【正文】 in THP－1 cells［J］．Am J Chin Me d，2007, 35(3): 507516．[22] 李巧云，閻月榮．單掃描示波極譜法連測(cè)五味子、榛蘑中的銅和鋅［J］．生析試驗(yàn)室，2005，24(1) :5255．[23] [M].:9~27,118137[24] 張國(guó)鋒，刁其玉，屠焰．荷花蜂花粉多糖提取條件的研究[J]．飼料工業(yè)，2009，30 (20): 47．[25] 徐 揚(yáng)，楊保偉，柴博華，等. 超聲波—酶法提取海帶多糖及其抑菌活性[J]. 農(nóng)業(yè)工程學(xué)報(bào)，2010， 26(1)：356362.[26] 劉利萍，鐘引飛．海帶多糖的超聲波提取及對(duì)自由基的清除作用研究[J]．紹興文理學(xué)院學(xué)報(bào)，200 5，13(1)：4951．[27] 尚紅偉．大棗多糖提取分離過(guò)程研究[D].西安：,6.[28] 陳紅,崔海月,李玉擴(kuò),劉秀奇,樊紅秀,[J]. 吉林農(nóng)業(yè) 大學(xué)學(xué)報(bào). 2011,33(5):581586致謝 本論文是在趙曉丹老師的精心指導(dǎo)下完成的。表 34 分析因素與水平水平因素A加酶率/%B酶解時(shí)間/minC酶解溫度/℃DpH1804529050310055根據(jù)表35進(jìn)行正交試驗(yàn)，得到結(jié)果如下 表35正交試驗(yàn)直觀分析表序號(hào)A加酶率/%B酶解時(shí)間/minC酶解溫度/℃DpH得率/%180452905031005548050590556100457805589045910050K1K2K3R表36方差分析表因素偏差平方和自由度F比F臨界值加酶率2時(shí)間2溫度2pH2誤差8 根據(jù)表336中數(shù)據(jù)，極差R表明，正交實(shí)驗(yàn)中，各因素對(duì)多糖提取率影響程度大小為：加酶率 酶解溫度 pH 酶解時(shí)間。纖維素酶能夠分解纖維素，破壞植物的細(xì)胞壁，有利于多糖的提取。 固定超聲波功率250W，提取時(shí)間30min，料液比1:40，改變溫度。3 結(jié)果與分析 將葡萄糖配制成不同濃度的溶液，采用苯酚硫酸法測(cè)定其在490nm處的吸光值，以葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)繪制曲線，得到圖31 圖31葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，葡萄糖濃度在0μg/mL30μg/mL區(qū)間，呈線性關(guān)系，其相關(guān)系數(shù)為 。（3）超聲波功率對(duì)榛蘑多糖提取率的影響 在料液比1:40，超聲溫度60℃，超聲30min的條件下，分別設(shè)定超聲波功率為200、250、300、350、400W，提取多糖，計(jì)算得率。榛蘑肉質(zhì)鮮美，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值豐富，富含蛋白質(zhì)、多糖及多種維生素和礦物質(zhì)，具有極高的食用價(jià)值。是提取植物（中藥）中活性成分最常用的方法之一。因此得出榛蘑多糖對(duì)于低能離子束誘變具有一定的防護(hù)作用［20］。同時(shí)發(fā)現(xiàn)AMP－1對(duì)胰島細(xì)胞的分泌也有一定的促進(jìn)作用［12］。AMP能顯著增強(qiáng)T 細(xì)胞介導(dǎo)遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，說(shuō)明可增強(qiáng)小鼠的體液免疫反應(yīng)及細(xì)胞免疫反應(yīng)能力[10]。 enzyme hydrolysis。（2）采用苯酚—硫酸比色法，繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而測(cè)定多糖含量。根據(jù)結(jié)果，進(jìn)行正交試驗(yàn)，得到超聲波—酶法聯(lián)合提取榛蘑多糖的最佳工藝條件。 榛蘑不僅是食材，還可入藥，自古以來(lái)一直是一種中醫(yī)藥材，具有清目、利肺、益腸胃及活血化瘀，強(qiáng)筋健骨的功效。 采用MTT法檢測(cè)蜜環(huán)菌多糖對(duì)肝癌細(xì)胞SMMC－7221的增殖抑制作用。(4)榛蘑多糖的抗氧化及抗衰老作用 榛蘑多糖的抗氧化抗衰老作用近些年來(lái)取得較大的研究進(jìn)展。一般多糖提取大多數(shù)采用熱水提取，得到了多糖可以直接或離心去除不溶物，或利用多糖不溶于高含量乙醇的性質(zhì)，用高濃度酒精沉淀凈化多糖。（4）適用性廣。 根據(jù)邵信儒、孫海濤等人用熱水浸提法提取山榛蘑多糖得到的最佳工藝條件， 裝瓶備用。(1)加酶率對(duì)榛蘑多糖得率的影響 在溫度為50℃、pH ，酶解時(shí)間為90 min 條件下，%、%、%、%、%，再經(jīng)超聲處理提取多糖，計(jì)算得率。