錄酶以此RNA為模板，從引物的3’OH端，按堿基互補(bǔ)原則以5’→ 3’方向合成DNA鏈()，形成RN