【正文】 但若稀釋過多，微生物濃度下降，可出現(xiàn)假陰性結(jié)果。因?yàn)橄倔w系中殘留的消毒劑，可能對微生物的生長繁殖具有一定抑制作用，從而可導(dǎo)致對殺菌效果偏高的錯誤判斷，甚至產(chǎn)生假陰性結(jié)果。 將求得的平均菌落值，再乘以稀釋倍數(shù)，即得每毫升原樣液中的菌量。如此類推，直至最后一管。 活菌培養(yǎng)計數(shù)技術(shù) 適用范圍 測定細(xì)菌懸液、菌片、采樣液等樣本中含有活菌的數(shù)量。10 8cfu/ml，可使用濁度計調(diào)整菌液濃度。載體應(yīng)根據(jù)消毒對象選擇，常用的有金屬、玻璃、濾紙、線、 棉 布等。芽孢呈綠色，菌體呈紅色。 5）懷疑有污染時，應(yīng)以菌落形態(tài)、革蘭染色與生化試驗(yàn)等法進(jìn)行鑒定。 （ 8）芽孢染色液：見附錄 A。嚴(yán)格區(qū)分已消毒和未消毒的 物品，勿使已消毒的物品被再 次污染。 14)對傳染源密切接觸者進(jìn)行人員衛(wèi)生處理。穿隔離服、膠鞋，戴上口罩、帽子。 技術(shù)要求 (1)疫區(qū)消毒 1)消毒范圍和對象：以傳染源排出病原體可能污染的范圍為依據(jù)確定消毒范圍和對象。 (4) 液體化學(xué)消毒劑：應(yīng)防止過敏和可能對皮膚、黏膜的損傷。 （ 3）根據(jù)物品上污染微生物的種類、數(shù)量和危害性選擇消毒、滅菌的方法 1） 對受到細(xì)菌芽孢、真菌孢子、分枝桿菌和經(jīng)血傳播病原體（乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、艾滋病病毒等）污染的物品，選用高水平消毒法或滅菌法。這類物品和器材僅直接或間接地和健康無損的皮膚相接觸，包括生活衛(wèi)生用品和病人、醫(yī)護(hù)人員生活和工作環(huán)境中的物品。使用原形（原液）對皮膚、黏膜進(jìn)行消毒的消毒劑，則采用消毒劑原形（原液）作為試驗(yàn)受試物，不需對消毒劑原形再進(jìn)行濃縮。 (4)室內(nèi)空氣消毒劑：除按第一類、第二類或第三類消毒劑的要求進(jìn)行毒理學(xué)試驗(yàn)外，還必須 做急性吸入毒性試驗(yàn)和急性眼刺激試驗(yàn)。 如果選用色譜法或分光光度法，進(jìn)行方法可靠性論證時應(yīng)附空白樣品（不含被測成分的其它成分所構(gòu)成的樣品）、模擬樣品（空白樣品加有效成分的標(biāo)準(zhǔn)品）以及待測樣品的色譜圖或光譜圖。 本規(guī)范中，“滴定液”是指經(jīng)過標(biāo)定 ， 濃度準(zhǔn)確至 mol/L～ mol/L 的溶液。 實(shí)用劑量的要求 日常消毒與滅菌中影響殺菌效果的因素較多，而實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)所規(guī)定的條件，均應(yīng)控制在一個固定的范圍之內(nèi)，因此，需根據(jù)多種試驗(yàn)結(jié)果和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)確定。如試驗(yàn)組距設(shè)置 ， 消毒劑 (器械 )濃度 (強(qiáng)度 )測定和計算 ， 實(shí)驗(yàn)條件 (溫度、濕度、 pH 值等 )是否符合規(guī)定 ， 特別 要注意中和劑的選擇試驗(yàn)是否符合要求等。 （ 2）金屬腐蝕性試驗(yàn) 主要檢測殺菌器械所產(chǎn)生化學(xué)殺菌因子對金屬的腐蝕性。 在上述規(guī)定的菌 、毒株的 基礎(chǔ)上，根據(jù)消毒劑特定用途或試驗(yàn)特殊需要，還可增選其他菌 、毒 株。 （ 6）在對消毒劑進(jìn)行監(jiān)督監(jiān)測時 ， 定量殺菌試驗(yàn)的消毒劑濃度和作用時間選擇消毒對象中抗力最強(qiáng)的微生物 ， 以說明書規(guī)定的最低濃度和最短時間驗(yàn)證其消毒效果。 （ 2）消毒器械，送檢單位應(yīng)送檢 3 件樣品，大型器械可送檢 1件樣品，標(biāo)識應(yīng)與擬銷售產(chǎn)品完全 相同。 預(yù)防性消毒 preventive disinfection 對可能受到病原微生物污染的物品和場所進(jìn)行的消毒。（有效碘及有效溴的定義和表示法與有效氯對應(yīng)）。 適用范圍 本規(guī)范適用于在中華人民共和國境內(nèi)生產(chǎn)、經(jīng)營、使用和檢驗(yàn)消毒產(chǎn)品的組織，醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)以及傳染病疫源地和其他一切需要消毒的場所。 存活時間 survival time， ST 用于生物指示物抗力鑒定時 ， 指受試指示物樣本，經(jīng)殺菌因子作 — 14— 用后全部樣本有菌生長的最長作用時間 (min)。 人員衛(wèi)生處理 personnel decontamination 對污染 或可能被污染人員進(jìn)行人體、著裝、隨身物品等的消毒與清洗等除污染處理。在無特殊要求的情況下 ， 一 — 16— 般以不銹鋼圓片為載體。所有化學(xué)消毒劑均應(yīng)進(jìn)行本項(xiàng)檢測。 （ 6）模擬現(xiàn)場試驗(yàn)與現(xiàn)場試驗(yàn)：根據(jù)不同消毒對象按如下要求選擇模擬現(xiàn)場或現(xiàn)場試驗(yàn) : 用于、空氣消毒的消毒劑須進(jìn)行現(xiàn)場試驗(yàn)。 （ 5）模擬現(xiàn)場 和 現(xiàn)場試驗(yàn) 用于消毒及滅菌的器械均須進(jìn)行模擬現(xiàn)場試驗(yàn)。一次試驗(yàn)填寫一份表格。 （ 3）實(shí)用劑量應(yīng)對人體和環(huán)境無危害 ， 對物品無損害。 — 21— 滴定液的標(biāo)定及所有樣品測定均平行進(jìn)行兩次。 (1)第一階段 (急性毒性試驗(yàn)、皮膚刺激試驗(yàn)和黏膜刺激試驗(yàn) ) 1)急性經(jīng)口毒性試驗(yàn) 2)急性吸入毒性試驗(yàn) 3)皮膚刺激試驗(yàn) 4)急性眼刺激試驗(yàn) 5)陰道黏膜刺激試驗(yàn) 6)皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn) (2)第二階段 (亞急性毒性試驗(yàn)和致突變試驗(yàn) ) 1)亞急性毒性試驗(yàn) 2)致突變試驗(yàn) ① 體外哺乳動物細(xì)胞基因突變試驗(yàn) (體細(xì)胞基因水平 ， 體外試驗(yàn) ) L5178Y 細(xì)胞基因突變試驗(yàn) V79 細(xì)胞基因突變試驗(yàn) ② 體外哺乳動物細(xì)胞染色體畸變試驗(yàn) (體細(xì)胞染色體水平 ， 體外試驗(yàn) ) ③ 小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn) (體細(xì)胞染色體水平 ， 體內(nèi)試 — 22— 驗(yàn) ) ④ 哺乳動物骨髓細(xì)胞染色體畸變試驗(yàn) (體細(xì)胞染色體水平 ， 體內(nèi)試驗(yàn) ) ⑤ 程序外 DNA 修復(fù)合成試驗(yàn) (DNA 水平，體外試驗(yàn) ) ⑥ 