20xx年醫(yī)學(xué)專題—雙波長法快速測(cè)定蛋白質(zhì)含量(專業(yè)版)
【正文】 在測(cè)定過程中隨著蛋白質(zhì)濃度的增加 ,游離考馬斯亮蘭染料逐漸減少 ,因此在蛋白質(zhì)濃度發(fā)生改變時(shí) ,不但染料 蛋白質(zhì)結(jié)合物在 595nm的品僅 100μl或更少 ,而且一次可檢測(cè)大量的標(biāo)本 ,過程自動(dòng)化程度較高 ,適用于樣品體積較少和大量樣品的檢測(cè)。2. 2 蛋白質(zhì)檢測(cè)的線性范圍 :為了適合酶標(biāo)儀濾光片的檢測(cè) ,以 595nm和 450nm作為檢測(cè)波長 ,將 BSA從 1mg倍比稀釋至 240pg/ ml ,以檢測(cè)樣品在各濃度 C時(shí)的吸收度。在酸性條件下 ,考馬斯亮蘭染料呈紅色 ,雙蒸水作為溶劑。結(jié)果 此種改進(jìn)不但提高了考馬斯亮蘭法檢測(cè)蛋白質(zhì)的靈敏度 ( 0. 127μg/ ml)和檢測(cè)范圍 ( 0. 127～31. 25μg/ ml) ,而且使大量標(biāo)本的檢測(cè)可在一次檢測(cè)過程中完成。本實(shí)驗(yàn)擬用雙波長代替單波測(cè)定法[ 1 ]。1. 4 蛋白質(zhì)測(cè)定 :方法同上 ,樣品和染料用量減少1/ 4。A595/A450 C直線關(guān)系為 y = 0. 2011x + 1. 0395 ,相關(guān)系數(shù) r2 = 0. 9965 。其檢測(cè)池所需樣品體積至少 1ml ,因此所需的檢測(cè)樣品較多 ,浪費(fèi)較大。同理作圖 3c、3d ,A595單波長檢測(cè)上限為 7. 81μg/ ml ,最低檢測(cè)下限為 0. 976μg/ ml。用紫外 可見分光光度計(jì) (上海3國防科技預(yù)研項(xiàng)目 ( Y5573162)雙波長法快速測(cè)定蛋白質(zhì)含量 3but not t he absorbance of 590nm ,and replace t he UV/ V IS spect rophotometer wit h t he microplate au2t he sensitivit y of t he assay about 20 fold ,also make a lot of samples be detected in one cycle. Conclu2而當(dāng)它與蛋白質(zhì)結(jié)合時(shí)變成蘭色。 two colorimet ric 。結(jié)論 雙波長法可作為一種快速、敏的蛋白質(zhì)檢測(cè)方法。傳統(tǒng)考馬斯亮蘭法利用考馬斯亮蘭 蛋白 W/ V) ,最后加蒸餾水至 200ml ,此染料于 4℃避光結(jié)合物最大吸收波長 595nm
環(huán)評(píng)公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1