【正文】 ，并且脂質(zhì)和乳化劑的混合液的粘度大于溶 劑，所以乳勻需要更多的能量，導(dǎo)致 SLN 的粒徑增大。以三棕櫚酸甘油酯、磷脂和甘膽酸鈉為輔料經(jīng)高壓乳勻法制備的 SLN 的平均粒徑為 205nm；如果以 Pluronic F68 代替磷脂， SLN 的平均粒徑為 ；用甘膽酸鈉代替磷脂，則粒徑為 。濾過(guò)滅菌要求加壓操作并且樣品的直徑不能大于 m，這對(duì) SLN 來(lái)講是比較困難的。 一年以后所有體系的 171 粒徑均增大 ， Acidan N12 SLN增大到 350nm，廿二碳烷酸 SLN增大到 120nm，硬脂酸 SLN增大到 450nm，但是沒(méi)有微米級(jí)的粒子出現(xiàn)。 （ 1）冷凍干燥法 樣品經(jīng)冷凍干燥變成固態(tài)后，具有更好的化學(xué)和物理穩(wěn)定性。因 此提高藥物的包封率尤為重要 [17]。對(duì)于膠體體系，三脂肪酸甘油酯的熔化與結(jié)晶的溫度與單脂肪酸甘油酯不同，混合脂肪酸甘油酯和高熔點(diǎn)的脂肪酸酯的納米粒形成過(guò)冷態(tài)的傾向較小。 室溫下，三脂肪酸甘油酯納米粒比塊體材料更容易轉(zhuǎn)變成穩(wěn)定的晶型，這表明膠體分散體具有更高的動(dòng)力學(xué)特性。但對(duì)其界面的相變動(dòng)力學(xué)的影響對(duì)比核的影響更大。在冷卻貯存過(guò)程中，它容易形成半固體導(dǎo)致膠凝。提高基質(zhì)的粘度能降低藥物在載體中的擴(kuò)散系數(shù)，因此 SLN 比納米乳更有優(yōu)勢(shì)。 1．注射給藥 SLN 最初是為靜脈注射的靶向控釋藥物而設(shè)計(jì)。通過(guò)優(yōu)化乳化劑和脂質(zhì)的種 類和劑量，可以得到在胃腸道中穩(wěn)定的 SLN。但是鯨蠟醇十六酸酯制成的 SLN在脂質(zhì)含量高達(dá) 30%~40%時(shí)，竟然保持了膠態(tài)粒 子的大小，且系統(tǒng)的可塑性也有很大增加。肺部的粒子易于被巨噬細(xì)胞吞噬，因此可以用脂質(zhì)納米粒來(lái)治療 RES 系統(tǒng)的感染。 人們對(duì) SLN 如何包封藥物已經(jīng)進(jìn)行了很多研究，但是對(duì) SLN 藥物釋放機(jī)理的研究卻很少。藥物在水中的溶解度越大，則重新溶解到水相中的藥物量越多。 物理穩(wěn)定性差、對(duì)脂溶性差的藥物包封率低都是制約 SLN應(yīng)用的瓶頸。近年來(lái)，脂質(zhì)體主要分為以下四大類： ① 普通脂質(zhì)體， ② 陽(yáng)離子脂質(zhì)體， ③長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體， ④ 免疫脂質(zhì)體等（圖 64）。本文僅根據(jù)脂質(zhì)體的用途來(lái)介紹近年來(lái)脂質(zhì)體的研究進(jìn)展。近年 發(fā)展起來(lái)的體外或體內(nèi)基因轉(zhuǎn)移技術(shù)有十余種，可分為四種類型：細(xì)胞學(xué)方法（如細(xì)胞融合，染色體介導(dǎo)等）；理化方法（如磷酸鈣溶液共沉淀，電穿孔，顯微注射，顆粒轟擊等）；病毒載體（如重組 DNA 或 RNA 病毒）；直接注射法（如裸露或脂質(zhì)體包埋 DNA 血管內(nèi)注射等）。另外，構(gòu)效關(guān)系表明，分子中氨基的數(shù)目越多，氨基與親水基團(tuán)的距離越遠(yuǎn)，則基因轉(zhuǎn)移的效果越好。如最常使用的 DOTMA/DOPE 脂質(zhì)體，DOTMA 作為陽(yáng)離子脂質(zhì)靠靜電作用與核苷酸結(jié)合，而 DOPE 則作為可融性脂質(zhì)促進(jìn)陽(yáng)離子脂質(zhì)與細(xì)胞膜的融合。通過(guò)內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞 187 的陽(yáng)離子脂質(zhì)體 DNA 復(fù)合物必須與核內(nèi)體融合才能將 DNA 釋放 出來(lái)。 