小鼠精子畸形試驗(yàn) (性細(xì)胞基因和染色體水平，體內(nèi)試驗(yàn) ) ⑦ 睪丸生殖細(xì)胞染 色體畸變試驗(yàn) (性細(xì)胞染色體水平 ， 體內(nèi)試驗(yàn) ) 小鼠精原細(xì)胞染色體畸變試驗(yàn) 小鼠精母細(xì)胞染色體畸變試驗(yàn) (3)第三階段（亞慢性毒性試驗(yàn)和致畸胎試驗(yàn)） 1)亞慢性毒性試驗(yàn) 2)致畸胎試驗(yàn) (4)第四階段（慢性毒性試驗(yàn)和致癌試驗(yàn)） 1)慢性毒性試驗(yàn) 2)致癌試驗(yàn) 各種消毒產(chǎn)品毒理學(xué)試驗(yàn)的規(guī)定 為便于對消毒劑進(jìn)行毒理學(xué)評價，將消毒劑分為三類。使用過程中，必需接觸皮膚的其它消毒劑，也應(yīng)增做完整皮膚刺激試驗(yàn)。 （ 2）高水平消毒法：可以殺滅各種微生物，對細(xì)菌芽孢殺滅達(dá)到消毒效果的方法。 （ 4）親水病毒（沒有脂質(zhì)包膜的病毒），例如甲型肝炎病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒等。 （ 4）根據(jù)消毒物品的性質(zhì)選擇消毒方法 選擇消毒方法時需考慮，一是要保護(hù)消毒物品不受損壞，二是使消毒方法易于發(fā)揮作用。 （ 4）各類傳染病 (包括非法定傳染病 )爆發(fā)流行時應(yīng)在當(dāng)?shù)丶膊☆A(yù)防控制和監(jiān)督機(jī)構(gòu)的監(jiān)督指導(dǎo)下，由有關(guān)單位及時進(jìn)行消毒，或由當(dāng)?shù)丶膊☆A(yù)防控制和監(jiān)督負(fù)責(zé)對其進(jìn)行消毒處理。 5)不明傳染病疫源地的消毒：應(yīng)根據(jù)流行病學(xué)指征確定消毒范圍和對象，采取最嚴(yán)格的消 毒方法進(jìn)行處理。 6)測量房屋、家具及地面需消毒的面積和體積，估算需消毒的污水量。 17)填寫疫點(diǎn)終末消毒工作記錄。按此方法進(jìn)行的試驗(yàn)，只是對消毒劑的殺菌能力的重要方面進(jìn)行驗(yàn)證，側(cè)重反映消毒劑的實(shí)用劑量與殺菌能力。 （ 13）離心機(jī)。 2）用 吸管吸取 ml～ 第 3代～ 5代的 18h～ 24h 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)物，接種于羅氏瓶中營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基表面，將其搖動使菌液布滿營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的表面，再將多余肉湯培養(yǎng)物吸出， 將羅氏瓶 置 于 37℃溫箱內(nèi)，培養(yǎng) 5d～ 7d。 6）用無菌棉花或紗布過濾芽孢懸液，清除其中的瓊脂凝塊。 （ 2）所用載體（除濾紙片外）于染菌前，應(yīng)進(jìn)行脫脂處理。 （ 5）每個菌片的回收菌數(shù)，按活菌培養(yǎng)計數(shù)所得結(jié)果，應(yīng)為 5179。其操作程序如下。平皿加樣前，應(yīng)先按組編號，以免弄混。 （ 2）認(rèn)真檢查試驗(yàn)器材有無破損（要 特別注意試管底的裂痕和破洞），以防丟失樣本和污染環(huán)境。 （ 4）必須按規(guī)定方法進(jìn)行鑒定試驗(yàn)，并認(rèn)為合格者方可在相應(yīng)的消毒試驗(yàn)中使用。 