【正文】 in THP－1 cells［J］．Am J Chin Me d，2007, 35(3): 507516．[22] 李巧云，閻月榮．單掃描示波極譜法連測五味子、榛蘑中的銅和鋅［J］．生析試驗室，2005，24(1) :5255．[23] [M].:9~27,118137[24] 張國鋒，刁其玉，屠焰．荷花蜂花粉多糖提取條件的研究[J]．飼料工業(yè)，2009，30 (20): 47．[25] 徐 揚，楊保偉，柴博華，等. 超聲波—酶法提取海帶多糖及其抑菌活性[J]. 農(nóng)業(yè)工程學(xué)報，2010， 26(1)：356362.[26] 劉利萍，鐘引飛．海帶多糖的超聲波提取及對自由基的清除作用研究[J]．紹興文理學(xué)院學(xué)報，200 5，13(1)：4951．[27] 尚紅偉．大棗多糖提取分離過程研究[D].西安：,6.[28] 陳紅,崔海月,李玉擴,劉秀奇,樊紅秀,[J]. 吉林農(nóng)業(yè) 大學(xué)學(xué)報. 2011,33(5):581586致謝 本論文是在趙曉丹老師的精心指導(dǎo)下完成的。表 34 分析因素與水平水平因素A加酶率/%B酶解時間/minC酶解溫度/℃DpH1804529050310055根據(jù)表35進行正交試驗，得到結(jié)果如下 表35正交試驗直觀分析表序號A加酶率/%B酶解時間/minC酶解溫度/℃DpH得率/%180452905031005548050590556100457805589045910050K1K2K3R表36方差分析表因素偏差平方和自由度F比F臨界值加酶率2時間2溫度2pH2誤差8 根據(jù)表336中數(shù)據(jù)，極差R表明，正交實驗中，各因素對多糖提取率影響程度大小為：加酶率 酶解溫度 pH 酶解時間。纖維素酶能夠分解纖維素，破壞植物的細胞壁，有利于多糖的提取。 固定超聲波功率250W，提取時間30min，料液比1:40，改變溫度。3 結(jié)果與分析 將葡萄糖配制成不同濃度的溶液，采用苯酚硫酸法測定其在490nm處的吸光值，以葡萄糖濃度為橫坐標，吸光值為縱坐標繪制曲線，得到圖31 圖31葡萄糖標準曲線實驗結(jié)果顯示，葡萄糖濃度在0μg/mL30μg/mL區(qū)間，呈線性關(guān)系，其相關(guān)系數(shù)為 。（3）超聲波功率對榛蘑多糖提取率的影響 在料液比1:40，超聲溫度60℃，超聲30min的條件下，分別設(shè)定超聲波功率為200、250、300、350、400W，提取多糖，計算得率。榛蘑肉質(zhì)鮮美，營養(yǎng)價值豐富，富含蛋白質(zhì)、多糖及多種維生素和礦物質(zhì)，具有極高的食用價值。是提取植物（中藥）中活性成分最常用的方法之一。因此得出榛蘑多糖對于低能離子束誘變具有一定的防護作用［20］。同時發(fā)現(xiàn)AMP－1對胰島細胞的分泌也有一定的促進作用［12］。AMP能顯著增強T 細胞介導(dǎo)遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，說明可增強小鼠的體液免疫反應(yīng)及細胞免疫反應(yīng)能力[10]。 enzyme hydrolysis。（2）采用苯酚—硫酸比色法，繪制葡萄糖標準曲線，從而測定多糖含量。根據(jù)結(jié)果，進行正交試驗，得到超聲波—酶法聯(lián)合提取榛蘑多糖的最佳工藝條件。 榛蘑不僅是食材，還可入藥，自古以來一直是一種中醫(yī)藥材，具有清目、利肺、益腸胃及活血化瘀，強筋健骨的功效。 采用MTT法檢測蜜環(huán)菌多糖對肝癌細胞SMMC－7221的增殖抑制作用。(4)榛蘑多糖的抗氧化及抗衰老作用 榛蘑多糖的抗氧化抗衰老作用近些年來取得較大的研究進展。一般多糖提取大多數(shù)采用熱水提取，得到了多糖可以直接或離心去除不溶物，或利用多糖不溶于高含量乙醇的性質(zhì)，用高濃度酒精沉淀凈化多糖。（4）適用性廣。 根據(jù)邵信儒、孫海濤等人用熱水浸提法提取山榛蘑多糖得到的最佳工藝條件， 裝瓶備用。