PCL 的制備方法同普通脂質(zhì)體相似，如果以三乙酰 PEI600 和 DOPE 為主要原料（摩爾比為 :1）， PCL帶有很強(qiáng)的正電荷， Zeta 為（ 177。同 DCchol/DOPE（ 6:4）， DOTMA/DOPE（ 1:1）相比， ManC4chol/DCchol/DOPE(2:2:6)DNA 復(fù)合物更易被大鼠腹膜巨噬細(xì)胞特異性識(shí)別，轉(zhuǎn)染效率更高 [51]。 2．長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的表面性質(zhì) 從目前情況看，長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的表面通常被糖脂或不同聚合物所修飾。但由于神經(jīng)節(jié)苷酯價(jià)格昂貴，合成和提取都較困難，不便于研究和大量生產(chǎn)。其中 PEG 具有便宜、易得，既溶于水又溶于多種有機(jī)溶劑，獨(dú)特的端基反應(yīng)性和可修飾性以及沒(méi)有免疫原性等優(yōu)點(diǎn)，故 PEG 修 飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體引起了人們廣泛的研究興趣。通常在大粒子 (400nm~500nm)上修飾層比在小粒子 (60nm~140 nm)上要薄，疏水性更強(qiáng)。紅細(xì)胞之所以能在血循環(huán)中存在較長(zhǎng)時(shí)間，起作用的是它的唾液酸外層（主要為神經(jīng)節(jié)苷酯 GM1）。例如，蛋白識(shí)別過(guò)程可以是可逆的（如免疫球蛋白），也可以是不可逆的（如補(bǔ)體 C3），調(diào)理過(guò)程是可逆的，然而胞飲過(guò)程是不可逆的。③脂質(zhì)的種類，不同的脂質(zhì)可以影響脂質(zhì)體復(fù)合物的體內(nèi)體外的轉(zhuǎn)染效率。如何促進(jìn) DNA 進(jìn)入細(xì)胞核尚待進(jìn)一步研究。 （ 3）陽(yáng)離子脂質(zhì)體 DNA 復(fù)合物在細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn) ①陽(yáng)離子脂質(zhì)體 DNA 復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞 基因轉(zhuǎn)染的第一步就是 DNA 進(jìn)入細(xì)胞。疏水烴鏈的增加與飽和度的降低（特別是形成反式構(gòu)型）有利于六方晶相構(gòu)型 的形成。 3．脂質(zhì)體介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染的機(jī)制 雖然有關(guān)脂質(zhì)體復(fù)合物被細(xì)胞攝取的機(jī)理仍有很多爭(zhēng)論，但可以肯定的是，內(nèi)吞作用是這一機(jī)制的主要過(guò)程，脂質(zhì)體復(fù)合物與細(xì)胞膜接觸時(shí)最先出現(xiàn)的相互作用是靜電作用。 184 2．陽(yáng)離子脂質(zhì)體的應(yīng)用 陽(yáng)離子脂質(zhì)體主要是作為非病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移載體而在基因治療中廣泛應(yīng)用。 （ 4） 中等大小單層脂質(zhì)體（ intermediatesized unilamellar vesicles， IUV） IUV 指的是直徑在100nm~1000nm 之間的單層脂質(zhì)體。 4． 廣泛性：脂質(zhì)體可以和細(xì)胞相互作用或被細(xì)胞吞噬、攝取，從而使那些理化性質(zhì)不穩(wěn)定的藥物（如 DNA 分子）進(jìn)入胞內(nèi)成為可能。