【正文】 用具（包括餐具、洗漱用具、便盆、 痰罐等）。 11)對(duì)室內(nèi)地面、墻壁、家具和陳設(shè)物品消毒時(shí)，應(yīng)按照先上后下，先左后右的方法，依次進(jìn)行消毒 。在用化學(xué)法消毒時(shí)應(yīng)盡量選擇對(duì)相應(yīng)致病微生物殺滅作用良好，對(duì)人、畜安全，對(duì)物品損害輕微，對(duì)環(huán)境影響小的消毒劑。 （ 2）有機(jī)干擾物：見附錄 A。挑取上述第 2 代培養(yǎng)物中典型菌落，接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面，于 37℃ 培養(yǎng) 18h～ 24h，即為第 3代培養(yǎng)物。而后通過火焰加熱將菌固定于玻片上。 9）將芽孢液放于 80℃ 水浴中 10min（或 60℃ ， 30min），以殺滅殘余的細(xì)菌繁殖體。金屬片以不銹鋼制作，紙片以新華濾紙制作。 （ 2）滴染時(shí)，菌液滴加量不宜過多，避免流散影響染菌的準(zhǔn)確性。而后，用電動(dòng)混合器混合 20s（或在手掌上用力振敲 80 次），將菌洗下形成菌懸液。培養(yǎng)至規(guī)定時(shí)間（細(xì)菌繁殖體為 48h，白色念珠菌與細(xì)菌芽孢為 72h），計(jì)數(shù)最終結(jié)果的菌落數(shù)。 （ 7）傾注時(shí)瓊脂培養(yǎng)基溫度不得超過 45℃ ，以防損傷細(xì)菌或真菌。 操作要點(diǎn)： ① 對(duì)接觸消毒劑的微生物樣本，在達(dá)到規(guī)定作用時(shí)間，即刻取樣移入鑒定合格的中和劑溶液中； ② 所用中和劑的濃度與容量應(yīng)與鑒定試驗(yàn)結(jié)果規(guī)定的相同； ③ 即刻混勻，并按規(guī)定時(shí)間吸取樣液進(jìn)行隨后的培養(yǎng)檢測(cè)； ④ 在將樣本接種培養(yǎng)基以前的操作，應(yīng)按規(guī)定時(shí)間內(nèi)進(jìn)行，以免微生物與中 和劑或中和產(chǎn)物接觸過久。 （ 2）每次吸液，均須更換一支無菌吸管，以防交叉污染。 除藥的方法 （ 1）化學(xué)中和法：又稱中和劑法，是指在消毒劑與微生物作用到達(dá)規(guī)定時(shí)間的終點(diǎn)時(shí)，取樣加于適宜種類和濃度的中和劑中，將殘留消毒劑迅速中和，使其不再持續(xù)抑制或殺滅微生 物的方法。 （ 3）注意菌液的均勻分散。 （ 6） 將冷 至 40℃ ～ 45℃ 的熔化營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，傾 注于已加入樣液 的平皿中，每平皿 15ml～ 20ml。 （ 1）對(duì)菌懸液可直接進(jìn)行培養(yǎng)計(jì)數(shù)。10 5 cfu/片～ 5179。脫脂方法如下： ① 將載體放 在含 洗滌劑 的水中煮沸 30 min； ② 以自來水洗凈； ③ 用蒸餾水煮沸 10min； ④ 用蒸餾水漂洗至 pH 呈中性 ； ⑤ 晾干 、熨平備用。 7）將過濾后的芽孢懸液，置無菌離心管內(nèi)，以 3000 r/min 速度離心 30min。 3）用接種環(huán)取菌樣少許涂于玻片上，固定后以改良芽孢染色法染色，并在顯微鏡（油鏡） 下進(jìn)行鏡檢。 （ 14）電動(dòng)混合器 （ 15）濁度計(jì)。不能反映消毒劑的全面特性。 18)離開病家前，讓病家開窗通風(fēng)，擦拭打掃。 7)必要時(shí)，由檢驗(yàn)人員對(duì)不同消毒對(duì)象進(jìn)行消毒前采樣。 6)注意與其它傳染病控制措施配合：搞好傳染源的管理，疫區(qū)的封鎖、隔離，殺蠅、防蠅 ，滅鼠、防鼠，滅蚤，搞好飲用水、污水、食品的消毒及衛(wèi)生管理，搞好環(huán)境衛(wèi)生。 （ 5）在醫(yī)院中對(duì)傳染病病人的終末消毒由醫(yī)院安排專人進(jìn)行。應(yīng)遵循以下基本原則： 1）耐高溫、耐濕度的物品和器材，應(yīng)首選壓力蒸汽滅菌；耐高溫的玻璃器材、油劑類和干粉類等可選用干熱滅菌。 （ 5）分枝桿菌，例如結(jié)核分枝桿菌、龜分枝桿菌等。這類消毒方法應(yīng)能殺滅一切細(xì) 菌繁殖體（包括結(jié)核分枝桿菌）、病毒、真菌及其孢子和絕大多數(shù)細(xì)菌芽孢。根據(jù)消毒劑的成分 ， 估計(jì)可能有致敏作用者， — 23— 還需增做皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)。 (1)第一類消毒劑：指我國(guó)首創(chuàng)或根據(jù)國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道首次生產(chǎn)的消毒劑。將滴 定管中滴定液補(bǔ)足至全量后滴定 。 消毒產(chǎn)品理化檢驗(yàn)基本要求 消毒劑配方中不 能含有“消毒劑禁用物質(zhì)”，也必須符合消毒劑限量物質(zhì)要求。原始記錄數(shù)據(jù)和計(jì)算應(yīng) 及時(shí)校核，整理裝訂附于檢驗(yàn)報(bào)告后 ， 入檔保存?zhèn)洳?。消毒器械產(chǎn)生的化學(xué)因子按消毒劑的要求進(jìn)行 模擬現(xiàn)場(chǎng) 或 現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)。 用于飲水、手、皮膚、一般物體表面消毒的消毒劑任選模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)或現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)。所測(cè)含量在產(chǎn)品有效期內(nèi)，不得低于企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的下限值。 （ 4）對(duì)不宜用懸液定量法評(píng)價(jià)的消毒劑，如粘稠的消毒劑和沖洗消毒的消毒劑等的實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)用載體定量 法，試驗(yàn)應(yīng)重復(fù) 3 次。 載體 carrier 試驗(yàn)微生物的支持物。 殺滅時(shí)間 killing time， KT 用于生物指示物抗力鑒定時(shí) ， 指 受試指示物樣本，經(jīng)殺菌因子作用后全部樣本無菌生長(zhǎng)的最短作用時(shí)間 (min)。 術(shù)語(yǔ) 消毒 disinfection 殺滅或清除傳播媒介上病原微生物 ， 使其達(dá)到無害化的處理。 有效氯 available chlorine 有效氯是衡量含氯消毒劑氧化能力的標(biāo)志，是指與含氯消毒劑氧化能力相當(dāng)?shù)穆攘?(非指消毒劑所含氯量 )，其含量用 mg/L 或 %濃度表示。 終末消毒 terminal disinfection 傳染源離開疫源地后進(jìn)行的徹底消毒。在毒理試驗(yàn)中，取 3 批樣品中含量最高者進(jìn)行試驗(yàn)。評(píng)價(jià)消毒劑消毒效果的現(xiàn)場(chǎng)或模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)，應(yīng)用產(chǎn)品使用說明書的最低有效濃度和最短作用時(shí)間進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)前 ， 必須先按不同種類的試驗(yàn)微生物分別進(jìn)行相應(yīng)的化學(xué)中和劑或其它殘留消毒劑去除法的鑒定試驗(yàn)，選出適宜 的中和試驗(yàn)微生物以金黃色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus)ATCC 6538 作為細(xì)菌繁殖體中化膿 性球 菌的代表； 大腸桿菌 (Escherichia coli)8099 作為細(xì)菌繁殖體中腸道菌的代表； 銅綠假單胞菌 (Pseudomonas aeruginosa)ATCC 15442作為醫(yī)院感染中最常分離的細(xì)菌繁殖體的代表； 白色葡萄球菌(Staphylococcus albus)8032 作為空氣 中 細(xì)菌 的 代表 ；龜分枝桿菌膿腫亞種 (Mycobacterium chelonae subsp. abscessus)ATCC 93326 作為人結(jié)核 分枝 桿菌的代表； 枯草桿菌黑色變種芽孢 (Bacillus subtilis )ATCC 9372 作為細(xì)菌芽孢的代表 ；白色念珠菌(Candida albicans)ATCC 10231 和黑曲霉菌 (Aspergillus niger)ATCC 16404 作為致病性真菌的代表 ；脊髓灰質(zhì)炎病毒 Ⅰ型疫苗株(PoliovirusⅠ )作為病毒的代表。化學(xué)因子則由消毒器械產(chǎn)生具有殺菌作用的化學(xué)物質(zhì) ， 常見有次氯酸鈉、臭氧、二氧化氯等，可測(cè)定所產(chǎn)生消毒液中有效成分的濃度。