因此，本試驗(yàn)選用料液比1:40比較適宜。由此制定出31的分析因素與水平表。圖38不同酶解溫度下的榛蘑多糖得率 試驗(yàn)結(jié)果如圖38所示：隨著酶解溫度的升高，榛蘑多糖得率先顯著提高，在溫度為50℃時(shí)，得率達(dá)到最大值，之后隨著溫度的升高，不斷下降。試驗(yàn)重復(fù)三次，%。 還要感謝符群老師，欒德仕、鄭洪量?jī)晌粚W(xué)長(zhǎng)及袁長(zhǎng)鵬、王德龍、徐林君、周瑤、張洪超、陳敏等同學(xué)，對(duì)我試驗(yàn)給予了極大的幫助，在此表示衷心的感謝。 ，加入40ml蒸餾水，%的纖維素酶，在50℃的水浴條件下，酶解90min, 得到提取液后在超聲波清洗機(jī)內(nèi)超聲40min，超聲溫度為60℃，功率為300W。 %，酶解溫度50℃， pH ，改變酶解時(shí)間。溫度高使蛋白質(zhì)變性，不利于糖蛋白的析出。%。，選用正交表L9(34)研究超聲波提取榛蘑多糖的最佳條件 超聲波法提取榛蘑多糖正交因素水平表L9(34)水平因素A料液比B時(shí)間/minC功率/WD溫度/℃1 2 3 ，根據(jù)正交試驗(yàn)得出的最佳工藝條件，提取多糖，重復(fù)3次，得到最佳條件下的多糖得率。 榛蘑粉傳統(tǒng)水提 超聲波法 超聲波酶聯(lián)合法 酶法 加酶率酶解溫度酶解時(shí)間 PH 料液比超聲功率超聲溫度超聲時(shí)間 回流浸提 超聲處理 濃縮除蛋白離心醇沉榛蘑多糖計(jì)算提取率2 材料和方法 試驗(yàn)器材 試驗(yàn)儀器超聲波細(xì)胞清洗器KQ500DE 昆山超聲波儀器有限公司電熱恒溫水浴鍋DKS12上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司臺(tái)式低速離心機(jī)TDL5W湖南星科科學(xué)儀器有限公司恒溫水浴搖床HZSHA哈爾濱東聯(lián)電子技術(shù)開發(fā)有限公司循環(huán)水多用真空泵SHB3鄭州杜甫儀器廠旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器RE 52A上海亞榮生化儀器廠中草藥粉碎機(jī)FW135天津市泰斯特儀器有限公司可見光分光光度計(jì)722S上海精密科學(xué)儀器有限公司臺(tái)秤YP2001N上海精密科學(xué)儀器有限公司分析天平JA2003上海良品儀器儀表有限公司pH計(jì)PB10Sartorius有限公司電冰箱BCD215KSHaier有限公司 試驗(yàn)材料榛蘑購(gòu)于家樂(lè)福超市纖維素酶購(gòu)于美國(guó)Sigma公司苯酚分析純天津市瑞金特化學(xué)試劑有限公司濃硫酸分析純北京化工廠正丁醇分析純天津市天力化學(xué)試劑有限公司鹽酸分析純北京化工廠氫氧化鈉分析純天津市天力化學(xué)試劑有限公司無(wú)水乙醇分析純天津市天力化學(xué)試劑有限公司三氯甲烷分析純天津市津東天正精細(xì)化學(xué)試劑廠 試驗(yàn)方法 將榛蘑洗凈、晾曬后，置于烘箱中，80℃下恒溫烘干后用粉碎機(jī)粉碎，過(guò)80目篩，得到榛蘑粉。（2）常壓萃取。在臨床上榛蘑多糖還用于治療肢麻、佝僂病、頸椎病、風(fēng)濕病、腰腿酸痛，可以強(qiáng)壯筋骨。 因此可以得出AMP－l可減少AXN對(duì)INS－l細(xì)胞的損傷，增加INS－l細(xì)胞的存活率。綜合上述，榛蘑多糖是通過(guò)調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞以及免疫分子等多方面發(fā)揮其正向免疫調(diào)節(jié)作用，具有較好的藥用價(jià)值，蜜環(huán)菌多糖是否可作為骨髓細(xì)胞的保護(hù)劑，抗放射，抗化學(xué)藥物對(duì)骨髓造細(xì)胞損傷，是值得深入研究的課題。其外型呈傘狀，土黃色，廣泛分布在我國(guó)東北地區(qū)，被稱為“東北第四寶” [1]。分別對(duì)料液比、超聲溫度、超聲波功率、超聲時(shí)間4個(gè)因素，進(jìn)行單因素試驗(yàn)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，進(jìn)行正交試驗(yàn)，求得超聲波法提取榛蘑多糖的最佳工藝條件。然而榛蘑是一種野生菌類，人工無(wú)法培育。(2)榛蘑多糖的抗腫瘤作用 經(jīng)實(shí)驗(yàn)研究可知，榛蘑多糖亦具有抗腫瘤的生理活性。陸軍等［14］研究發(fā)現(xiàn)AMP－1能使INS－1細(xì)胞NOS活性降低，NO和MDA含量減少，同時(shí)使SOD的活性增強(qiáng)，增加了GSH的含量，因此在一定濃度范圍的AMP－1對(duì)葡萄糖刺激下INS－1細(xì)胞的胰島素分泌的促進(jìn)作用，可能與AMP－l能夠增加細(xì)胞清除自由基能力有關(guān)