當(dāng)使用親水性的 Poloxamine 908 和 Poloxamer 407 對(duì) SLN 進(jìn)行表面修飾后靜注給藥，可降低 RES 巨噬細(xì)胞的吞噬，延長(zhǎng)藥物在血液中的循環(huán)時(shí)間，與同樣進(jìn)行過(guò)表面修飾的聚苯乙烯納米粒相比，可使 RES 的吞噬作用降低 8%~15%。釋放初期的突釋劑量對(duì)藥物的快速起效是有利的。脂質(zhì)轉(zhuǎn)變?yōu)楦€(wěn)定的晶形后，晶格變得比較完整，包封藥物的效率變得很低。另外，脂質(zhì)納米粒粉末可以制成干粉吸入劑，在噴霧干燥過(guò)程中，可以使用乳糖作為保護(hù)劑。載 藥量低和低粘度對(duì)于透皮制劑來(lái)說(shuō)都是不利的。在 ，喜樹(shù)堿內(nèi)酯環(huán)的開(kāi)環(huán)半衰期分別為： 。但是研究最多的還是靜脈注射。如易水解的藥物分子在水中比在脂質(zhì)中更容易溶解，更容易富集在粒子的表面。廣角衍射在 和 ~ 的范圍變化顯著。 3． 表面活性劑的影響 表面活性劑的加入能顯著影響三脂肪酸甘油酯的晶型轉(zhuǎn)變。同塊體材料相比，短鏈脂肪酸甘油酯納米粒晶型轉(zhuǎn)變的速度比長(zhǎng)鏈脂肪酸甘油酯快 [20]。通過(guò)定量的高分辨 1HNMR[19]測(cè)定發(fā)現(xiàn)，當(dāng)熔融乳化納米粒冷卻到其結(jié)晶溫度以下時(shí)，脂肪酸酯分子仍有很強(qiáng)的流動(dòng)性。冷凍防護(hù)劑在乳勻之前加入效果最好，平均粒徑在凍干過(guò)程中幾乎不發(fā) 生改變。 5．干燥 盡管有文獻(xiàn)報(bào)道 SLN的水溶液分散體的粒徑能穩(wěn)定 12~36個(gè) 月，但由于 SLN分 散體是熱力學(xué)不穩(wěn)定體系，通常在短時(shí)間里就出現(xiàn)粒徑的增大、粒子聚合甚至膠凝的現(xiàn)象。這些結(jié)果表明藥物的加入，不但能降低體系的穩(wěn)定性，而且改變了乳化層的性質(zhì)。而在高于相變溫度時(shí)制得的 SLN 更穩(wěn)定，因?yàn)榇藭r(shí)磷脂的脂肪酸鏈能自由伸展，更充分地發(fā)揮作用 [11]。這有可能影響 SLN 的 zeta 電位，延緩結(jié)晶過(guò)程等，從而影響 SLN 的分散性能。如果脂質(zhì)的含量很高時(shí)，甚至無(wú)法用超聲法來(lái)乳勻。 （ 3）乳化蒸發(fā)法 SLN 的制備 也可以采用 PNP 的制備方法，但它的一個(gè)明顯不足是使用了有機(jī)溶劑。 乳勻有兩種基本的方法：熱乳勻和冷乳勻 [3,4]，這兩種方法都可以制備 SLN，但乳勻之前都需將藥物溶解或分散在熔化的脂質(zhì)中，即初步乳化。本章主要對(duì)固體脂質(zhì)納米粒、脂質(zhì) 體和藥質(zhì)體等進(jìn)行介紹。還可采用高壓乳勻法進(jìn)行規(guī)?；a(chǎn)。并且雖然乳勻的步驟可以重復(fù)幾次，但每次乳勻都會(huì)導(dǎo)致體系溫度的升高，平均壓力每升高 50MPa，可使體系的溫度增加 10℃。微乳一方面具有乳液的一些性質(zhì)（如可以用激光光散 射法測(cè)量它的粒徑），另一方面它又具有真溶液的一些性質(zhì)（如藥物在微乳中有一定的飽和濃度，而不是像乳劑那樣具有一定的油 /水分配比例）。但如果用磷脂和非離子型表面活性劑作為乳化劑，則高壓乳勻法要優(yōu)于乳化蒸發(fā)法。當(dāng)使用磷脂 甘膽酸鈉為乳化劑時(shí)，微乳法得到的三棕櫚酸甘油酯 SLN 的粒徑遠(yuǎn)小于熔融 乳勻工藝，但以磷脂 四丁酚醛為乳化劑所制得的 SLN 粒徑遠(yuǎn)大于高壓乳勻法所制得的 SLN 的粒徑，這可能與四丁酚醛在較高溫度下乳化能力較強(qiáng)有關(guān) [10]。濕熱滅菌法是一種常 用且可靠的滅菌方法，它曾經(jīng)用于脂質(zhì)體的滅菌，發(fā)現(xiàn)加溫導(dǎo)致樣品物理穩(wěn)定性的下降，經(jīng)滅菌后都出現(xiàn)了不同程度的團(tuán)聚。濕熱蒸汽滅菌對(duì)粒子的 zeta電位 影響不大。