如有不同于通常規(guī)律的結(jié)果，應(yīng)重新考慮實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。 此外，對(duì)試驗(yàn)中出現(xiàn)某些異?，F(xiàn)象亦應(yīng)加以說明。配制滴定液試劑 (如硫代硫酸鈉 )因配制后尚需專門處理，亦可用化學(xué)純。 粉劑和片劑的取樣量為測(cè)定所需量的 10 倍，經(jīng)研磨后精確稱取適量樣品進(jìn)行測(cè)定。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，判定是否需繼續(xù)做其它試驗(yàn)。 2）在皮膚刺激試驗(yàn)、急性眼刺激試驗(yàn)和陰道黏膜刺激試驗(yàn)中所用受試物的濃度，通常是對(duì)皮膚、黏膜消毒時(shí)應(yīng)用濃度的 5倍。 （ 3）低度危險(xiǎn)性物品：雖有微生物污染，但在一般情況下無害，只有當(dāng)受到一定量的病原微生物污染時(shí)才造成危害的物品。例如 ，在有病原微生物污染時(shí)，必須針對(duì)所污染病原微生物的種類選用有效的消毒方法。 (3) 氣體化學(xué)消毒劑：應(yīng)防止有毒有害消毒氣體的泄漏，經(jīng)常檢 — 26— 測(cè)消毒環(huán)境中該類氣體的濃度，確保在國(guó)家規(guī)定的安全范圍之內(nèi)；對(duì)環(huán)氧乙烷氣體消毒劑，還應(yīng)嚴(yán)防發(fā)生燃燒和爆炸事故。常用消毒劑有過氧乙酸、含氯消毒劑、碘伏等。 3)對(duì)脫掉外衣應(yīng)放在自帶的布袋中（不要放在污染或可能受到污染的地方）。 13)室內(nèi)消毒后，必要時(shí)對(duì)廁所、垃圾、下水道口、自來水龍頭、缸水和井水等進(jìn)行消毒。凡應(yīng)消毒的物品，不得遺漏。 （ 7）革蘭染色液 ： 見附錄 A。 應(yīng)當(dāng)天使用不得過夜。水洗，待干后鏡檢。 菌片的制備程序 （ 1）消毒試驗(yàn)中使用的菌片是以菌液滴加于載體上制成。10 8cfu/ml～ 5179。 （ 6）制得的菌懸液和菌片，用畢應(yīng)隨時(shí)放入冰箱內(nèi)，盡量減少在室溫下放置 時(shí)間，以 減少 細(xì)菌的自然死亡。 （ 4）將 101 管依前法用電動(dòng)混合器混合 20s（或在手掌上用力振敲 80次），混勻，再吸取出 102 管內(nèi)。 對(duì)估計(jì)菌量極少的樣本（如消毒處理后樣本），在培養(yǎng)計(jì)數(shù)時(shí)可不作稀釋，即使平板菌落數(shù)未達(dá) 15時(shí)，亦可用其計(jì)算最終結(jié)果。 殘留消毒劑的去除方法 目 的 在化學(xué)消毒試驗(yàn)中，達(dá)到規(guī)定消毒時(shí)間終點(diǎn)時(shí)，要求立即終止殘留消毒劑的繼續(xù)作用，以便準(zhǔn)確檢測(cè)出消毒體系中殘留存活的微生物及其數(shù)量。 （ 3）稀釋法 將經(jīng)消毒劑作用過的微生物樣本，用稀釋液稀釋，降低殘留消毒 — 36— 劑濃度，以消除對(duì)微生物的抑制作用。本法可單獨(dú)使用，但更常見的是與其它方法同時(shí)使用。殘留消 毒劑的去除（下簡(jiǎn)稱除藥），可排除殘留消毒劑對(duì)微生物的抑制，從而使試驗(yàn)獲得正確結(jié)果。菌量單位為 cfu。必要時(shí)，還可作某稀釋度的 1:1或 1:4稀釋。 試驗(yàn)器材 （ 1）刻度吸管（ 、 ）。 滴染法染菌時(shí)，將經(jīng)滅菌的載體片平鋪于無菌平皿 內(nèi)，逐片滴加菌液。根據(jù)其特點(diǎn)選擇適宜材料載體作為代表。 4）羅氏瓶培養(yǎng)物，用 吸管加 無菌蒸餾水于每一羅氏瓶中，以 L棒輕輕推刮下菌苔。 （ 2）細(xì)菌芽孢懸液的制備 1）取凍干菌種管，在無菌操作下打開，以毛細(xì)吸管吸加適量營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，輕柔吹吸 數(shù)次，使菌種融化 分散。 （ 9）恒溫水浴箱。 6)攜回的污染衣物應(yīng)立即分類作最終消毒。 15)疫點(diǎn)消毒工作完畢，對(duì)消毒人員穿著的工作服、膠靴等進(jìn)行噴灑消毒后脫下。用過氧乙酸或含氯制劑時(shí)，須戴防護(hù)眼鏡。 — 27— 2)消毒持續(xù)時(shí)間：以傳染病流行情況和病原體監(jiān)測(cè)結(jié)果為依據(jù)確定消毒的持續(xù)時(shí)間。 (5) 處理銳利器械和用具應(yīng)采取有效防護(hù)措施，以避免可能對(duì)人體的刺、割等傷 害。 2）對(duì)受到真菌、親水病毒、螺旋體、支原體、衣原體和病原微生物污染的物品，選用中水平以上的消毒方法。例如，毛巾、面盆、痰盂（杯）、地面、便器、餐具、茶 具、墻面、桌面、床面、被褥、一般診斷用品 (聽診器、聽筒、 血壓計(jì)袖帶等 )等。 3）在皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)時(shí)，采用的誘導(dǎo)濃度應(yīng)為引起皮膚刺激反應(yīng)的最低濃度或原液，激發(fā)濃度應(yīng)為不引起皮膚刺激反應(yīng)的最高濃度或 原液。視其試驗(yàn)結(jié)果，判定是否需做其它試驗(yàn)項(xiàng)目。如果無法提供空白樣品，可用加入標(biāo)準(zhǔn)量法進(jìn)行方法可靠性的論證。未經(jīng)濃度標(biāo)定者則稱“溶液”，以示區(qū)別。 殺菌劑量包含有兩個(gè)參數(shù)，一是殺菌因子的強(qiáng)度，二是作用的時(shí) 間。必要時(shí)，還需要經(jīng)過多種試驗(yàn)，多個(gè) 實(shí)驗(yàn)室重復(fù)，查 閱國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn) ， 從各個(gè)角度證明，才能做出可靠的結(jié)論。其要求與消毒劑的金屬腐蝕性試驗(yàn)相同。 不同用途的消毒劑和消毒 器械，實(shí)驗(yàn)室殺滅微生物試驗(yàn)的代表微生物應(yīng)按照 表 11 所列者 選擇 。對(duì)用于 滅菌的消毒劑 則以說明書中規(guī)定的使用濃度和其 滅菌效果。 （ 3）化學(xué)指示物、生物指示物、滅菌包裝、衛(wèi)生用品和 1 次性使用醫(yī)療用品，送檢單位應(yīng)送檢 3批樣品。 無菌檢驗(yàn) sterility testing 證明滅菌后的物品中是否存在活微生物所進(jìn)行的試驗(yàn)。 中和劑 neutralizer 在微生物殺滅試驗(yàn)中，用以消除試驗(yàn)微生物與消毒劑的混懸液中和微生物表面上殘留的消毒劑，使其失去對(duì)微生物抑制和殺滅作用的試劑。本規(guī)范含總則、消毒檢驗(yàn)技術(shù)規(guī)范、醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)消毒技術(shù)規(guī)范和疫源地消毒技術(shù)規(guī)范四個(gè)部分。 自然菌 natural bacteria 在消毒試驗(yàn)中 ， 指存在于某一試驗(yàn)對(duì)象上非人工污染的細(xì)菌。又稱作用時(shí)間、處理時(shí)間。 （ 3）用于評(píng)價(jià)醫(yī)療器械滅菌的消毒劑和消毒器械滅菌的功能鑒定試驗(yàn)應(yīng)用載體定性法，試驗(yàn)應(yīng)重復(fù) 5 次。 消毒產(chǎn)品鑒定測(cè)試項(xiàng)目的確定 （ 1）有效成分含量的測(cè)定：有效成分系指具有殺菌作用的成分。 表 11 殺滅試驗(yàn)中微生物的選擇 消毒對(duì)象 微 生 物 的 種 類 金黃色葡萄球 菌 綠膿 桿菌 大腸 桿菌 白色念珠菌 黑曲 霉菌 白色葡萄球菌 龜分枝桿菌膿腫亞種 枯草桿菌黑色變種芽孢 脊髓灰質(zhì)炎病 毒 手 皮膚和黏膜 + + + + + + 足 + + + 空氣 + 醫(yī)療器械和用品 (滅菌與高水平消毒 ) + 醫(yī)療器械和用品 + + + + — 18— ( 中 水 平 消毒 ) 醫(yī)療器械和用品 ( 低 水 平 消毒 ) + + + 一般物品表面 和織物 + + 食 (飲 )具 + + 飲水和游泳池水 + 瓜果、蔬菜 + 【注】表中‘ +’為必做試驗(yàn)的微生物，消毒劑特指對(duì)某微生物具有殺滅作用者，則除按表中要求外，還需另選做該微生物殺滅試驗(yàn)。 （ 4）安全性 試驗(yàn) 包括電器安全試驗(yàn)和消毒器械產(chǎn)生的化學(xué)因子的毒理學(xué) 試驗(yàn) 。表格中每一欄目應(yīng)用藍(lán)黑或碳素墨水逐項(xiàng)填寫。 （ 2）實(shí)用劑量不低于模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)或現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)所測(cè)得的結(jié)果。本規(guī)范中滴定液濃度的計(jì)算，除碘滴定液按原子量計(jì)算外，其它滴