注意事項(xiàng) （ 1）處理時應(yīng)嚴(yán)守?zé)o菌操作要求，所有試液須無菌，接觸樣本和試液的器材（如吸管、平皿、試管、濾材等）亦均須經(jīng)滅菌，以免污染樣本，影響試驗(yàn)結(jié)果。 （ 2）過濾沖洗法 將經(jīng)消毒劑作用過的微生物樣本，立即加入適量稀釋液中混勻（通過適量稀釋，可減輕消毒劑的持續(xù)作用），并傾入裝有微孔濾膜的濾器內(nèi)，接真空泵抽吸過濾（或加壓過濾）后，再加適量稀釋液沖洗，同時過濾，可去除殘留的消毒劑。傾注和搖動時，動作應(yīng)盡量平穩(wěn)，以利細(xì)菌分散均勻，便于計數(shù)菌落。 （ 9）對菌片和采樣棉拭洗液的活菌培養(yǎng)計數(shù)，先按各試驗(yàn)要求處理（如去除殘留消毒劑等），而后取其最終樣液按上法進(jìn)行培養(yǎng)計數(shù)。以上操作應(yīng)嚴(yán)格按無菌要求進(jìn)行。 （ 3） 細(xì)菌繁殖體在烤干過程中，可引起部分死亡，如銅綠假單胞菌在 37℃ 干 燥 過程中，滴度最高可下降 1個對數(shù)值。 （ 4）載體經(jīng)壓力蒸汽滅菌后，使用滴染法 染菌 。待冷至室溫后，保存于 4℃ 冰箱中備用。②將涂片放入平皿內(nèi)，片上放兩層濾紙，滴加足量的 % 孔雀綠水溶液。 — 31— 2） 取菌種第 3代～ 14代的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面新鮮培養(yǎng)物（ 18h～24h），用 吸取 ml～ ， 反復(fù)吹吸，洗下菌苔。 （ 3）磷酸鹽緩沖液 ： 見附錄 A。 3）消毒過程中，不得吸煙、飲食。 12)病人用過的餐（飲）具、污染的衣物若不能集中在消毒站消毒時，可在疫點(diǎn)進(jìn)行煮沸、浸泡或擦拭消毒?！傲尽笔侵福孩傧痉置诨蚺判刮铮ㄈ绾粑纻魅静≈饕獮榭诒欠置谖铮c道傳染病主要為糞便，接觸性傳染病主要為膿液、痂皮等）；②消毒生活用具；③消毒雙手；④消毒衣服、被單；⑤消毒患者居室；⑥消毒生活污水、污物。 (2)防護(hù)用品：工作服、隔離服、防護(hù)眼鏡、口罩、防鼠疫口罩、帽子、手套、長筒膠靴、毛巾、污物袋、手電筒、皮卷尺、雨衣、長柄毛刷、裝工作衣的布袋（ 30cm179。普通病人用過的物品，可先清洗后消毒。 1）高度危險性物品，必須選用滅菌方法處理。 醫(yī)用物品對人體的危險性分類 醫(yī)用物品對人體的危險性是指物品污染后造成危害的程度。 （ 3）進(jìn)行安全性毒理學(xué)評價用受試物 根據(jù)不同毒理學(xué)試驗(yàn)的目的 ， 采用相應(yīng)的受試物。首先必須 做急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)、亞急性毒性試驗(yàn)和兩項(xiàng)致突變試驗(yàn) (包括反映基因水平和染色體水平兩 種類型試驗(yàn) )。所用容量瓶和量筒等不能加熱。若所測消毒劑濃度過高 ， 可適當(dāng)減少取樣量或經(jīng)稀釋后測定，以減少測定結(jié)果的誤差；若消毒劑濃度過低，可增加取樣量或采用靈敏度更高的方法進(jìn)行測定。 檢驗(yàn)報告的結(jié)果部分，用表格將各試驗(yàn)組、陽性對照、陰性對照及其他對照組的數(shù) 據(jù)列出（定性的對照可用文字加以說明）。必要的器材和試劑應(yīng)重新制備或滅菌，以防產(chǎn)生系統(tǒng)性誤差。對器械、耐壓或電氣性能及關(guān)鍵部件的使用壽命等的鑒定，由相關(guān)行業(yè)計量認(rèn)證考核合格的檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)按其標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測，提供檢驗(yàn)報告。 （ 3）穩(wěn)定性試驗(yàn) ： 所有消毒劑均應(yīng) 進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)，可用加速實(shí)驗(yàn)法 37℃， 90d 和 /或 54℃， 14d；也可選用室溫留樣法。若使用時間相同，選擇各種用途中最低的使用濃度。對無菌產(chǎn)品的無菌檢查試驗(yàn) ， 必須在 100 級潔凈度的實(shí)驗(yàn)室 ， 或 100 級層流操作柜中進(jìn)行。 SAL 通常表示為10n。 滅菌劑 sterilant 可殺滅一切微生物 (包括細(xì)菌芽孢 )使其達(dá)到滅菌要求的制劑。 消毒劑 disinfectant 用于殺滅傳播媒介上的微生物使其達(dá)消毒或滅菌要求的制劑。 滅菌保證水平 sterility assurance level， SAL 指滅菌處理后單位產(chǎn)品上存在活微生 物的概率。為避免污染應(yīng)在相對正壓潔凈條件下進(jìn)行，但有時因特殊需要，用致病菌作指示菌時，則應(yīng)在生物安全柜（負(fù)壓）內(nèi)進(jìn)行。對多用途的消毒劑，消毒對象所涉及的微生物相同時，若使用濃度相同，選擇各種用途中最短的作用時間。對于需調(diào)節(jié) pH 后使用的消毒劑則應(yīng)在 pH 調(diào)節(jié)劑加入前后分別測定 pH 值。 消毒器械鑒定測試項(xiàng)目的確定 消毒器械應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品功能與用途要求選擇以下項(xiàng)目進(jìn)行檢測。 對重復(fù)試驗(yàn)的要求 對所要求的重復(fù)性試驗(yàn)，并不是只在同次試驗(yàn)中增加菌片數(shù) ， 或多作幾份樣本，而是應(yīng)分期分批進(jìn)行。凡是檢驗(yàn)方法與本規(guī)范不一致或有更改者，必須詳細(xì)敘述補(bǔ)充或刪改的部分， 以便閱讀者了解檢驗(yàn)工作的全過程 ， 對檢驗(yàn)樣品的質(zhì)量作出恰如其分的評價。文內(nèi)規(guī)定滴定時所取樣本的質(zhì)量或容量 (包括濃度 )，均根據(jù)此原則設(shè)定。玻璃儀器清洗干凈，用蒸餾水沖洗 3 遍。 (2)第二類消毒劑：指國外已批準(zhǔn)生產(chǎn)、現(xiàn)由我國首次生 產(chǎn)或首次進(jìn)口的消毒劑。 （ 2）提供受試樣品與毒性有關(guān)的物理、化學(xué)性質(zhì)的資料，以及消毒劑的配方、主要成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)和含量、 pH 值等，但植物成分組配的消毒劑可不提供化學(xué)結(jié)構(gòu)。如單鏈季銨鹽類消毒劑 (苯扎溴銨等 )、雙胍類消毒劑如氯己定、植物類消毒劑和汞、銀、銅等金屬離子消毒劑等進(jìn)行消毒的方法。 （ 2）根據(jù)物品污染后的危害程度選擇消毒、滅菌的方法。 消毒、滅菌基本程序 被甲類傳染病病人，以及肝炎、結(jié)核、艾滋病、炭疽病等病人的排泄物、分泌物、血液等污染的器材和物品，應(yīng)先消毒再清洗，于使用前再按物品危險性的種類，選擇合理的消毒、滅菌方法進(jìn)行消毒或滅菌處理。 (1)消毒工具：背負(fù)式噴霧器、氣溶膠噴霧器、機(jī)動噴霧器、配藥桶（ 10L）、刻度量杯（筒）、工具箱、消毒車?！叭珠_”是指：①分住室（條件不具 備可用布簾隔開，至少要分床）；②分飲食；③分生活