但是在凍干過(guò)程中有兩種相變會(huì)影響其穩(wěn)定性。 冷凍的過(guò)程會(huì)影響晶體的結(jié)構(gòu)和凍干粉的性質(zhì)。這是因?yàn)殚L(zhǎng)鏈脂肪酸可作為結(jié)晶中心使過(guò)冷態(tài)的結(jié)晶溫度提高。同塊體材料相比，將脂肪酸酯納米粒結(jié)晶轉(zhuǎn)變成較穩(wěn)定的α 型時(shí)間較長(zhǎng)，但結(jié)晶后，其立即轉(zhuǎn)變成β ’型，表明脂肪酸酯具有較低的結(jié)晶溫度。 由于甘膽酸鈉穩(wěn)定的 SLN α 晶型的穩(wěn)定性較高，因此可以用來(lái)研究經(jīng)過(guò)多晶型轉(zhuǎn)化后基質(zhì)的結(jié)構(gòu)及粒子的形狀。但在一般情況下，該體系中加入適量的粒子型或者非離子型表面活性劑，如甘膽酸鈉、四丁醛或 poloxamer 則可防止膠凝。但是對(duì)于膠態(tài) 藥物載體來(lái)說(shuō)，影響藥物穩(wěn)定性的因素很多，而且在相同條件下， SLN 分散體的表面積比納米乳要大的多，這是因?yàn)?SLN 粒子的形狀是非球形的。脂質(zhì)液滴（納米乳）轉(zhuǎn)變成 為固體（ SLN）以后，藥物的擴(kuò)散系數(shù)減小，從而減慢了藥物的釋放。一般認(rèn)為，酸性的、高離子強(qiáng)度的胃液微環(huán)境，易導(dǎo)致納米粒聚合。這種體系的流變學(xué)特性和傳統(tǒng)的皮膚用藥相似。 SLN 藥物的釋放 影響 SLN 載藥量的因素很多，其中主要有：藥物在熔融油相中的溶解度；藥物熔融物和脂質(zhì)基質(zhì)熔融物的可混合性；固態(tài)脂質(zhì)基質(zhì)的物理和化學(xué)結(jié)構(gòu)；脂質(zhì)材料的晶型等。大多數(shù)體外釋放機(jī)理的研究都是由 Mehnert 等 [3133]以丁卡因和依托度酸為模型藥物完成的。這意味著溫度越高、表面活性劑濃度越大，納米粒的載藥量越低。包封率受多種因素的影響，如：藥物在熔融脂質(zhì)中溶解度、藥物與載體在熔融時(shí)的相容性、 SLN的理化結(jié)構(gòu)、脂質(zhì)多晶型、勻質(zhì)溫度、水相乳化劑濃度等。從圖中可以看出它們的一些基本特點(diǎn)，普通脂質(zhì)體一般呈中性，陽(yáng)離子脂質(zhì)體帶正電荷，通過(guò)單鍵、雙鍵和多重鍵結(jié)合；長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體主要由高分子物質(zhì)或葡萄糖醛酸等物質(zhì)修飾；免疫脂質(zhì)體是含有抗體或抗體片段的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體。 陽(yáng)離子脂質(zhì)體 1．陽(yáng)離子脂質(zhì)體的結(jié)構(gòu)形式 陽(yáng)離子脂質(zhì)體通常由一種陽(yáng)離子親水脂分子和二油酰基磷脂酰乙醇胺（ DOPE）組成， DOPE 作為“脂質(zhì)伴侶”是形成穩(wěn)定的單脂雙層陽(yáng)離子脂質(zhì)體所必需的。但眾多的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，利用病毒載體和脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移是最有前途的方法，后者已被美國(guó)癌癥協(xié)會(huì)批準(zhǔn)為臨床基因治療的第一方案。 (1) 陽(yáng)離子脂質(zhì)體與基因形成復(fù)合物 質(zhì)粒 DNA 可以被包裹于脂質(zhì)體內(nèi)，或者與脂質(zhì)體表面借靜電作用形成復(fù)合物。這也是 DOPE 成為“脂質(zhì)伴侶”的原因。在 DNA 從核內(nèi)體的脫離過(guò)程中，脂質(zhì)的融合起到十分重要的作用。 ） mV, 而 PC 為（ 177。