(1)加酶率對榛蘑多糖得率的影響 在溫度為50℃、pH ，酶解時間為90 min 條件下，%、%、%、%、%，再經(jīng)超聲處理提取多糖，計算得率。因此，本試驗選用料液比1:40比較適宜。由此制定出31的分析因素與水平表。圖38不同酶解溫度下的榛蘑多糖得率 試驗結(jié)果如圖38所示：隨著酶解溫度的升高，榛蘑多糖得率先顯著提高，在溫度為50℃時，得率達到最大值，之后隨著溫度的升高，不斷下降。試驗重復(fù)三次，%。 還要感謝符群老師，欒德仕、鄭洪量兩位學(xué)長及袁長鵬、王德龍、徐林君、周瑤、張洪超、陳敏等同學(xué)，對我試驗給予了極大的幫助，在此表示衷心的感謝。 ，加入40ml蒸餾水，%的纖維素酶，在50℃的水浴條件下，酶解90min, 得到提取液后在超聲波清洗機內(nèi)超聲40min，超聲溫度為60℃，功率為300W。 %，酶解溫度50℃， pH ，改變酶解時間。溫度高使蛋白質(zhì)變性，不利于糖蛋白的析出。%。，選用正交表L9(34)研究超聲波提取榛蘑多糖的最佳條件 超聲波法提取榛蘑多糖正交因素水平表L9(34)水平因素A料液比B時間/minC功率/WD溫度/℃1 2 3 ，根據(jù)正交試驗得出的最佳工藝條件，提取多糖，重復(fù)3次，得到最佳條件下的多糖得率。 榛蘑粉傳統(tǒng)水提 超聲波法 超聲波酶聯(lián)合法 酶法 加酶率酶解溫度酶解時間 PH 料液比超聲功率超聲溫度超聲時間 回流浸提 超聲處理 濃縮除蛋白離心醇沉榛蘑多糖計算提取率2 材料和方法 試驗器材 試驗儀器超聲波細胞清洗器KQ500DE 昆山超聲波儀器有限公司電熱恒溫水浴鍋DKS12上海森信實驗儀器有限公司臺式低速離心機TDL5W湖南星科科學(xué)儀器有限公司恒溫水浴搖床HZSHA哈爾濱東聯(lián)電子技術(shù)開發(fā)有限公司循環(huán)水多用真空泵SHB3鄭州杜甫儀器廠旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器RE 52A上海亞榮生化儀器廠中草藥粉碎機FW135天津市泰斯特儀器有限公司可見光分光光度計722S上海精密科學(xué)儀器有限公司臺秤YP2001N上海精密科學(xué)儀器有限公司分析天平JA2003上海良品儀器儀表有限公司pH計PB10Sartorius有限公司電冰箱BCD215KSHaier有限公司 試驗材料榛蘑購于家樂福超市纖維素酶購于美國Sigma公司苯酚分析純天津市瑞金特化學(xué)試劑有限公司濃硫酸分析純北京化工廠正丁醇分析純天津市天力化學(xué)試劑有限公司鹽酸分析純北京化工廠氫氧化鈉分析純天津市天力化學(xué)試劑有限公司無水乙醇分析純天津市天力化學(xué)試劑有限公司三氯甲烷分析純天津市津東天正精細化學(xué)試劑廠 試驗方法 將榛蘑洗凈、晾曬后，置于烘箱中，80℃下恒溫烘干后用粉碎機粉碎，過80目篩，得到榛蘑粉。（2）常壓萃取。在臨床上榛蘑多糖還用于治療肢麻、佝僂病、頸椎病、風(fēng)濕病、腰腿酸痛，可以強壯筋骨。 因此可以得出AMP－l可減少AXN對INS－l細胞的損傷，增加INS－l細胞的存活率。綜合上述，榛蘑多糖是通過調(diào)節(jié)免疫細胞以及免疫分子等多方面發(fā)揮其正向免疫調(diào)節(jié)作用，具有較好的藥用價值，蜜環(huán)菌多糖是否可作為骨髓細胞的保護劑，抗放射，抗化學(xué)藥物對骨髓造細胞損傷，是值得深入研究的課題。其外型呈傘狀，土黃色，廣泛分布在我國東北地區(qū)，被稱為“東北第四寶” [1]。分別對料液比、超聲溫度、超聲波功率、超聲時間4個因素，進行單因素試驗。根據(jù)實驗結(jié)果，進行正交試驗，求得超聲波法提取榛蘑多糖的最佳工藝條件。然而榛蘑是一種野生菌類，人工無法培育。(2)榛蘑多糖的抗腫瘤作用 經(jīng)實驗研究可知，榛蘑多糖亦具有抗腫瘤的生理活性。陸軍等［14］研究發(fā)現(xiàn)AMP－1能使INS－1細胞NOS活性降低，NO和MDA含量減少，同時使SOD的活性增強，增加了GSH的含量，因此在一定濃度范圍的AMP－1對葡萄糖刺激下INS－1細胞的胰島素分泌的促進作用，可能與AMP－l能夠增加細胞清除自由基能力有關(guān)