圖 66 [52]進(jìn)一步說(shuō)明了不同類型的陽(yáng)離子脂質(zhì)體 DNA 復(fù)合 物小鼠靜脈注射后在組織中的靶向性及其轉(zhuǎn)染效率。盡管其化學(xué)結(jié)構(gòu)不同，但它們有一個(gè)共同點(diǎn)，即在脂質(zhì)體表面能形成一個(gè)親水的伸展 的分子拉鏈。長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體目前主要有剛性脂質(zhì)體，表面修飾脂質(zhì)體和其它類型，這類脂質(zhì)體可能是因?yàn)槟承┠茏晕易R(shí)別的分子與脂質(zhì)體結(jié)合后，能起到保護(hù)脂質(zhì)體不被 RES 識(shí)別的作用（見(jiàn)圖 68[54]）。 研究表明，用 PEG 及非離子表面活性劑包衣的脂質(zhì)體被肝、脾攝取減少，脂質(zhì)體在體內(nèi)循環(huán)時(shí)間延長(zhǎng)。粒徑的大小可以用于控制微粒制劑的靶向性，同時(shí)粒徑大小也能影響對(duì)其進(jìn)行長(zhǎng)循環(huán)表面修飾的程度。 3．實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)循環(huán)的途徑 最初研究長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體主要是從生物學(xué)角度考慮，制備血循環(huán)中長(zhǎng)壽命的脂質(zhì)體。該動(dòng)力學(xué)過(guò)程可以用經(jīng)典的化學(xué)反應(yīng)來(lái)描述（圖 67[53]）。②電荷，糖基化陽(yáng)離子脂質(zhì)體 質(zhì)粒 DNA 復(fù)合物所帶的正電荷不能太高，否則不易與受體結(jié)合。對(duì)處于有絲分裂期的細(xì)胞而言，由于核膜已經(jīng)破裂，質(zhì)粒 DNA 容易進(jìn)入核內(nèi)；對(duì)于非分裂期細(xì)胞而言，質(zhì)粒 DNA 能否進(jìn)入核內(nèi)是轉(zhuǎn)染能否成功的關(guān)鍵。這是因?yàn)榉蚊?xì)血管是陽(yáng)離子脂質(zhì)體 [32P]DNA 復(fù)合物靜脈注射后面臨的第一個(gè)“陷阱”。極性頭部的有效體積大小還受靜電排斥力和氫鍵的進(jìn)一步影響。結(jié)構(gòu)分析顯示，這種陽(yáng)離子聚多肽脂質(zhì)體為一電荷密集的、脂質(zhì)含量高、粒徑小于 100nm 的球形納米粒 [40,41]。陽(yáng) 離子脂質(zhì)的疏水錨著區(qū)的主要功能是既為脂質(zhì)雙層提供足夠的流動(dòng)性，又能使脂質(zhì)雙層膜維持一定的剛性，以便為陽(yáng)離子脂質(zhì)體與體內(nèi)的脂質(zhì)融合創(chuàng)造條件。 （ 3）大單層脂質(zhì)體（ large unilamellar vesicles， LUV） 這是指直徑大于 1000nm 的由單層磷脂雙分子層膜組成的脂質(zhì)體。 3． 保護(hù)性：藥物被脂質(zhì)體包封 后，受到脂質(zhì)體雙層膜的保護(hù)，可以顯著提高穩(wěn)定性，同時(shí)，還免受體內(nèi)的降解酶和免疫系統(tǒng)的分解，提高藥物在體內(nèi)的穩(wěn)定性。 PLA 納米粒、 PLGA 納米粒和SLN 使人粒性白細(xì)胞的存活率降低 50%的濃度分別為 %， %，和大于 10%，這說(shuō)明 SLN 的毒性最低 [34,35]，更適合作 為靜脈給藥系統(tǒng)藥物的載體。在脫氫皮質(zhì)醇納米粒中，藥物被緩慢釋放而無(wú)明顯的突釋效應(yīng)，但是釋放曲線上開(kāi)始仍會(huì)有一個(gè)釋放較快的階段，隨之是一個(gè)相對(duì)緩慢的階段。納米粒中脂質(zhì)結(jié)晶部分為α構(gòu)型，而常規(guī)狀態(tài)下的結(jié)晶大部分為β ’構(gòu)型，并很快轉(zhuǎn)變?yōu)棣聵?gòu)型。